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液相色谱串联质谱法快速测定婴幼儿配方奶粉中39种激素残留量
２０１０年１ １月Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０ １ ０色语Ｖ０１．２８ Ｎｏ．１ １１Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ０３ １～ｌ ０３７研究论文爹ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１ １２３．２０１０．０１０３１；４…”液相色谱．串联质谱法快速测定婴幼儿配方奶粉中一一一一鼍３９种激素残留量祝伟霞，刘亚风‘，｝；！§ｉ袁萍，杨冀州魏。。。。…一。。。。一―。（河南出入境梭验检疫局，浮南郑媸４５０００３）一…，。，。≮ 煮摘要：建立了液相色谱一串联四极杆质谱同时测定婴幼儿配方奶粉中１７种糖皮质激素、１１种孕激素、３种雄性激素 和８种雌激素残留的快速确证方法。采用乙腈提取奶粉中待测组分，提取液经冷冻离心与正己烷除脂、亲水一亲脂平衡固相萃取柱净化、甲醇洗脱。分别在正、负电喷雾离子化多反应监测模式下检测３９种激素。正离子模式下的 流动相为乙腈一０．１％甲酸，色谱柱为普通硅胶基质的Ｃ，。柱；负离子模式下的流动相为乙腈一０．１％氨水。色谱柱为能 耐受宽ｐＨ范围的超高效Ｃ，。柱。在该优化条件下。３９种激素定量限（Ｓ／Ｎ＞－１０）为０．０２―５斗ｇ／ｋｇ，方法同收率为５９．５９６一１１７．９％，相对标准偏差（ＲＳＤ）为６．４％一１６．３％。经测定多种市售婴幼儿配方奶粉，表明该方法操作简单、 测定结果准确，可用于婴幼儿配方奶粉中多种内源性与化学合成类激素残留的快速测定。 关键词：液相色谱一串联质谱；固相萃取；冷冻除脂；激素；婴幼儿奶粉 中图分类号：０６５８ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００＿８７１３（２０１０）１１．１０３ｌ加７Ｑｕｉｃｋ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ｝；ｏｆ ３９ｈｏｒｍｏｎｅｓ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ；； ｌｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ―ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙＺＨＵ Ｗｅｉｘｉａ，ＬＩＵ Ｙａｆｅｎｇ’，ＹＵＡＮ Ｐｉｎｇ，ＹＡＮＧ ＪｉｚｈｏｕＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ溆“．………（ｔｔｅｎａｎ Ｅｎｔｒｙ－ＥｘｉｔＱｕａｒａｎｔｉｎｅＢｕｒｅａｕ，勘棚霉旃舰４５０００３，Ｃｈｉｎａ）……．。西。㈣磁Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｑｕｉｃｋ ｃｏｎｆＬｒｍａｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ １ ７ ｇｌｕ― ｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ，１ １ ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｓ，３ ａｎｄｒｏｇｅｎｓａｎｄ８ ｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ｉｎ ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ ｂｙ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａ－ｔｏｇｒａｐｈｙ―ｔａｎｄｅｍ ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＬＣ?ＭＳ／ＭＳ）．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｆｉｌｅ ａｔ ｆＬｒｓｔ．Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｌｉｐｉｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｍｏｖｅｄ ｂｙ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｆｒｅｅｚｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｉｑｕｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｅｘａｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ．Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｏｎｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ?－ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｓｏｌｉｄ??ｐｈａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｌｕｍｎｓ ａｎｄ ｍｅｔｈａｎｏｌ ｗａｓ ｕｓｅｄｏｒａｓｔｈｅ ｅｌｕｔｅｄｓｏｌｖｅｎｔ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ３９ ａｎａｌｙｔｅｓ Ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅｎｅｇａｔｉｖｅ ｍｕｌｔｉ―ｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｍｔｏｒｉｎｇ（ＭＲＭ）ｍｏｄｅ，ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ．Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一０．１％ｐｈａｓｅ ａｎｄｆｏｒｍｉｃａｃｉｄＷａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅａｎｏｒｄｉｎａｒｙ ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎ Ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅ ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅｍｏｄｅ．Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．１％ｏｎ ａｌｌａｑｕｅｏｕｓ ａｍｍｏｎｉａ ａｓＣ１８ ｃｏｌｕｍｎ ｗｉｔｈａｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔｕｌｔｒａ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｗｉｄｅ ｐＨ ｒａｎｇｅ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅｍｏｄｅ．Ｔｈｅｌｉｍｉｔｓ ｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＬＯＱ，∥Ⅳ≥１０）ｗｅｒｅ ０．０２―５¨ｇ／ｋｇ．Ｔｈｅｔｏｏｖｅｒａｌｌ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｖａｒｉｅｄ ｆｒｏｍ ５９．５％１ 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物。对于禁用药物而言，降低检出限是开发检测方 法的主要目标。目前国内外已有许多关于激素检测 的标准与文献报道，主要采用液相色谱一质谱（ＬＣ― ＭＳ）＂－６］与气相色谱一质谱（ＧＣ―ＭＳ）¨Ｊ’两种方法。 尽管ＧＣ―ＭＳ测定激素时具有较高的灵敏度，但因 甾体类激素结构中具有多个羟基和羰基，在测定时 需要长时间硅烷化、酰化和肟化等衍生化过程¨１。 ＬＣ―ＭＳ测定激素时不仅具有较高灵敏度，而且不需 要衍生就可以直接测定，提高了分析样品的工作效 率，同时ＬＣ―ＭＳ也是国家标准测定动物源性食品中 多种激素残留的方法一１。本方法在已有的标准与 文献研究的基础上，优化了提取、酶解、净化、色谱测 定等参数，成功地建立了固相萃取净化、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ 测定婴幼儿奶粉中３９种激素的分析方法。１司）；甲酸（含量为９６％，色谱纯，美国Ｔｅｄｉａ公司） 和乙腈（色谱纯，美国Ｆｉｓｈｅｒ公司）；实验用水为 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ纯水系统制得的高纯水（电阻率≥１８ ?ｃｍ）；其他试剂均为市售国产分析纯试剂。 １．２标准溶液的配制 分别称取标准品１０ ｍｇ于１００ ｍＬ容量瓶中， 加入乙腈溶解并定容，得到质量浓度为１００ｍｇ／Ｌ ＭＤ的单标准储备溶液，于一２０℃下保存。分别取上述 储备液用乙腈－４）．１％甲酸（１：１，ｖ／ｖ）或乙腈一０．１％ 氨水（１：１，ｖ／ｖ）稀释为１ ｍｇ／Ｌ的标准溶液用来优 化质谱条件。分别取上述储备液用乙腈一水（１：ｌ， ｖ／ｖ）配制成１ ｍｇ／Ｌ混合标准工作溶液。１．３ＬＣ．ＭＳ／ＭＳ条件正离子模式下的ＬＣ条件色谱柱：Ｗａｔｅｒｆｉｒｅ Ｃｌ Ｂ柱（１５０ ｍｍ×２．