2014RAPD技术在昆虫学研究中的进展-海文库
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2014RAPD技术在昆虫学研究中的进展
应用生态学报 2004年8月 第15卷 第8期 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDECOLOGY,Aug.)∶RAPD技术在昆虫学研究中的进展胡艳红 迟德富333(东北林业大学,哈尔滨150040)【摘要】 综合论述了RAPD
、有害生物鉴定、害虫抗药性诊断指出RAPD技术存在的问题,,,分子标记技术将使昆虫分子生物. 分子遗传标记 --1481-06 中图分类号 Q963 文献标识码 AResearchadvanceinapplicationofRAPDtechniquesinentomology.HUYanhong,CHIDefu(NortheastForestryUniversity,Harbin150040,China).2Chin.J.Appl.Ecol.,):.ThispapersummarizedtheapplicationofRAPDtechniquesininsecttaxologyandecology,relativeofspecies,sys2temicdevelopment,identificationofpest,diagnosingforpestresistance,constructionofmolecularlinkagemap,andmolecularassistantbreeding.TheproblemsexistingintheapplicationsofRAPDinentomologywereindicat2ed,andtheircountermeasuresweregiven.Itwasmentionedthatwiththedevelopmentoftheoriesandexperi2mentaltechniques,insectmolecularbiologywouldmakenewprogressandconquerallthoseproblems.Keywords Entomology,RAPDtechnique,Moleculargeneticmarkers.1 引 言的多态性标记还是能区分它们,因而证明通过RAPD指纹技术,借助于合适的统计分析法,可以对处于不同发育阶段的细胞系进行鉴定或对已知物种的细胞系进行描述.Wald2schmidt等[45]用RAPD标记,分析了膜翅目蜜蜂科昆虫(mandacaia”)的69个品系的遗传变Meliponaquadrifasciata“随机引物扩增(RAPD)标记突破了表达型标记的局限性,其变异只来源于基因DNA序列的差异,能快速而容易地提供遗传变异的信息,具有信息含量高、不同层次和类群之间广泛可比等优越性,因而成为遗传标记中强有力的工具.此技术被大量的应用于昆虫的研究中.2 RAPD技术在昆虫学研究中的应用211 分类学异,根据遗传距离将其区分为M1q1anthidioides和M1q1quadrifasciata两个不同的种群,与形态学分析相符.面对昆虫分类的难题,一种简洁、快速、成本低的方法肯定是受欢迎的,而RAPD技术正符合这种要求,所以它很快被昆虫分类学家运用到实际工作中.南美果蝇(Anastrephafraterculus)的分类地位一直是一个具有争论性的问题,主要现代遗传学表明,物种的遗传性状是由基因决定的,而基因的变异是由于DNA分子中碱基序列的变化造成的,因此人们采用分子生物学技术和生化技术,以DNA分子或其它大分子为材料进行研究,希望从根本上解决形态分类不能解决的问题.嗜人锥蝇(Cochliomyiahominivorax)的幼虫是西半球牲畜的主要害虫,其发育未成熟的早期阶段(1～2龄)同次生锥蝇(C1macellaria)极其相似.Skoda等[39]是因为对其遗传变种的误解.Basso等[
3]用RAPDs2PCR分离多态性片段研究表明,被实验的变种属于1个种,但具有丰富的多态性,不支持其丰富的染色体多态性所暗示的存在隐含种复合体的假设.在昆虫纲里,同翅目与半翅目的关系也一直存在一些争论,目前分类学家大多支持将同翅目划为一个独立的目,应用分子生物学手段分析的结果也证实了这一观点.212 物种亲缘关系及系统发育21211物种的亲缘关系 长期以来,昆虫系统关系的研究主使用120个随机引物,对其进行了RAPD2PCR分析,经过筛选,有21个引物可产生清晰且能够重复的谱带,完全能区分出这两个种.Lery等[19]用RAPD技术区分11种昆虫细胞系,6个取自鳞要以外部形态为依据,对近缘种种间关系的解释有其局限性.分子生物学技术的不断发展和完善,为种间近缘度的解3国家自然科学基金项目()和教育部高校青年教师奖(2000年度)资助项目.33通讯联系人.收稿,接受.翅目的5个种,1个取自双翅目,4个取自鞘翅目(其中一种是克罗拉多马铃薯叶甲Leptiontarasadecemlineata),通过单一引物扩增的DNA指纹谱就能分辨十分接近的种.用Nei统计分析法对4个独立分离的克罗拉多马铃薯甲细胞系分析表明,培养的和田间收集的具有相似的谱带,但从一系列?
