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文档介绍：
卿滥州医学院硕十学何|^文沦文题口答辩委员会卡席答辩委员会成员论文答辩曰期帮濉州医学院硕十学化|^文目录缩略词表………..……摘要…………………Abstract . .......前言………………………一材料和方法……………….一、实验仪器…………………….=、主要试剂………….三、实验方法……一…第一部分实验动物……第=部分细胞分选第三部分质粒构建………第四部分胚胎电转……………………………..第五部分原位杂交及免疫荧光……………第六部分细胞培养及转染………一第七部分荧光素报告检测………………….第八部分Q-PCR…………………………第九部分其它分子生物学寰验实验结果…………………第一部分:miR.218富表达在小鼠第五皮层第=部分:miR.218的在体功能研究1.miR.218抑制皮层神经元迁移………… 4…1111……12….2020…20….21…24…25…27…2930……35.40.40……4141蛳滥州医学院碳f,学化沧文2迁移受抑制的神经元树突早期分化受抑制…………433.miR一21 8抑制皮层神经元胼胝体投射…………444抑制miR.218表达后对神经元的迁移没有影响…..45第三部分:miR一218可能存在的作用机制……………461过表达miR.218不改变神经元的命运……… 462.miR一218不影响皮层神经元其它基因的表达… 473 miR.218不影响皮层神经元的增殖与分化………484.miRNA-218的靶基因可能为Mdgal ………….49分析讨论……结论参考文献………附录……致谢….….综述………学位论文独创性声明∞弱弘卯弱的鹋——堕I塑丛堕堂堕墅±堂丝堕塞缩略词表简写共文全称中文全称BSA Bovine Serum AIbumin 牛sfB@r‘i-门蛋广1DEPC Diethylpyrocarbonat 一己基焦磷酰***dH20 Deionized water 古离子水DIG Digoxin ***DMEM o‘s Modified Eagles Media 改良Eagle培养基dNTP Deox廿ribonucleosjde triphosphate 三磷酸脱氧枚茁DPBS o’s Phosphate Buffered Saline 尤钙镁磷酸缓冲液EDTA Ethylenediarnine Tetraacetic acid 乙:***凹乙酸钠FACS Fluorescence Activated Cell Sorter 流武细胞仪FBS Fetal Bovine Serum 腑牛I|lL}^GFP Green Fluorescent Protein 绿色荧光虽门HBgS Hank‘s Balanced Salt Solution Hank’s下衡盐溶液]UE in utero electroporation 胚胎内基困E电转染ISH /n situ hybridization 原化杂变LB Lu ria.Bertani 细苗培养基LNA locked nucleic acid 锁核酸MEM Minima E s sentiaI Medium 低限毕奉培养基PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸缓冲液PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应PFA Paraformaldehyde 多策甲醛R丁PCR Reverse Transcriptase PCR 逆转录PCRQ-PCR quantitative.PCR 定吊:PCRSDS Sodium Dodecyl Sulphate 十二烷基磺酸钠SSC Salt—Sodium Citrate 柠檬酸钠缓冲液!!! !!!!!型坐!!里!! j!!!型:: 一十按首’,母排序寿1温州I医学院硕十学化|仑文miR一218抑制皮层神经兀的辐射迁移和Hjf胝体投射摘要目标:microRNAs(miRNAs)足类非编码的小RNA.I J以通过抑制靶基冈的翻昂或者引起靶基冈mRNA的降解参斯’o调控许多发育进栉。近米许多报道称miRNA在神经系统发肯和I神经系统疾病的发生发展过程都承担着重要角色。在之前的研究叶1发现,肿瘤生陡抑制囡子miR一218在神经退{J:性疾病Huntin舀On舞蹈病-1,高表达,并H随着病程的进展表达量进一步增·岳。所以奉文将重点研究miR一218存大脑皮层投射神绎几巾的表达及其功能。方法:片先,我们通过O—PCR的方法。检测miR一218往小乩大脑皮层不同发育j钶的表达情况:然后,通过麒化杂交的方法,确定miR一218在皮层的具体表达位置:接下术,利用胚胎山基叫转染技术,存体过袤达或肯抑制miR一218的表达-研究miR-218在皮层神经儿发育过程的功能;另外,通过免疫荧光、RT-PCR的方法,探讨训R一218 uJ能作用的分子8l制;城后,利用_烈荧光裘报告枪测的方法,在体外研究miR一218能行晌控靶基因Mdgal的翻汗。结果:miR.218主要农达在小鼠大脑第五皮层。尽符miR-218对神缂几的产生没有影响,存体过收达miR一218后,l叮以抑制皮层神纤儿的迁移和胼胝体投射。m抑制miR一218的表达,对第五皮层神经兀的迁移没有影i响。同时,体外实验表明miR一218 uj以抑制Mdgal 3’U I-R报告载体的荧光索酶活性-结论:m1R-218 uJ能通过弭羟Mdgal的翻译,抑制神经儿的辐射迁移和肼胝体投射。关键词:miR一2I 8;迁移: 肼胝体投射; Mdga画温州医学院硕L学何|A文miR一218 Inhibits Radial Migration and Callosal Projection ofCortical NeuronsAbstractPurpose:MicrogNAs(migNAs}are small noncoding RNAs that regulate multipledevelopmental processes by repressing translation or triggering degradation of thetarget genes Recent studies demonstrate that miRNAs play prominent roles in neufaldevelopment and diseases A tumor suppressor miR 218 was reported to increase jnexpression with disease grade in Hunt#19ton’s disease of neurodeBeneration in thisstudy,we aimed to elucidate the expression and function of miR-218 ln thedeveloping projection neurons ofthe ce rebral cortexMet1
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