１Ｓｕｎ－ｍｍ，５“ｍ）；流动相：乙腈（Ａ）与０．１％甲酸（Ｂ）。梯度洗脱程序：０～４ｍｉｎ，１５％Ａ～６５％Ａ；４―８ ｍｉｎ，６５％Ａ一８０％Ａ，保持２ｍｉｎ；１０一１０．１ｍｉｎ，８０％Ａ一１５％Ａ，保持４ｍｉｎ；流速：０．３ ｍＬ／ｍｉｎ。柱温：３０℃。进样量：１０ＩＬＬ。Ｖａｃｌｏ六通阀操作：２．８―１１ ｍｉｎ＿质谱；０―２．８ ｍｉｎ、１１ｍｉｎ后＿废液。 色谱柱：ＷａｔｅｒＵＰ－负离子模式下的ＬＣ条件ＬＣ ＢＥＨ Ｃ１ ８柱（５０ ｍｍ×２．１ ｍｍ，１．７｝ｘｍ）；流动相：乙腈（Ａ）与０．１％氨水（Ｂ）。梯度洗脱程序：Ｏ一０．８ ｍｉｎ，１０％Ａ；０．８～４ｍｉｎ，１０％Ａ一６０％Ａ，保持２．５ｍｉｎ；６．５―６．６ｍｉｎ，８０％Ａ一１０％Ａ，保持３．５ ｍｉｎ。流速：０．３ ｍＬ／ｍｉｎ。进样量：１０斗Ｌ。柱温：３０℃。Ｖａｃｌｏ六通阀操作：２―５．５ ｍｉＩＩ一质谱；０―２ ｍｉｎ、５．５实验部分ｍｉｎ后＿废液。ｋＰａＭＳ／ＭＳ条件电喷雾离子化（ＥＳＩ），正或负离 子电离（ＥＳＩ＋或ＥＳＩ一）；雾化气压力：３１０．３（４５ ｐｓｉ）；气帘气压力：１７２．４ ｋＰａ（２５ ｐｓｉ）；喷雾电 压：５００ Ｖ；去溶剂温度：５５０℃；去溶剂气压力：２７５．８ ｋＰａ（４０１．１仪器和试剂 ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ超高效液相色谱仪（美国Ｗａ－ｔｅｒｓ公司）；ＡＰｌ４０００串联四极杆质谱仪（美国ＡＢ 公司）；ＲＸⅡＳｅｒｉｅｓ温控高速离心机（日本日立公 司）；３９种激素标准品（纯度≥９８％，美国Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ公司和德国Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ公司）；Ｏａｓｉｓ ＨＬＢ固相萃取柱（３ ｍＬ／６０ ｍｇ，美国Ｗａｔｅｒｓ公裹１Ｔａｂｌｅ ｌｐｓｉ）；碰撞气压力：６９ ｋＰａ（１０ ｐｓｉ）；每个离子对驻留时间：ｌＯ ｍｓ；每种化合物的检测离 子对、去簇电压（ＤＰ）、碰撞室出口电压（ＣＸＰ）、射 人电压（ＥＰ）、碰撞能量（ＣＥ）等质谱参数见表１。ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ ３９３９种激素的质谱检测参数ｈｏｒｍｏｎｅｓＭＳｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ万方数据第１１期祝伟霞，等：液相色谱一串联质谱法快速测定婴幼儿配方奶粉中３９种激素残留量?１０３３?表１（续）Ｔａｂｌｅ １（Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｌＮｏ．Ｈｏ珊ｏｎｅＰａｒｅｎｔＰｍｄｕｃｔ ｉ蛐Ｉｏｎｍｉｚｏａｄｔｅｉｏｎ（仇ｉ）ｏｎ ｚ／ （ｍ如）ＤＰ／Ｖ Ｖ／Ｐ正ｖ ｕＥ／ｅ… ｃｖ ＣＸＰ／…Ｅ‘ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｏｎ．１．４样品前处理Ｖ）溶液溶解残渣，经０．２２ ｔｔｍ滤膜过滤，滤液供 ＬＣ．ＭＳ／ＭＳ测定。称取５．０ ｇ奶粉样品置于５０ ｍＬ离心管中，加入１０ ｍＬ乙腈，涡旋混匀ｌ ｍｉｎ，于４０℃下超声２０ ｍｉｎ，在０ ｏＣ下以８０００ ｒ／ｒａｉｎ离心１０ ｍｉｎ，移去上２结果与讨论 ２．１萃取溶剂的选择 ３９种待检测化合物的极性范围广，其油水分配 系数的对数值（１０９ Ｘｏ。）在０．６３―４．３１之间Ｈ’，大 多甾体类与二苯乙烯类激素在弱极性或中等极性有 机溶剂中有较高的溶解性，常用的萃取溶剂包括乙 醚、叔丁基甲醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈和 甲醇。奶粉中含有较多的蛋白质与脂肪类化合物， 采用弱极性试剂易溶解样品中的脂类干扰物，不利 于仪器分析和净化。实验分别比较了乙腈、叔丁基 甲醚、甲醇等作为提取溶剂时可溶性杂质的含量与清液；奶粉残渣中再加入７ ｍＬ乙腈，涡旋混匀后低 温离心；合并上清液。待提取液冷却至室温后加入１０ｍＬ乙腈饱和的正己烷，液－液分配平衡后离心，弃去正己烷层，下层溶液于５０℃用氮气吹扫浓缩至干。加入４ ｍＬ ３０％甲醇水溶液溶解残渣，并将其加载至已依次用３ ｍＬ甲醇、３ ｍＬ水活化过的ＨＬＢ 柱中，依次用３ｍＬ水、３ ｍＬ３０％甲醇水溶液淋洗，最后用５ ｍＬ甲醇洗脱。将洗脱液过ＮＨ：柱，然后 用３ ｍＬ甲醇淋洗柱体，收集洗脱液并于５０℃水浴中用氮气吹扫浓缩至干。用ｌ ｍＬ乙腈－水（２：８，ｖ／万方数据?１０３４?色谱第２８卷提取效率。可溶性杂质的测定方法：将１０ ｇ奶粉加入３０ ｍＬ提取溶剂，于４０℃下超声提取。重复提取柱上；甲醇比例太小，弱极性杂质易被保留，柱容 量超载，目标物不能定量保留。本实验分别用１００９６甲醇、８０％甲醇、６０％甲醇、４０％甲醇、３０％甲取３次。离心过滤后浓缩，于１０５℃下恒重。