乙酸乙酯皂化反应速率常数的测定实验中为什么要是两种反应物的浓度相等?如何配置制定浓度的溶液?_百度作业帮
乙酸乙酯皂化反应速率常数的测定实验中为什么要是两种反应物的浓度相等?如何配置制定浓度的溶液?
乙酸乙酯皂化反应速率常数的测定实验中为什么要是两种反应物的浓度相等?如何配置制定浓度的溶液?
两种反应物始终同浓度才便于计算,自己看看计算过程就知道了.至于溶液通常用容量瓶和移液管或者分析天平配制
在反应过程中，各物质的浓度随时间而改变。不同反应时间的OH
的浓度，可以用标准酸滴定求得，也可以通过间接测量溶液的电导率而求出。
为了处理方便起见，设
　起始浓度相等.先计算配制0.02M乙酸已酯100ml所需乙酸已酯的质量。在100ml容量瓶中加入20ml蒸馏水，用分析天平准确称重，然后用滴管...你的浏览器禁用了JavaScript, 请开启后刷新浏览器获得更好的体验!
测定维生素c
一、保健食品中脂溶性维生素分析方法概况
保健食品中添加有维生素A、维生素D、维生素E、维生素K和b－胡萝卜素，一般情况下后两者使用相对较少 。鉴于脂溶性维生素的特点和样品基质情况，样品一般需要在皂化后经有机溶剂提取后测定。
1．维生素A
一般添加视黄醇醋酸酯和视黄醇棕榈酸酯两者之一或两种均添加。通常情况下成分复杂的样品需采用皂化反应后测定其中的视黄醇。成分相对简单的片剂和胶囊样品可采用溶剂提取直接测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。奶粉等产品可以使用胰酶或蛋白酶处理，溶剂提取后测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。
2．维生素E
一般情况下添加的是a－维生素E。成分相对简单的样品可采用溶剂提取直接测定。多数样品需要在皂化反应后测定其中的维生素E。
同时分析维生素E 4种结构并包括内标物，可使用如下正相柱：
（1）Nucleosil-NH2 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二恶烷=85：15，295nm
（2）Zorbax SIL 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二恶烷：异丙醇=985：10：5，295nm
（3） Lichrosorb-NH2 4.0×250mm，5μm，正己烷：异丙醇=99：1，295nm
（4） YMC－Pac A－600 （NH2），3μm，正己烷：异丙醇=98：2 Ex：290nm Em：325nm
一般情况下添加的是维生素D2和维生素D3中之一。目前维生素D的分析尚不如维生素A和维生素E成熟，主要原因为含量低，前处理过程损失多，与维生素E较难分离。现在采取的方法是采用乙腈＋甲醇＋水＝25+75+4作为流动相，根据样品中维生素D的情况，选择维生素D2和维生素D3互为内标。维生素D的分析对于色谱柱的要求较高，一般来讲250mm长度的Zobax SB-C18 比较适合分析要求。
4.b－胡萝卜素
b－胡萝卜素一般出现在植物性保健食品中，分析方法相对成熟。目前我们将维生素E、番茄红素和b－胡萝卜素通过采用不同的波长达到一次性分析的目的。样品采用二氯甲烷进行提取，分析过程需要加入抗氧化剂BHT对组分进行保护。
流动相为甲醇：乙腈＝50：50
色谱柱：Supelcosil RP C18
5.α－胡萝卜素
α－胡萝卜素目前也出现在保健食品中已有应用，初步将其与b－胡萝卜素一同分析。样品采用丙酮进行提取。
流动相为甲醇：甲基叔丁基醚：水＝310：76：14
色谱柱：Symmetry C18
检测波长：450nm
二．保健食品中水溶性维生素分析方法概况
目前建立并推广了一套的系统分析方法，通过选用多波长离子对高效液相色谱分析可以解决维生素B1、维生素B6、烟酸、烟酰胺、维生素C的分析。生物素、泛酸、叶酸需采用单独的高效液相色谱分析条件。维生素B2采用荧光分光光度法分析。
1．维生素B1（盐酸硫胺、硝酸硫胺）
分析维生素B1可采用盐酸苯海拉明作为内标。样品采用甲醇+水+磷酸提取。
流动相为硫酸月桂酯钠溶液（5g/530mL）：乙腈：磷酸＝530：470：0.4
色谱柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18
检测波长：260nm
2.维生素B1（呋喃硫胺）
有报道，呋喃硫胺是维生素B1的活性结构，在韩国、日本等产品中使用呋喃硫胺与盐酸硫胺、硝酸硫胺的色谱行为有较大区别。
流动相为甲醇：水：乙酸：PigB6＝450：530：20：20
色谱柱：m-Bondapak C18
检测波长：280nm
