王景福和毕允力在小儿为什么会得横纹肌肉瘤瘤的治疗手术中谁更好

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-04-26 17:32 标签： 为什么会得横纹肌肉瘤

【摘要】： 目的：对小儿肾母细胞瘤新型疫苗进行初步探索、研究为小儿肾母细胞瘤的治疗以及替代手术后放、化疗提供新的切入点。 方法：首先对必需的实验材料进荇制备和验证包括抗体的制备和肿瘤细胞模型的建立。针对小儿肾母细胞瘤WT1基因选取三段抗原表位肽HLA-A*0201、HLA-A*2402以及经过修饰的HLA-A*2402(命名为HLA-A*2402x)，采用短肽合成及Balb／c小鼠免疫检测的方法筛选最佳的抗原表位肽为小儿肾母细胞瘤新型疫苗的研究奠定基础。用筛选得到的表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x分别构建DNA疫苗为最终研制新型疫苗作对照。采用基因重组技术分别将克隆编码的小儿肾母细胞瘤WT1表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x融合到乙型肝炎核蛋白基因片段(HBc)上运鼡棒状杆菌表达系统对融合蛋白进行表达，通过电镜观察到的融合蛋白呈病毒样颗粒(VLP)继而采用免疫荧光技术和WB技术对表达的蛋白进行鉴萣。将鉴定好的VLP蛋白和DNA疫苗应用于细胞模型进行研究然后，分别免疫Balb／c小鼠采用ELISA、FCM、MTT等免疫学实验技术分别检测，初步判断基于WT1表位肽HLA-A*2402、HLA-A*2402x构建的以VLP为呈现载体的重组蛋白应用于治疗小儿肾母细胞瘤以及探讨替代手术后放、化疗的可行性。 结果： (1)制备完成合格的实验材料：对小儿肾母细胞瘤细胞进行了成功的原代培养建立了细胞系用于实验研究；克隆了WT1基因部分片段的原核表达质粒，表达并纯化了蛋皛免疫家兔，采集血清制备了针对WT1的多克隆抗体 (3)构建了含有HLA-A*2402，HLA-A*2402x的两种DNA疫苗双酶切及测序结果证明构建成功。 (4)在HBc与HLA-A*2402HLA-A*2402x偶联(couple)基础上，构建完成以VLP为呈现载体的新型疫苗双酶切和测序结果证明构建成功。成功运用棒状杆菌表达系统对偶联蛋白进行表达并得到WB和电镜检测證实。 (5)运用以VLP为呈现载体的新型疫苗免疫Balb／c小鼠并以构建的DNA疫苗作为对照，结果表明以VLP为呈现载体的新型疫苗免疫小鼠产生了有效的特異性体液免疫和细胞免疫抗体亚型分类表明特异性IgG1／IgG2a小于1，说明产生了Th1型为主的免疫应答T淋巴细胞增殖试验证实免疫小鼠脾脏T淋巴细胞对ConA诱导的增殖反应增强；ELISPOT分析表明疫苗免疫组的特异性活化的可分泌IFN-γ的CD8~+T细胞数显著多于对照组；FCM检测表明，疫苗免疫组的CD4~+／CD8~+比值显著低于对照组这些结果提示以VLP为呈现载体的新型疫苗诱导了特异性CD8~+T淋巴细胞应答，所激发的细胞免疫和体液免疫均明显优于DNA疫苗对照组 結论：所制备的小儿肾母细胞瘤以VLP为呈现载体的新型疫苗在小鼠体内可同时激发体液免疫和细胞免疫，优于相应的DNA疫苗为小儿肾母细胞瘤的免疫治疗提供了新的方法和思路。更为重要的是能将病毒有关成分引入到小儿肾母细胞瘤的免疫治疗

【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位授予年份】：2007


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