实验 结果表明，采用上述３种溶剂提取时可溶性杂质的 含量为叔丁基甲醚（１１．０％）＞甲醇（９．９％）＞乙腈 （９．１％），同时乙腈提取多种激素时的回收率为 ８ｌ％一９５％。故本文选用乙腈作为提取溶剂。２．２提取温度和超声时间的选择醇、２０％甲醇、１０％甲醇和水溶解样品残渣后采用固 相萃取柱净化，结果表明，上样溶液中甲醇含量为０ ―３０％时，３９种激素能完全保留在固相萃取柱中； 甲醇含量Ｉ＞４０％时，一些孕激素与二苯乙烯类激素 首先被洗脱。为了保证所有目标物均能保留在 ＨＬＢ柱中，选用３０％甲醇作为上样液。文献报道采 用Ｃ。。或ＨＬＢ柱净化激素类药物时常用甲醇、乙腈、 丙酮一甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂作洗脱液Ｈ“１。通 过实验得到不同有机溶剂洗脱３９种激素的淋洗曲 线，结果表明，甲醇不仅洗脱回收率高，净化效果也 好。本方法选用５ ｍＬ甲醇作为ＨＬＢ柱洗脱剂。 洗脱液经氮气吹干后进行质谱测定时基质抑制 率高，其中己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚的基质影 响达６０％。为了减少基质效应，将洗脱液再过ＮＨ： 柱净化，强极性表面活性物质保留于ＮＨ，柱中。该 净化液经浓缩后，其基质抑制率降低（≤２５％）。 ２．６色谱条件的选择 糖皮质激素、孕激素、性激素属弱极性高分子质 量化合物，在Ｃ…Ｃ。固定相中均有较好的保留。在 优化液相色谱分离条件过程中，分别比较了多种商 品化液相色谱柱的分离效果。在正离子模式下分离 ３０种激素时，各种Ｃ，。柱的保留行为差别很小，其中Ｓｕｎｆｉｒｅ奶粉中残留的激素类药物与样品基质中弱极性 或中等极性物质之间有较强的范德华作用力，直接 加入乙腈提取，一些糖皮质与二苯乙烯类激素回收 率仅为３０％左右，采用超声提取法后，回收率增加。 分别考察了提取温度和超声时间对提取效率的影 响，实验数据表明在４０℃下超声２０ ｍｉｎ时提取效 率最高，故本文选择在此条件下进行提取。２．３酶解与不酶解处理奶粉对测定结果的影响尿和血浆中激素代谢物主要以葡萄糖与硫酸酯 结合态存在拍。。为获得游离态的分析物，分析时需 进行酶水解。Ｓｈａｏ等Ｌ４，１０］研究了动物组织中激素一 葡萄糖与硫酸酯轭合物的情况，表明肌肉中睾丸酮 可解离的结合态＜２０％，１７口一雌二醇＜５％。Ｙａｎｇ 等Ｈ１也分别在无酶解或酶解条件下测定了肌肉、 虾、牛奶中的内源性激素，表明两种条件下的测定结 果没有差异。为了验证奶粉中激素代谢物分析时加 入酶解步骤的有效性，实验选用１０个奶粉样品与 １０个牛奶样品进行比较测定，分别采用酶解与不酶 解两种方法测定了内源性激素雌二醇与孕酮，结果 证明其测定值没有明显差异（相对标准偏差（ＲＳＤ） ＜１１．５％（佗＝６））。为了节省分析时间，实现实验 室内批量样品的快速测定，本方法在样品前处理中 没有加入酶解步骤。 ２．４脂类与其他干扰物的去除 奶粉中脂肪含量约为４％。提取时一些脂类干 扰物会溶于乙腈，干扰固相萃取与质谱电离。为了 去除基质中的脂肪类干扰物，本文采用冷冻离心除 脂法，在低温状态下将脂肪粒析出，高速离心使其漂 浮或沉淀于样液中。实验结果表明该方法能去除 ４０％的脂类与常温下能溶解的杂质。对于乙腈提取液中残存的其他脂类溶解物，采用乙腈饱和的正己Ｃ。。柱分离度与灵敏度相对最高，故在正离Ｓｕｎｆｉｒｅ子模式下选择ＷａｔｅｒＣ１８柱进行分离，在１．３节的梯度洗脱条件下，目标物的保留时间在３―８ ｍｉｎ之间。为了使二苯乙烯类激素电离完全，采用 负离子电离模式对其进行测定。在流动相中加入 ０．１％氨水后流动相的ｐＨ为１０左右，但在该ｐＨ条 件下一般硅胶基质的Ｃ。。柱均不能使用。ＢＥＨ 柱属三键键合，具有较宽的ｐＨ应用范围（ｐＨ １２），且分离二苯乙烯类激素时柱效高。 在负离子模式下采用１．３节的色谱条件分离９种激素时，样品液中有机相的含量是影响分析物保Ｃ。。 ｌ一留与峰形的主要因素。采用乙腈一水（３：ｌ，ｖ／Ｖ）作 为提取物的溶解溶剂时，雌三醇、玉米赤霉烯酮与玉 米赤霉醇出现前沿峰与双峰，雌二醇与哈西奈德的 灵敏度低；采用与流动相组成相似的乙腈一水（２：８， ｖ／ｖ）为提取物的溶解溶剂时，９种激素均获得对称 的峰形，雌王醇与哈西奈德的灵敏度提高了１倍。２．７质谱条件的优化烷除脂。经过冷冻离心与正己烷萃取两个步骤后能 完全去除样液中的脂类干扰物。２．Ｓ固相萃取净化条件的选择采用ＨＬＢ固相萃取净化时，上样溶液的组成既 影响回收率又影响净化效果。甲醇比例太大，淋洗 强度高，一些相对强极性目标物不能保留在固相萃大气压化学电离（ＡＰＣＩ）与ＥＳＩ是检测甾体类 激素化合物常用的两种电离方式【３’５１。通过比较糖万方数据第ｌｌ期祝伟霞，等：液相色谱．串联质谱法快速测定婴幼儿配方奶粉中３９种激素残留量?１０３５?皮质激素与性激素在两种电离方式下的离子化效率 发现ＡＰＣＩ与ＥＳＩ在测定激素时离子化效率相同， 该结果与Ｂｌａｓｃｏ等＂。报道的结果一致。采用１ｍｇ／Ｌ单标准溶液以流动注射的方式在正、负离子再分别以待测物的分子离子峰为母离子，进行子离 子全扫描，选取丰度较强、干扰较小的两个子离子作为定性与定鬣离子，优化得到的质谱参数见表１。 ２．８方法的检出限与线性关系模式下进行母离子全扫描，确定化合物的分子离子。 该类化合物结构中没有强酸性或碱性基团，大多数 化合物仅含有１个在３位或１７位的羰基电离基团， 其电离主要依靠羰基与氮原子结合力，结构中存在 多电子结合体系或与氮环结合时易产生［Ｍ＋Ｈ］＋。 对于其他的化合物，在正离子模式下信号很弱…１， 除哈西奈德外，所有的糖皮质激素、雄性激素、孕激 素在正离子模式下均得到信号较强的母离子［Ｍ＋ Ｈ］＋；对于雌性激素与糖皮质激素哈西奈德在负离 子模式下才能获得准分子离子峰［Ｍ―Ｈ］‘，己烯雌 酚、双烯雌酚、雌二醇、雌三醇标准溶液中加入 ０．１％氨水，［Ｍ―Ｈ］一峰信号强度提高５倍以上。襄２Ｔａｂｌｅ ２在奶粉样品中添加不同浓度的混合标准工作溶液，按上述方法处理后测定，以定量离子的峰面积对质量浓度进行线性回归计算，所得相关系数（ｒ）均 大于０．９９，线性方程见表２。以信噪比（Ｓ／Ｎ）≥１０ 为方法的定量限（ＬＯＱ），其ＬＯＱ值见表２。 ２．９方法的回收率与精密度取奶粉样品添加３个水平（１ＸＬＯＱ、１．５ＸＬＯＱ、２×ＬＯＱ）的混合标准溶液进行回收率试验。 每个添加水平测定１０次，平均回收率及相对标准偏 差（ＲＳＤ）见表２，内源性激素需扣除空白值。图１ 与图２分别为在正、负离子模式下测定奶粉中添加 ３９种激素样品的色谱图。ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ（Ｒ８Ｄｓ）ａｎｄ３９种激素的线性关系、回收搴、精密度及定量限ｏｆ ３９Ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ－ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ。ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄｌｉｍｉｔｓＨｏｒｍｏｎｅｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＬＯＱ．Ｓ／Ⅳ≥１０ １ＬｍｅａｒｈｏｒｍｏｎｅｓｒＬｉｎｅａｒ ｅｑｕａｔｉｏｎ 掣＝９１３ｘ一２７４ 曼，＝１９７０ｚ一７４ｌ Ｙ＝１０４０Ｘ一３１０ 掣＝２７１０ｘ＋９４４ 掣＝６９９０ｚ＋９８５ Ⅳ＝４４００Ｘ一８７３ Ｙ＝７８９ｘ―１８ｌ Ｙ＝８００ｘ＋３３９ Ｙ＝４８７Ｘ一２５．７ Ｙ＝５７４ｘ一４７３ 虽，＝５６９ｘ一２４２ Ｙ＝２３．３ｘ一１４．２ 掣＝８２９ｚ一２０４ 封＝１２１ｚ一５３．２ 掣＝１８４０Ｘ＋１０１０ 掣＝１５７０ｘ―１４７０ Ｙ＝９０９ｚ一５９８ Ｙ＝５８９０ｘ―１１９０ Ｙ＝８８９０ｘ＋８４８ ∥＝２１６０ｘ一３１６ 掣＝１５６０ｘ＋１５２ Ｙ＝４９５０ｘ一１４５０ 量，＝６５４０ｘ一２０３０ Ｙ＝１０９００ｘ＋１４８ｒａｎｇｅ／（ｐ．ｇ／ｋｇ）０．２―２０ ０．０５―２０ ０．１―２０ ０．１―２０ ０．０５―２０ ０．０５―２０ Ｏ．２―５０ ０．１一１０ Ｏ．２―２０ ０．２―５０ ０．５―５０ ２．０―５０ Ｏ．２―２０ Ｏ．２―２０ ０．２―２０ ０．５―５０ ０．２―２０ ０．０５―２０ ０．１―２０ ０．２５―５０ ０．１―２０ ０．０５―１０ ０．２５―２０ ０．０２―５０ Ｏ．１―２０ ０．１一ｌＯ ０．２５―５０ ０．０５―１０ ０．０５一ｌＯ ０．１―２０ ０．２５―５０ ０．Ｉ一２０ ０．１―２０Ｒｅｃｏｖｅｒｙ／％ ８１．Ｉ―ｌｌＯ．３ ７２．Ｏ一９８．４ ８７．８一１０３ ７６．７―９３．２ ７５．７―９４．８ ６９．Ｏ一９２．３ ７３．１一１０ｌ ８４．５―９７．Ｉ ６６．４―９９．２ ７０．Ｏ―ｌＯＩ ７６．１―９７．３ ８４．４―９６．７ ７２．７一１０４．５ ６４．４一１０２．３ ８３．８一ｌ １７．９ ７８．５―１００ ８０．２―９８．３ ８３．４―９４．９ ７９．４―９８．５ ７５．５―１０７．８ ７６．４―９９．７ ６２．９―９６．２ ８５．８―９８．８ ９４．５―１０５ ７８．６―９４．７ ７２．６―９１．Ｏ ６３．Ｉ一８６．７ ７６．５―１０１．７ ８６．１一１０２．５ ８１．１一ｌｏｏ．２ ８５．８―９９．４ ７５．３―１０４ ７１．４―９Ｉ．８ＲＳＤ／％ＬＯＱ／（¨ｇ／ｋｇ）８．６ １０．２ ８．１ ６．９ １２．３ ９．３ ９．５ ｌＯ．４ １３．７ １２ ８．９ ９．７ ｌＯ．６ １５．２ １３．６ １１．８ ７．６ ９．３ ７．８ １２．８ １１．５ １２．９ ８．６ ６．４ ７．７ １０．１ ９．５ ８．３ ６．２ ９．３ １１．６ ９．７ １０．３ Ｏ．５ ０．１ ０．２５ ０．２ ０．０５ ０．０５ Ｏ．５ ０．２ Ｏ．５ ０．２５ ｌ ５ Ｏ．５ ０．５ Ｏ．５ Ｏ．５ Ｏ．５ ０．１ Ｏ．２５ ０．５ Ｏ．２５ Ｏ．０５ ０．５ ０．０２ ０．１ Ｏ．１ Ｏ．５ Ｏ．１ ０．１ Ｏ．１ ０．５ ０．２ ０．２ＴｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅＰｒｅｄｉｓｏｌｏｎｅ Ｈｙｄｒｏｅｏｒｔｉｓｏｎｅ Ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ０．９９８６ ０．９９９７ ０．９９９４ ０．９９８ ０．９９９９ ０．９９９７ ０．９９８ｌ ０．９９９４ ０．９９４９ ０．９９９ｌ ０．９９８７ ０．９９３６ ０．９９９ｌ ０．９９２９ ０．９９８１ ０．９９９８ ０．９９６５ ０．９９６８ ０．９９９６ ０．９９９１ ０．９９９８ ０．９９９７ ０．９９９９ ０．９９９９ ０．９９７７ ０．９９５ ０．９９９８ ０．９９９７ ０．９９９５ ０．９９８８ ０．９９９８ ０．９９９５ ０．９９９９ＢｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅＤｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅＦｌｕｍｅｔｈａｓｏｎｅ ＴｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅａｃｅｔｏｎｉｄｅＦＩＵＯＣｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ Ｈｙｄｒｏｅｏｒｔｉｓｏｎｅ Ｆｌｕｄｒｏｅｏｒｔｉｓｏｎｅ Ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅａｃｅｔａｔｅ ａｃｅｔａｔｅａｃｅｔａｔｅＣｏｒｔｉｓｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅＤｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅａｃｅｔａｔｅ１７ａ－ＨｙｄｒｏｘｙｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅＢｅｃｌｏｍｅｔｈａｓｏｎｅ Ｎｏｒｅｔｈｉｓｔｅｒｏｎｅ Ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ ＮｏｒｇｅｓｔｒｅｌＤｙｄｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ １７ａ―Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅＭｅｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅＣｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅＰｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ＭｅｌｅｎｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅａｃｅｔａｔｅＹ＝１５３０ｘ一８９ｌＭｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ掣＝４５６０ｘ一２８９ Ｙ＝９１４０ｘ一７３３０ Ｙ＝８０６０ｘ一８７８ Ｙ＝７６８０ｘ一４２４０ 掣＝１４６００ｚ一９９２ ∥＝２４６０ｘ一４７６ ｜，＝１３００ｘ一１４７ Ｙ＝９５４０ｘ一２１１０１７ａ?Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ｅａｐｒｏａｔｅＴｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ１７－ＭｅｔｈｙｌｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅＴｒｅｎｂｏｌｏｎｅ Ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ ＥｓＵ＇ｉｏｌ ＺｅｒａｎｏｌＡｃｅｔａｔｅ万方数据?１０３６?色谱裘２（续） （Ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ） ｒａｎｇｅ／（Ｉ．ｔｇ／ｋｇ）０．２５―２０ ０．１―２０ ０．５―５０ Ｏ．５―５０ Ｏ．５―５０ ０．５―５０ｒ第２８卷Ｔａｂｌｅ ２ＨｏｒｍｏｎｅＥｓｔｒａｄｉｏｌ Ｅｓ打ｏｎｅＬｉｎｅａｒ ｅｑｕａｔｉｏｎ Ｙ＝６３７０ｘ一５１００ 量，＝１０９００ｘ一８４８０ 掣＝６８３０ｘ一５９２０ 可＝５６７０ｘ―１０．９ Ｙ＝３５１０ｘ一３７１ 曼，＝３１００ｘ一２３００ＬｉｎｅａｒＲｅｃｏｖｅｒｙ／％ ６４．０―９２．Ｏ ７７．０一１０６．２ ６０．８―９３．８ ６８．０一１０９．０ ５９．５一１０４．９ ７１．８―９０．８ＲＳＤ／％ＬＯＱ／（ｔｔｇ／ｋｇ）１１．８ ９．９ １６．３ １４．８ １５．９ ８．５ Ｏ．５ Ｏ．２ Ｉ ｌ １ ０．５０．９９９８ ０．