3.维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺
分析维生素B6、烟酸、烟酰胺可采用愈创木酚甘油醚作为内标。样品采用甲醇+水+磷酸提取。
流动相为1－癸烷磺酸钠溶液（1.22g/850mL）：乙腈：磷酸＝850：150：0.4
色谱柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18
在维生素类保健食品中烟酸应用极少，基本上添加的均为烟酰胺。
检测波长：280nm
功能性饮料中添加的咖啡因和苯甲酸也可以同时检测。根据大量实验认为液体类样品应使用TSK Gel-C18，固体样品两者皆可。
除颜色较深、含量较低、天然植物干制品外，一般样品中的维生素C均可以采用碘溶液滴定法进行测定。利用高效液相色谱法测定维生素C可利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流动相体系，因维生素C色谱保留时间较短，可以将降低其中乙腈的比例至5%。提取溶剂尽可能使用水，以避免在前面出现倒峰影响定量结果的准确。
检测波长：254nm
5.维生素B2
有关维生素B2的色谱分析方法有报道，但在实际样品分析过程中因保留时间较短且与其它峰难以较好分离，故采用将其转化为光黄素后进行荧光分光光度法分析。
6.泛酸（维生素B3）
泛酸采用液相色谱分析法进行检测，样品用水提取即可。
流动相：0.02M磷酸二氢钾溶液：乙腈=95：5，pH=3.0
色谱柱： m- Bondapak C18 300mm
检测波长：200nm
生物素的分析正在初步摸索阶段，目前采用pH=3.5 0.25M磷酸盐缓冲溶液：甲醇=77：23的流动相，检测波长200nm。 目前的需要解决的问题是保留时间较长，大约在30min左右；此外灵敏度较低。
叶酸一般使用弱碱性水溶液提取，为保证提取效果可以在50℃水浴中加热10min。
流动相：磷酸二氢钾缓冲溶液：甲醇=460:40，pH=6.0
色谱柱： m- Bondapak C18 300mm
检测波长：280nm
叶酸的研究方向：通过大量实际样品检测研究，发现在虫草等天然产物中存在与叶酸色谱保留时间完全一致的物质；不少样品中叶酸含量较低，拟采用固相萃取等技术作为前处理手段。
9.维生素B12
维生素B12的化学分析目前还是一个难题，对于含量较高，组成简单的原料和添加剂进行高效液相色笱单的原料和添加剂进行高效液相色失杂的多种维生素样品的分析方法正在摸索之中。
维生素B12的研究进展：虽然维生素B12有3个特征波长，但样品在不经处理的情况下也很难分析；在溶液中钴胺素很容易出现氰钴胺素、甲钴胺素、羟钴胺素等几种形式共存的现象。为避免出现上述问题，更好地去除样品中的干扰杂质并对样品中的维生素B12进行富集，目前采用加入表面活性物质、盐析、有机溶剂萃取等方法去除杂质，再通过固相萃取法进行富集的手段。
三、类维生素分析方法概况
1.肉碱（维生素BT）
肉碱若采用分光光度法检测比较繁杂，高效液相色谱法测定相对简单。利用高效液相色谱法测定肉碱同样利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流动相体系，因肉碱色谱保留时间虽比维生素C长但相对仍较短，因此流动相可以同维生素C一样。提取溶剂尽可能使用水或pH=5~6的水，以避免在前面出现倒峰影响定量结果的准确。
检测波长：210nm
对于维生素类样品中辅酶Q10的检测采用液相色谱分析法。样品中辅酶Q10使用正己烷作为提取溶剂。
色谱柱：TSK Gel-C18
流动相：乙腈+四氢呋喃+水=55+40+5
检测波长：280nm
对于维生素类样品中肌醇的检测建立了一套衍生化-气相色谱分析法。样品中肌醇经过提取，彻底去除水分后进行衍生化，正己烷提取后进行气相色谱分析。
衍生化试剂：三甲基氯硅烷：六甲基二硅氨烷：二甲基甲酰胺=1：2：8
色谱柱：BP-5弹性石英毛细管柱, 25m×0.32mm
色谱条件：载气 50mL/min
尾吹气 50 mL/min
氢气 40 mL/min
空气 500 mL/min
分流比 1：50
四、需要解决的问题及展望
1．解决样品前处理技术
（1）不少油性胶囊样品中加入了水溶性维生素，如何应用前处理手段解决提取、净化问题。
（2）对于含量较低的样品如何应用固相萃取等手段。
（3）对于目前原料微囊化制作技术如何应对。
2．解决色谱多组分分析技术
在目前现有的多组分分析技术的基础上，如何能将维生素B1并入维生素B6系列之中或创建新的流动相体系，再囊括维生素B2和叶酸等是今后研究的重要方面。
3. 解决分析过程快速化
在目前大量样品检测的基础上应归纳总结出样品前处理方法指南，确定样品组成和前处理方法之间的关系。
测定维生素C样品含量时,加入醋酸的目的是什么?