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ki.net1482应 用 生 态 学 报 15卷boon[32]构建了含169个标记的家蚕RAPD图谱,构建了29释提供了许多新的方法.程道军等[5]选用重复性较好的10个引物,对6种绢丝昆虫23个个体进行扩增,共得到245个RAPD标记.RAPD分析结果表明,家蚕与野桑蚕两者之间遗传距离小,反映出家蚕和野桑蚕亲缘关系较近;而天蚕、蓖麻蚕和柞蚕三者之间以及分别与家蚕和野桑蚕之间的遗传距离较大,亲缘关系远.聚类分析的结果与之相同.蒋国芳等[15,16]用RAPD技术对蚱属5种蚱基因组DNA的多态性进行了研究,在事先优化的反应条件下用12个随机引物扩增,共得到84条清晰稳定的多态性片段,离指数,然后用UPGMA和NJ确.[]蝗属的3,条清.,等歧蔗蝗与异歧蔗蝗,而与斑角蔗蝗较远.朱道弘等[53]采用RAPD方法,对日本主要稻蝗的DNA多态性进行了分析,得个连锁群,总跨度约900cM.Hunt等[13]利用RAPD标记构建了蜜蜂的基因图谱,包括26个连锁群,平均每10bp引物筛选出的多态性位点达218个,并在此基础上,把决定性别的X位点、控制黑色体色的基因和苹果酸脱氢酶基因分别定位于不同的连锁群上.李斌等[20]已构建RAPD标记200多个,确定了3个RAPD标记分别与Y、od和sch等几,.G[11]()的遗传连锁图(6个RAPD标记),,计93511cM,并用种群隔离.Nagaraju等[29]用RAPD、RFLP、ISSR、STS、微卫星DNA等技术构建了家蚕的遗传图谱,为基因功能鉴定、基因组对比、基因和染色体进化提供了基础,也为基因功能的识别、基因和染色体组的进化以及比较基因组学奠定了基础.213 生态学到了几种稻蝗的种间相似系数和遗传距离,并建立了它们的UPGMA系统树,从而了解其亲缘关系.谭声江等[43]对采自分子标记技术使人们对昆虫的生态学,包括种群遗传分化、种群间迁移扩散关系以及生殖策略等问题获得了更深入的认识.同一物种的不同种群可能发生遗传变异,在形态学上通常难以发现这种差异,但在DNA水平却容易找出明显的不同.杨效文等[48]用RAPD方法,研究了我国烟蚜种群的寄主分化和地理分化.结果表明,我国烟蚜分化仅在种群水平上,未达亚种分化程度.孙姗等[42]采用RAPD方法研究了我国5个地区亚洲玉米螟种群的分化,这有助于了解我国玉米螟的生物学特性和状况,而且对其防治工作也有重要意义.张素方等[51]采用RAPD方法,对全周期桃蚜的有翅性母蚜、无翅性母蚜、雄蚜、卵、有翅迁移蚜等蚜型的DNA遗传多态性进行了分析,结果表明,不同蚜型DNA多态性不同.Skin2ner等[38]利用RAPD技术,研究了紫花苜蓿上一种叶蝉种群陕西师范大学校园和长安县不同巢穴的日本弓背蚁进行了攻击行为测试和RAPD2PCR分析,探讨了它们的亲系识别能力及其遗传背景.Janarthanan等[14]利用RAPD技术,用40个随机引物揭示出种群存在多态性,认为斜纹夜蛾(Spodoteralitura)的3个地理种群中Chengalpattu和Chen2nai的亲缘关系较近,而与Coimbatore较远.21212物种的系统发育 RAPD技术能利用前人采集的标本进行DNA分子多态分析,这可以极大地扩展了系统演化的分子生物学研究范围,有助于建立正确和完善的分类体系,推测正确的系统演化树.鲁成等[25]对具有代表性的中国11个地区的野桑蚕进行了RAPD分析.结果表明,不同地区的野桑蚕的遗传距离较大,同一地区不同个体野桑蚕的遗传距离也较大,它们均远大于家蚕品种内个体间的遗传距离,甚至超过了家蚕品种间的遗传距离,表明中国野桑蚕是一个十分混杂的、遗传多样性非常丰富的群体,另外多数情况下,野桑蚕的遗传距离表现出与空间距离呈正相关.Vandewoestijne等[44]用RAPD和同功酶方法,对比利时2种蝶类的种群遗传结构进行了研究.