９９８３ ０．９９８９ ０．９９９８ １ ０．９９９６Ｄｉｅｔｈ）７ＩｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌＤｉｅｎｅｓｔｒｏｌ Ｈｅｘｏｅｓｔｒｏｌ Ｈａｌｃｉｎｏｎｉｄｅ３，：ｐｅａｋ ａｒｅａ；ｚ：ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ａｎａｌｙｔｅ，扯ｇ／ｋｇ．１００１００３． ７８一２１００４． １９一４１００一一５００ Ｏ ５ １０ １５Ｏ Ｏ ５ １０ １５０ ０－ｄＯ ５ １０ １５ ０ ５ １０ １５１００１００１０００ Ｏ ５ ｌＯ １５ ５? ）ｌ０ ０ ５ ５． Ｉｌ １２ １００一Ｏ １０ １５ ０ ５ １０ １５ ６． 『６一ｌｏｏ：１３１００∞１５零 蚤５０ｊ摹 蚤０ Ｊ５ Ｏ ５ ＪＯ １５５０如：重０Ｏ ５ ＪＯ 】５：№ ，帆．＾～』Ｏ ５ ＪＯ量０Ｏ ５ ｌＯ Ｊ５ｏ ０ＪＪ ５ ６． １５一１０１５｛１００酲更、扫一∞ｃｕｌ―Ｑ＾Ｉ哥一星号１００配更＼白～§ｃ～２≈毒蛊∞２０一０ ０ ５ ｌＯ １５０ Ｏ ５ ６． ７７ ｌＯ １５０ ０ ５ １０ １５０ ０ ５ １０ １５１００１００一２２１００＿０ Ｏ ５ １０ １５Ｏ ０ ５ １０ １５Ｏ ０ ５ ５． ；９ ｌＯ １５ ７． ）９ ２９ １００一１００ｌｏｏ一３０一一Ｏ Ｏ ｔｉｍｉｎ ５ ｔｉｍｉｎ ｌＯ １５ ｔ／ｍｉｎ０ ０．Ｉ．．Ｉ．Ｏ １５ Ｏ．．１．Ｉ．Ｉ５ｌＯ ｔ／ｍｉｎ５１０ ｔ／ｍｉｎ１５圈ｌ正离子模式下奶粉中添加３０种激素（定量限水平）样品的ＭＲＭ色谱图Ｆｉｇ．１ ＭＲＭ ｅｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆａｍｉｌｋ ｐｏｗｄｅｒｓａｍｐｌｅｓｐｉｋｅｄ ｗｉｔｈ ３０ｈｏｒｍｏｎｅｓａｔＬＯＱｌｅｖｅｌ ｉｎＥＳＩ＋ｍｏｄｅ１．Ｉｘｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ；２．ｐｒｅｄｉｓｏｌｏｎｅ；３．ｈｙｄｒｏｅｏｒｔｉｓｏｎｅ；４．ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｉｏｎｅ；５．ｂｅｔａｍｅｔｈａｓｏｎｅ；６．ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ；７．ｆｌｕｍｅｔｈａ－ｇｏｎｅ；８．ｕＦｉａｉｎｃｉｎｏｉｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ；９．ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ；１３．ｃｏｒｔｉｓｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ；１０．ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ：１１．ｆｌｕｄｒｏｅｏｒｔｉｓｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ；１２．ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅａｃｅｔａｔｅ；１４．ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅａｃｅｔａｔｅ；１５．１７ａ－ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｒｔｉｅｏｓｔｅｒｏｎｅ；１６．ｂｅｅｌｏｍｅｔｈ勰ｏｎｅ：１７．ｎｏｒｅｔｈｉｓｔｅｒｏｎｅ；ａｃｅｔａｔｅ；２３．ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ１８?ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ；１９．ｍｅｌｅｎｇｅｓｔｒｏｌａｃｅｔａｔｅ；２０．ｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ；２１．ｄｙｄｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ；２２．１７ａ?ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅａｃｅｔａｔｅ；２４－ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ；２５．ｃｈｌｏｒｍａｄｉｎｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ；２６．ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ａｃｅｔａｔｅ：２７．