防止Vc被氧化，Vc在酸性环境中较稳定。
一、维生素A
目前维生素A都是合成的，来源：（1）从动物肝脏中得到；（2）从维生素前体而得到（维生素前体：主要指类胡萝卜素，主要是β-胡萝卜素）
维生素A的测定常用的方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。
对于三氯化锑比色法适用于样品中含VA高的样品，方法简便、快速、结果准确，但是对维生素A含量低的样品，如每克样品中含5~10μg维生素A时，这时样品由于受其脂溶性物质的干扰，不应用比色法测定。
对于紫外分光光度法不必加显色剂显色，可直接测定维生素A的含量，对样品中含VA低的也可以测出可信结果，操作简便、快速。
1、维生素A的性质
⑴ 因有许多不饱和链，故见光易分解；
⑵ 在缺氧情况下，对热较稳定，对光特别敏感。如测强化奶粉时，速度要快，一般要求测定时间长短，因为时间长，见光时间长，见光分解，故测出的比出厂的含量要少；
⑶ 对碱稳定；
2、测定步骤
⑴ 样品用有机溶剂萃取脂类
样品可以根据脂肪的测定处理脂肪，即索氏抽提法，采用乙醚作提取剂，也可用热苯回流方法提取脂类。如果样品中含蛋白质和淀粉多的情况下可采用乙醚提取法。
⑵脂类的皂化
脂类有维生素和脂肪这两部分通过皂化（50%KOH、无水C2H3OH、热回流）把它们分开，得到一部分皂化物和一部分不皂化物。
皂化条件：
（1）C2H3OH︰脂类 = 8︰1；
（2）KOH量 = 脂量×皂化价（mg）×2.5；
（3）皂化温度与时间：70℃、30分钟
在皂化时可以加入抗氧剂连苯二酚和对苯二酚，防止氧化。
⑶ 提取：不皂化物和皂化物经水、苯、乙醚萃取可得到不皂化物。
⑷ 柱层析分离干扰物质
采用柱层析分离干扰物质，如果柱层析把β-胡萝卜素也洗脱下来，那么这时维生素A与β-胡萝卜素就是一个混合物，还要将它们分离开。如果样品中只有维生素A而不含β-胡萝卜素时，这时可直接定容。
维生素A与β-胡萝卜素分离：
8分中性Al2O3和2分碱性Al2O3混合，装柱
分离方法：a. 用2%丙酮石油醚洗β-胡萝卜素；
b. 用乙醚洗VA。
3、测定方法
⑴ SbCl3比色法
维生素A／CHCl3 ＋ SbCl3／CHCl3→形成兰色物质→在620nm有最大吸光峰
这种兰色物质不稳定，很快褪色或变成其它物质，所以在分析时最好在暗室中进行，并且做标准曲线。
计算：每百克样品含VA的量= C×（V1/V2）×（100/W）
C ：从标准曲线上查得VA的量
V1 ： CHCl3定容的量
V2 ： 测定所取样液体积
⑵ 紫外分光光度法
VA为脂溶性的，测定VA时必须先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化，萃取不皂化部分，在经柱
层析除去杂质等干扰物质，在紫外328nm下测定，求出含量。
1） 提取及皂化
称样10.00g → 于烧杯中 → 加40ml水搅匀 → 移250ml分液漏斗中 → 加氨水5ml → 加乙醇35ml →
摇匀 → 用乙醚抽提（每次40ml抽提三次） → 收集乙醚层 → 用10ml水洗乙醚层三次 →水层再
用30ml乙醚抽提一次 → 合并所用乙醚 → 用索氏法除乙醚→ 待瓶中乙醚除尽后 → 加30ml80%
的KOH → 40mlC2H5OH →加0.8g焦性没食子酸 → 83℃水浴30分钟（皂化脂肪）→ 冷却后移入
250ml分液漏斗中 → 加60ml水 → 用40ml乙醚抽提三次 →合并乙醚抽提液 → 用水洗至中性 →
用索氏法除乙醚 → 除去后用5ml石油醚溶解瓶中内容物 → 然后移入刻度试管中