结果表明,RAPD方法能更精确和及时地揭示出遗传结构,从而了解其系统发育.七星瓢虫(Coccinellaseptempunctata)的迁移和分散及对蚜虫的控制效果还没有真正了解,为定量其种内的遗传多样性和监测其空间分布,Haubruge等[12]从比利时取样,利用RAPD技术,分析了七星瓢虫DNA的多态性,用20个引物内的遗传多样性.结果表明,所有48个个体都具有特殊的RAPD片段,个体间存在随机交配.DosSantos等[7]为鉴定圣1保罗州不同地理分布的种群,借助于RAPD技术分析埃及按蚊(Aedesaegypti)的遗传差异,绘制出埃及按蚊的系统树图,发现在圣?保罗地区的埃及按蚊可被分为两个地理种群,一个主要来自于圣?保罗地区,另一个则主要来自于拉丁美洲的最大港口城市.Nielsen等[30]用RAPD技术,分析了从蚜虫分离出的28个接合菌纲虫霉目PandoraHumber属体外寄生真菌.结果表明,它与地理环境相关
,而与寄主昆虫不相关,与ITS分析一致.Martinez等[27]利用RAPD技术和Operon公司的H216引物,鉴定了巴西Parana州的粉虱(Bemisiatabaci)生物型A和B,发现生物型A比生物型B更广泛存在,同时还发现一种新的生物型,这种生物型只在以木薯为寄主的植物种群中出现.Abdullabi等[1]分别从木薯和其他植物收集粉虱种群,研究了粉虱同木薯的相关性,利用RAPD2PCR技术分析了世界范围内和木薯主栽培区(非洲亚撒哈拉地区)种群的遗扩增出100条多态性带,两者间的遗传距离根据Nei和Li的方法计算,然后构建系统图,比较种内和种群间的变异系数.结果表明,对于种间的RAPD标记可能受多种因素的影响而变得复杂,但对种内遗传多样性的分析则很有效.21213分子连锁图的构建 对一些重要的经济昆虫和模式昆虫,构建基因图谱有巨大的经济价值和理论意义.Prom2?
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ki.net8期 胡艳红等:RAPD技术在昆虫学研究中的进展 1483传结构,发现以木薯为寄主的粉虱仅取食木薯,而以其他植物为寄主的是多食性,寄生于木薯的非洲种群为另一不同群体.Luchai等[26]用RAPD揭示出,模式昆虫水稻蚜的变异同寄主植物相关,既包括在特殊植物上的特殊基因型,又包括在培育的谷类和当地草上的一般基因型;蚜虫同其各自的寄主植物在相同的地理区域并在同一时间出现,这是一个少有的例子.这项研究强调了对遗传多样性和农业环境中寄主类型的理解的重要性.214 在有害生物鉴定和害虫抗药性诊断中的应用达到敏感品系250倍的抗性.Dweikat等[8]利用RAPD技术,使用2000个引物,对小麦(Triticumaestivum)的相近基因系进行了筛选,发现在生物型B中同H6基因相连的DNA标记对黑森蝇(Hessianfly)具有抗性,其中有6个引物显示的多态性片段同H6的抗性相关.基于重组率构建的高分辨率的遗传图谱还显示出,2个标记是同H6紧密连锁的,没有重组发生;有3(STS),其与RAPDY[49]利用RAPD,3(NPV)的不.结果表明,OPA218700和是同主要的抗性基因相联系的,其分子标记的有虫,,工作造成困难.,检验时间,。Kethidi等片段中的序列特征扩增效性在F2代中被证实.Sdorenko等[37]用个体RAPD图谱,对当地的科罗拉多马铃薯甲进行了聚类分析,认为基辅州的种群为一种新的种群,这有助于解释这一害虫对拟除虫菊酯的抗性.215 分子标记辅助育种区(sequencecharacterizedamplifiedregion),鉴定出仅在亚洲长角天牛(Anoplophoraglabripennis)中存在2740bp的DNA片段,并设计出由22个碱基组成的嵌套式寡聚核苷酸引物,利用引物SCAR2和SCAR3,分别扩增出1237和2720bp的片段,这两个片断能够区分当地和紧密相关的非当如何提高育种的效率,一直是育种学家关注的问题,研究的重点之一是利用目标性状与标记间的关联性进行标记辅助选择.