１７ａ―ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ ｃａｐｒｏａｔｅ；２８． ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ；２９．１７一ｍｅｔｈｙｌｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ：３０．ｔｚｅｎｂｏｌｏｎｅＡｃｅｔａｔｅ．万方数据第１ ｌ期祝伟霞，等：液相色谱，串联质谱法快速测定婴幼儿配方奶粉中３９种激素残留量‘１０３７?芝１００窘ｌ 专５０童岂ｏ ０ ２ ４ ６ ８美、扫一兽３ｌｕ―ｐ＾ｌ苗一ｑ笛摹、蚤一２０ｌＵ ｏ＾Ｉ葛一＿Ｅ１０００ Ｏ ｆ／ｍｌｎ ２ ４ ｆ／ｍｉＩｌ ６ ８图２负离子模式下奶粉中添加９种激素（定量限水平）样品的ＭＲＭ色谱圈Ｆｉｇ．２ＭＲＭ ｅｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆａｍｉｌｋｐｏｗｄｅｒ ｓａｍｐｌｅ ｓｐｉｋｅｄ ｗｉｔｈ ９ｈｏｒｍｏｎｅｓａｔＬＯＱｌｅｖｅｌ ｉｎＥＳＩ―ｍｏｄｅ３１．ｅｓｔｒａｄｉｏｌ：３２．ｅｓｔｒｉｏｌ；３３．ｅｓｔｒｏｎｅ：３４．ｄｉｅｔｈｙｉｓｔｉｌｂｅｓｔｒｏｌ；３５．ｄｉｅｎｅｓｔｒｏｌ；３６．ｈｅｘｏｅｓｔｒｏｌ；３７．ｚｅｒａｎｏｌ；３８．ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ；３９．ｈａｌｃｉ－ ｎｏｎｉｄｅ．２．１０实际样品的测定时样品基质影响小，定量准确。在当今食品质量安 全备受蕈视的环境下，该方法能为奶粉中激素的监 管与监督提供技术依据。参考文献：［１］ＣｕｉＸ Ｌ．Ｓｈａｏ Ｂ，Ｚｈａｏ Ｒ，ｅｔ为了验证本方法的有效性，对２０种市售婴幼儿 配方奶粉进行了激素含量的测定。经测定，选购的 ２０个奶粉样本中均含有孕酮（１．４―２７．９ ｐＬｇ／ｋｇ）， ５个样品中检出雌二醇和雌酮（０．６一１．２恤ｇ／ｋｇ），３个样品检出睾丸酮（０．１７―１．８ ｐＬｇ／ｋｇ），其他激素ａ１．Ｃｈｍｅ∞Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｃｈｒｏ―均未检出。检测样品呈阳性的激素均属于内源性激 素，检出结果与文献报道牛奶中内源性激素含 量Ｌ４，１２］一致。同时采用国家标准方法对这些样品进行测定，测定值为孕酮０．９―３５．６ ｏ．ｇ／ｋｇ、雌二醇和 雌酮０．１～１．９ ｏ，ｇ／ｋｇ、睾丸酮０．２―１．５斗ｇ／ｋｇ，其［２］ ［３］ ［４］ ｂ № 口ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（崔晓亮。邵兵，赵榕，等．色谱），２００６，２４（３）；２１３ Ｘｕ Ｈ．Ｇｕ Ｌ．Ｈｅ Ｊ．ｅｔ ａ１．ＪＣ¨ｏｍａＷｇｒＣＢ，２００７，８５２：５２９Ｂｌａｓｃｏ Ｃ，Ｐｏｕｃｋｅ Ｃ ２００７。１１５４：２３０Ｖ。ＰｅｔｅｇｈｅｍＶ．ＪＣｌＩｌ＿ｏｍａｌＤｇｒＡ，Ｙａｎｇ Ｙ。Ｓｈａｏ Ｂ。Ｚｈａｎｇ ８７７：４８９Ｊ，ｅｔ ａ１．ＪＣｔｕＤｍａｔｏ窈Ｂ，２００９，他激素均未检出。结果表明本方法测定结果与国家 标准方法测定结果的ＲＳＤ小于１７．Ｉ％。ＫａｋｌａｍａｎｏｓＧ。Ｔｈｅｏｄｏｒｉｄｉｓ Ｇ，Ｄａｂａｌｉｓ Ｔ，ＪＣ如．ｏｍａｔｏｇｒＡ．３结论建立了一种可以准确测定婴幼儿配方奶粉中多 种激素的分析方法，方法的各项参数经方法学验证 后均符合相关法规要求。与已公布的标准方法或文 献报道方法相比，本方法测定奶粉样品中３９种激素 的专属性强，特异性高。针对奶粉基质的特点，样品 前处理依次采用冷冻离心除脂、正己烷液．液除脂、 联合ＨＬＢ＋ＮＨ：固相萃取净化等步骤，在进行测定ｉｌ２００９．１２１６：８０７２ＫａｋｌａｍａｎｏｓＧ，ＴｈｅｏｄｏｒｉｄｉｓＧ，ＤａｂａｌｉｓＴ．ＪＣｈｍｍａｔｏ耵Ｂ，Ｃｈｉｍ２００９．８７７：２３３０ＩｍｐｅｎｓＳ，Ｌｏｃｏ ＪＶ，ＤｅｇｒｏｏｄｔＪ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＡｎａｌＡｃｔａ，２００７．５８６：４３ Ｃｈｅｎ路 ］Ｊ，ＱｉＩＩＹ。ＺｈａｎｇＭ Ｊ．ＣｈｉｒＩｅ驰ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇ―ｒａｐｈｙ（陈捷。秦燕。张美金．色谱），２００６，２４（１）：１９ＧＢ／Ｔ ２１９８ｌ一２００８∽＝． 】ＯＳｈａｏ Ｂ。Ｚｈａｏ ５４８：４ｌＲ，ＭｅｎｇＪ，ｅｔ ａ１．ＡｎａｌＣｈｉｎａＡｃｔａ。２００５。＝．Ｐｏｚｏ ＯＪ，ＥｅｎｏｏＰＶ。ＤｅｖｅｎｔｅｒＫ。ｅｔａ１．Ｔｍｎｄ８ＡｎａｌＣｈｅｍ．２００８。２７（８）：６５７［１２】ＪｏｕａｎＰＮ，ＰｏｕＵｏｔ Ｙ，Ｇａｕｔｈｉｅｒ Ｓ Ｆ，ｅｔ ８１．ＩｎｔＤａｉｒｙ Ｊ。２００６，１６：１４０８万方数据是一个在线免费学习平台、通过收集整理大量专业知识，职业资料、考试资料,考试复习指导,试题资料等给大家分享;同时提供学习互动交流;更好的帮助大家学习。