pBR322质粒的提取问题！！！紧急！

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2011-10-26 19:16 标签： 柯斯质粒
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质粒与片段的连接
我最近在构建一个重组质粒，因为酶切位点只剩下XbaI可以选择，所以只能XbaI单连，用此酶单酶切空质粒是切出一条很亮的条带的，然后去磷酸化后与酶切后的片段按照摩尔比1：3，1:5,1:10进行了10微升和16微升的连接体系用快速连接酶solution I连接了5个小时，但是做了好几次，结果都是无任何克隆长出，质粒大小是5809bp， 片段是5399 bp，是不是因为两个都太长且比较相近所以很难连接吗？我之前用同样的XbaI单连另外一个载体是成功的，但是那个重组质粒总长7000多bp。请懂的大侠们支招啊？做了一个月了，感觉很失败啊，以前我构建都是一次性或者两次就成功的。
可能就是你的插入片段太大，连接不上，也可能是你已经连接上去，但是转化效果不好，建议你可以采用其他的转化方法试试。或者更换质粒。 插入片段和载体一样大小，调整1：1进行。 建议使用T4连接酶进行大片段的连接，连接效率要高些 只要对载体或者片段一个进行去磷酸化（最好选择有抗性标签的载体骨架去磷酸化），这样可以保证减少其中一个自连，这样也许会好点。 为什么不用PCR克隆呢？
效率绝对比酶切连接高。 : Originally posted by snoopyzxx at
为什么不用PCR克隆呢？
效率绝对比酶切连接高。 PCR克隆是什么？ : Originally posted by senix at
插入片段和载体一样大小，调整1：1进行。 试了1:1也不行 : Originally posted by wangxin320 at
建议使用T4连接酶进行大片段的连接，连接效率要高些 好的，我试一下 : Originally posted by 意孤城_ at
只要对载体或者片段一个进行去磷酸化（最好选择有抗性标签的载体骨架去磷酸化），这样可以保证减少其中一个自连，这样也许会好点。 对载体进行了去磷酸化
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E-mail： & QQ：8835100pBR322质粒的化学本质是什么_百度知道
pBR322质粒的化学本质是什么
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,包括真核生物的细胞器（主要指线粒体和叶绿体）中和细菌细胞拟核区以外的环状脱氧核糖核酸(DNA)分子。质粒是环状DNA 希望可以帮助你哦, 质粒是真核细胞细胞核外或原核生物拟核区外能够进行自主复制的遗传单位,DNA分子是携带遗传信息的载体,deoxyribonucleic acid 的缩写（DNA）,脱氧核糖核酸 实际就是,,,
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出门在外也不愁pBR322质粒的问题！！！紧急！_百度知道
pBR322质粒的问题！！！紧急！
什么含义,,pBR322质粒中的选择记号请问这个选择记号是什么意思,
可供转化子的选择标记是它的第三个优点。　　质粒载体pBR322的第四个优点是具有较高的拷贝数,“BR”代表两位两位研究者Bolivar和Rogigerus姓氏的字首,“322”是实验编号。　　质粒载体pBR322的大小为4361bp,该特性为重组体DNA的制备提供了极大的方便。,相对分子质量较小的是它第一个优点。优点之二是它带有一个复制起始位点,使用最早且应用最广泛的大肠杆菌质粒载体之一。符号质粒载体pBR322中的“p代表质粒,经过氯霉素扩增以后,每个细胞中可累积份拷贝,那个选择记号应该是经过标记的特定核酸序列或者具有特定表达功能的序列……质粒载体pBR322是研究得最多,保证了该质粒只在大肠杆菌的细胞中行使复制的功能。具有两种抗生素抗性基因,
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出门在外也不愁多个质粒兼容性 - 分子生物 - 小木虫 - 学术 科研 第一站
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多个质粒兼容性
求助各位：
& &想几个质粒共转化，但搞不清楚质粒的兼容性，载体为pFN76，origin为pSC01，这个质粒能与pCDFDuet-1和pET28b以及pACYC184这三个质粒同时兼容吗？也就是说pSC01 这个origin能与什么质粒相兼容啊~谢谢~
几种质粒的抗性不同，origin不同，才可以共转化成功的 pSC01 这个origin能与什么质粒相兼容啊,回答：能与不是pSC01 这个origin的质粒相兼容。只要不是这个起始的，都可以兼容，你查一下其他质粒的复制起点。 PSC101可以和P15A还有PMB1/ColE1兼容，和P15A兼容可能不完美（我实验中菌落大小常常不统一），也有一些人说不可以 http://openwetware.org/wiki/Escherichia_coli/Vectors
我自己用双质粒系统一般PSC101/P15A+PMB1/ColE1
三质粒系统一般是PSC101+P15A+PMB1/ColE1
pCDFDuet-1 是CDForigin，我没用过，不过看说明可以和pACYC184（P15A）/pET28b（PMB1+ROP）兼容，但是和pSC101关系我不清楚，你自己试下吧。。 另外并不是名字不一样就兼容，和控制质粒copy的方法有关，具体看我楼上链接。
另外PBR322=PMB1+ROP
PUC=single mutation of PMB1
ColE1和PMB1几乎一样，这是一个家族的。 : Originally posted by Haibara_Ai at
PSC101可以和P15A还有PMB1/ColE1兼容，和P15A兼容可能不完美（我实验中菌落大小常常不统一），也有一些人说不可以 http://openwetware.org/wiki/Escherichia_coli/Vectors
我自己用双质粒系统一般PSC101/P15A+PM ... pSC01和P15A我试过共转化~兼容的很好~也没有菌落大小不一的情况~ 你有PACYC184质粒吗？能不能惠赠点？谢谢 楼主你好，实验想用pCDFDuet-1，可不可以用其他质粒和你交换啊
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