周强等[52]提出捕食性节肢动物对信息化合物的接受、识别和学习等行为及与这些行为相关的生理生化和分了基础可作为对水稻挥发性化合物的进一步研究方向.陈克平等[4]用200个RAPD随机引物进行扩增,获得了OPB208850和OPB210917两个与家蚕耐氟性有关的分子标记.汪地种,并且可以对从亚洲长角天牛所有发育阶段的翅、腿、触角、卵、幼虫、蛹、成虫的组织中提取的DNA进行扩增.由此可见,SCAR标记可被用于亚洲长角天牛的鉴定.Rubio2Palis等[35]也利用诊断性RAPD,对Venezuela地区的4种疟蚊(Anopheles)进行了分析鉴定.害虫抗药性的产生是在杀虫剂使用量不断加大的条件下,由于突变和选择作用,与抗药性有关的遗传变异在种群中产生和扩散的结果.RAPD技术一出现,便迅速被应用于害虫抗性机理的研究.利用RAPD技术检测抗性遗传变异,即使在人们对有关抗性基因缺乏深入了解的情况下,也可依赖于抗性基因连锁的DNA多态性标记,对种群的抗性遗传变异进行鉴定.梁革梅等[22]林等[46]筛选到一个与K基因有关的RAPD标记OPV210700.苏松坤等[40]利用RAPD标记,估测蜜蜂性别决定位点与低幼虫存活率位点的标记序列位置,构建了蜜蜂遗传连锁图,确定了蜜蜂性基因位点、黑色体色基因位点、苹果酸脱氢酶I位点,从而确定了影响蜜蜂采粉、报警信息素水平等数量性状的基因座位.O’Donnell[31]对劫掠蜂染色体组DNA进行了RAPD标记,评估了不同RAPD标记段得出的利用RAPD技术,成功地扩增得劫掠蜂的遗传基因相似性.对20个不同群体的随机性测试表明,两个蜂群内的RAPD标记段特化性是非常恒定的.Myburg等[28]应用RAPD分析来识别俄罗斯麦蚜抗性到105条多态性条带,并通过聚类分析发现,棉铃虫对Bt产生抗性后在基因水平上发生了变异,说明RAPD技术不仅可以用来鉴定棉铃虫对Bt是否产生抗性,而且可以区分不同的Bt抗性种群.程罗根等[6]用RAPD方法研究了小菜蛾对基因Dn2的分子标记,有2700个RAPD位置被筛选,用来连接抗性基因座,其中有4个多态RAPD片段(两个是耦合相位
,两个是排斥相位)被鉴定为Dn2基因的RAPD标记.通过F2种群离析分析及分离抗性基因表明,这4种引物都与Dn2基因座紧密相连,F2种群的测序扩增区段(SCAR)以及对其它的抗性或敏感性南方小麦的培育分析,更确证了Dn2抗性基因座的RAPD标记连锁,这些标记对抗性育种和Dn2基因辅助标记选择都有很大的帮助.Gadau等[10]用RAPD技术分析揭示出,单双倍体昆虫Nasoniavitripennis杀虫双和杀螟丹的抗药性遗传标记,为进一步研究抗性基因的分子结构和功能奠定了基础.羟肟氨酸是小麦中抗蚜虫的活性诱变剂.Figueroa等[9]用RAPD2PCR标记分析了蚜虫(SitobionavenaeFabricius)遗传多样性同寄主小麦异羟肟酸(Hx)水平的相关性.结果表明,用高水平Hx品系、低水平品系和缺乏Hx品系处理4～5代后,分别出现两个变异标记、一个变异标记和没有变异标记.Schlipalius等[36]用RAPD指纹产生的遗传连锁图谱,探测出Rhyzoperthadominica对磷化氢的高水平遗传抗性,图谱包括94个显性DNA标记(平均距离为416cM),还定义了9个连锁群(总重组距离为39011cM),鉴定出两个负责高水平抗性的等位基因,其中一个提供50倍抗性,一个提供1215倍抗性,两抗性位点无重组.如果两基因协同作用,可和N1giraulti雄性翅长不同.应用数量性状等位基因(QTL)全基因扫描分析表明,种间翅的不同主要是由于QTL的影响和等位基因的上位相互作用.3 RAPD技术应用中的一些问题及对策RAPD标记是否可靠,可从序列同源性、结果重复性和?