在层析柱内装8cm高度中性氧化铝 → 2cm高度碱性氧化铝及1cm无水硫酸钠 → 以石油醚浸透 → 装皂化后的样液慢慢于柱内→ 用1~2ml石油醚洗试管 → 洗液倒入柱内，活塞打开以每分钟为35滴左右的速度打开，当液面降到接近硫酸钠时 → 加5ml石油醚→ 随后用5ml洗脱液逐次洗涤。
层析柱上第一个黄色层析层，一般是β-胡萝卜素，此带在12%洗脱液前后洗去，收集于10ml容量瓶中直到流出物不呈黄色为止，此层可测β-胡萝卜素用，而VA一般在50%洗脱液洗出，用2ml刻度吸管收集1ml。吸约0.2ml于小试管中→加0.3ml25%三氯化锑→溶液如呈兰色→表明有VA存在，故0.5ml用石油醚定容10ml。
3）样液测定
以石油醚为空白
VA(I.μ100G)=(E×106×2)/(×W)×()
0.3 ：每0.3μg VA相当于1 I.μ
E ： 消光值
W ： 样品重量（g）
1830 ：石油醚中其消光值1%cm为1830
（I.μ）： 一个国际单位，维生素A相当于0.6 μgβ-胡萝卜素。
⑴ 50%KOH；⑵ 无水硫酸钠；⑶ 乙醚（不含过氧化氢）；⑷ 石油醚；⑸ 苯；
⑹ 45%C2H5OH（应不含醛类物质）
酒精中含醛类的检查方法：
首先配银氨溶液，在50%硝酸银溶液中加入浓氨水，直到氧化银沉淀又重新溶解为止，在小试管中加2ml银氨溶液，加3~5滴酒精，摇匀，加10%NaOH 1滴加热，若有银镜反应，表示乙醇中含有醛。
脱醛处理：
取乙醇2000ml → 加AgNO32g → 振摇溶解 → 加NaOH 4g →振摇溶解 → 过滤 → 上清液 → 蒸馏 → 即可
⑺ 20~25% SbCl3的CHCl3
先量取100mlCHCl3于广口瓶中，用减差法称取一定量的干燥SbCl3，SbCl3易吸水，所以必需蒸馏重结晶后使用，一般用沙浴上加热。
二、维生素D
维生素D在鱼肝油和鸡蛋黄等食品中含量较多，一般成人不会缺VD，而婴儿容易缺乏。
1、操作步骤
样品（奶粉）＋水→混匀 在NH4OH的作用下酪蛋白Ca盐溶解加入乙醇使脂肪球分离→乙醚、石油醚萃取得到脂质（其它样品可用索氏提取得到脂质）
在奶粉中脂溶性物质有VD、β-胡萝卜素、VA、VE、甾醇、脂肪。
目前皂化有三种情况：
低温（室温）
中温（70℃±2℃）
高温（100℃15min）
回收率不完全
低碱 = 脂肪︰KOH为1︰2.5的关系
另外在皂化时加抗氧化剂与不加抗氧化剂回收率不一样，加抗氧化剂的回收率高于不加抗氧化剂的回收率。
有人将上面的皂化条件互补，采用中温-高碱并加抗氧化剂，这样的回收率为96.8%，效果较好。
故皂化条件 ：70℃±2℃高碱 + 抗氧化剂
甾醇在食品中含量较多，主要是通过柱子，这个柱子就是毛地黄皂甙。
甾醇 + 毛地黄皂甙 → 沉淀
洗脱液用乙醚︰己烷 = 1︰5配制而成
甾醇︰毛地黄皂甙
= 1︰14 用量
⑸ 皂土柱层析
当VD与VA共存时，须用皂土柱层析除VA及VA的分解产物。
测定方法有两种：
维生素A／CHCl3 ＋ SbCl3／CHCl3／乙酰氮 → 形成橙黄色物质 → 500 nm下测定
紫外分光光度法
VD／乙醇 → 265 nm下测定
在测定维生素c的试验中，用2%草酸提取样品的目的是什么？
：防止维生素C氧化损失
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第10章维生素的测定
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