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ki.net1484应 用 生 态 学 报 15卷提高到60度以上,使异源双链变性,以消除其影响.31212非孟德尔遗传的条带 Hunt等[12]分析,在显示多态系统学价值等三个方面来考察.所谓序列同源性,是指PCR扩增产物经电泳分离后,具有相同迁移率的谱带具有序列同源性;结果重复性,是指相同实验人员前后实验的结果是否一致和同一实验在不同的实验室所获结果是否重复;系统学价值则考察用RAPD标记构建的亲缘关系图谱与传统图谱或RFLP图谱的相同或相似程度1共迁移谱带是否具有序列同源性,这是RAPD技术可靠性问题的关键[23,50].311 重复性问题RAPD分析中重复性不太高的原因是在PCR反应中会性的非模糊条带中有9215%表现为孟德尔显性遗传,其余的条带不符合孟德尔遗传,认为可能由不同的序列组成.一般试验中大多采用符合孟德尔遗传的条带进行分析,在连锁图谱分析中,基因型错误可以部分消除,即在F1代或1∶1混合物中没有出现的条带,.31213 ,在不,;(一般是琼脂糖凝胶),而不能分开不同碱基序列但有相同大小的片段[21].Thormann用RAPD产物标记作探针表明,在电泳结果的同一个带中,有可能存在序列不同而分子量相同的几条带,RAPD无法检测,这种可能在种内较少发生,而在种间可能性较大.Castagna用RFLP和RAPD进行研究,也得出了相同的结论.31214电泳分辨率问题 电泳时,不同分子量的扩增产物可引起一些扩增产物的改变,及不同的研究者采用的程序仪器的类型不同.外,,扩增产物[24].[31],在相似反应条件下,特别在保证管内反应温度一致的条件下,不同实验室试验结果可以重复.RAPD校正虽能通过调整模板DNA的用量,提高RAPD扩增的可重复性,但用依据少数几个引物所建立的标准RAPD校正图谱,来校正模板DNA用量,对小样本而言还是可行的,可对大样本而言,在多个引物的条件下实施起来有很多困难.另外,RAPD实验结果的可重复性差的一个重要原因是,在扩增反应过程中,引物的熔点值较低,反应易受环境条件的影响,导致引物降解,扩增失败[54].大多学者认为,引物浓度对扩增影响不大.Bandi等[2]则认为“饱和”,浓度可补偿试验误差,建议使用高浓度引物,如60mg?L-1.为了便于不同实验室间的结果比较,也有专家建议用不同的标准引物,最常用的有测序引物MB-20、T7、T3、KpnR及McG1等引物,这为该问题的解决提出了新的途径.需要注能在电泳时没有分开而形成一条带,凝胶分离系统和基因组的亲缘关系有可能提高这种概率.一般而言,聚丙烯酰胺和银染的分辨效果比琼脂糖和溴化乙铵要高,用较长(可达到20cm)或浓度更高(2%)的琼脂糖凝胶有助于提高分辨率.31215显性标记问题 RAPD标记为显性标记,不能鉴别纯合子和杂合子,易受反应条件的影响,稳定性较差.解决的办法之一是以测序扩增区段标记取代RAPD,即对特异RAPD条带进行克隆并测序,以测出序列一端的寡聚核苷酸引物,以此引物进行基因组常规PCR扩增分析[34];其二,使用该法时要注意严格控制模板DNA和镁离子浓度以及反应条件,
以保证其扩增稳定性.313系统学研究中的问题意的是,使用不同批次的引物,即使其它反应条件都保持一致,也会有不同的结果.为了克服RAPD重复性差的问题,应设置重复实验.重复性好是最重要的取舍指标,而带的强弱不应该作为取舍的指标.分析一个位点时,要作全面分析,若某一个体的全部带均弱,其模板可能有问题(浓度、分子量);若某一个体的大部分带与其它个体强度一致,仅有一条或少数几条带弱,可能存在拷贝数差异.重复性不好的弱带(无规律出现的带)可能由非专一性扩增、产物间退火或其它人为因素造成,不能记录[41]系统学是应用RAPD技术最为迅速的领域.许多昆虫都用RAPD作过亲缘关系分析,大部分结果和形态分类结果相类似,仅有少数例外.但是近年来,有人对其结果的可靠性提出不同的看法,主要有以下几点:1)值得注意的是,由于引物的竞争性等,基因组的RAPD位点有时不能全部检出,造成假象上的差异.根据这种情况,RAPD可以应用于种间乃至近缘属之间关系的研究,但有一定的局限性.由于不同种的扩增产物难以作同源性分析,只能作表征分析,所以只能从相似性或遗传距离上去分析亲缘关系,其结果可能与真实的系统关系不同,这是由实验条件不当所造成的,可以通过多次重复试验加以克服.2)因RAPD在种间或属间的变异水平很高,样品的代表性是一个较大的问题,即利用某一个体代表一个种或用一个种代表一个属都可能造成偏差.因而,最好能找到群体特异或种特异性的条带.3)在表征分析中另一个值得注意的问题是,一些RAPD产物的出现存在相关关系,即一个位点与另一个位点相连锁.若将这个差异单独计算,相当于对某一性状极度加权.4)在系统发育学分析中,RAPD条带具有显性的遗传特征,多态性信息量较低.这样.因此,优化RAPD实验条件是增强其实验结果可重复性,从而提高RAPD标记可靠性的有效手段.实验条件优化的关键是提高扩增的特异性,重要环节是建立合适的反应体系和设置合适的反应程序.从昆虫样品制备DNA模板是成功地进行PCR的关健前提.传统的苯酚-氯仿抽提法较复杂,而且不能提取痕量样品的DNA.Wen等[47]推荐了一种适用于不同目昆虫的制备DNA的方法,能够成功地扩增不同样品的基因,包括新鲜的、冷冻的、干的或者保存在酒精和福尔马林中的样品,并且还能扩增核和线粒体的基因.312 序列同源性问题31211异源双链问题 在研究蜜蜂中发现了异源双链相似问题.这种条带可以用单链核酸酶消除,也可以将电泳温度?
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ki.net8期 胡艳红等:RAPD技术在昆虫学研究中的进展 1485估算的基因多样性值的标准差,理论上会比有多个核基因蛋白座位的大.其非编码区在一些昆虫类群中的进化速度很快,因此做种上水平研究时,将会影响结果的准确性,但对种下水平影响较小.有些昆虫存在着趋同进化和趋异进化的情况,因此用RAPD作系统分析,应结合其它方法,结果才更有说服力[17].4 结 语由于RAPD技术可以对整个基因组作地毯式的多态分析,所以其灵敏程度可以与DNA序列分析和DNA美,同时RAPD技术还可以和其它DNA,就大大扩展了分子应综上所,RAPD,.每一种技,只有仔细研究,在实际运用中注意取长补短,才能发挥出其最大的作用.RAPD技术也是如此,对此进行的一系列研究,会使RAPD技术日益成熟和完善,并在人类认识自然生命现象中发挥更大的作用.参考文献1 AbdullabiI,WinterS,AtiriGI,etal.2003.Molecularcharacteriza2tionofwhitefly,Bemisiatabaci(Hemiptera:Aleyrldiae)popula2tionsinfestingcassara.BullEntRes,93(2):97～1062 BandiC,LaRosaG,BardinMG,etal.1995.RandomamplifiedpolymorphicDNAfingerprintsoftheeighttaxaofTrichinellaandtheircomparisonwithallozymeanalysis.Parasitology,110(4):401～4073 BassoA,SonvicoA,Quesada2AllveLA,etal.2003.KargotypicandmolecularidentificationoflaboratorystocksofthesouthAmericanfruitflyAnastrephafraterculus(Wied)(Diptera:Tephritidae).JEconEnt,96(40): ChenK2P(陈克平),LuC(鲁 成),XiangZ2H(向仲怀),etal.2001.CloningandsequencingtheRAPDmarkersofenduringfluo2rideinsilkworm(Bombyxmori).JAgricBiotechnol(农业生物技术学报),9(2):136～138(inChinese)5 ChengD2J(程道军),LuC(鲁 成),ZhonZ2Y(周泽扬),etal.2002.RAPDstudiesonthephylogeneticrelationshipofseveralspeciesofsilkspinninginsects.SciSilkworm(蚕业科学),28(4):277～282(inChinese)6 ChengL2G(程罗根),LiF2L(李凤良),HanZ2J(韩招久),etal.2001.RandomamplifiedpolymorphicDNAofresistancetodimehy2poandcartapindiamond2backmoth,Plutellaxybostella.ActaEntSin(昆虫学报),44(1):15～20(inChinese)7 DosSantosVM,MacorisMdeL,AndrighettiMT,etal.2003.AnalysisofgeneticrelatednessbetweenpopulationsofAedesaegyptifromdiffer2entgeographicregionsofSaoPaulostate,Brazil.RevInsMedTropSaoPaulo,45(2):99～1018 DweikatI,ZhangW,OhmH.2002.DevelopmentofSTSmarkerslinkedtoHessianfiyresistancegeneH6inwheat.TheoryApplGenet,105(5):766～7709 FigueroaCC,FigueroaCC,Loayza2MuroR,etal.2002.TemporalvariationofRAPD2PCRphenotypecompositionofthegrainaphidSitobionavenae(Hemiptera:Aphididae)onwheat:Theroleofhy2droxamicacids.BullEntRes,92(1):25～3410 GadauJ,PageRE,WerrenJH.2002.ThegeneticbasisoftheinterspecificdifferencesinwingsizeinNasonia(HPtero2malidae):Majorquantitativetraitlociandepitasis.Genetic,161(2):673～68411 GakauJ,GerloffCU,KruegerN,etal.2001.AlinkageanalysisofsexdeterminationinBombusterrestris(L.)(Hymenoptera:Api2dae).Heredity,87(2):234～24212 HaubrugeE,Vanlerberghe2MasuttiF,CollingnonP,etal.2002.TheuseofrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)analysisforstudiesofgeneticvariationinpopulationsofCoccinellaseptem2punctatainBelgium.MededRijksunivGentFakLandbouwkedToegepBiolWet,67(3):557～56113 HuntGJ,PageREJr.1995.Linkagemapthehoneybee,Apismellifera,basedonRAPDmarkers.(3): ,K.2002.UseofRAPDingeneticinlitara.IndJExp,)～841()).2003.AnalysisofthegeneticrelationshipsamongthreespeciesofgrasshoppergenusHieroglyphus(Orthoptera:Acridoidea:Catan2topidae)usingRAPDmarkers.Entomotaxonomia(昆虫分类学报),25(2):85～90(inChinese)16 JiangG2F(蒋国芳),LuG(陆 敢),HuangK(黄 琨),etal.2002.Studiesongeneticvariationsandphylogeneticrelationshipsa2mongfivespeciesofTetrixusingRAPDmarkers.ActaEntSin(昆虫学报),45(4):499～502(inChinese)17 JiaoF(焦 锋),LouC2F(楼程富).2000.Problemsanditscoun2termeasureinapplicationofRAPD.ActaAgricBoreali2Occidental2isSin(西北农业学报),9(4):98～102(inChinese)18 KethidiDR,RodenDB,LaddTR,etal.2003.DevelopmentofSCARmarkersfortheDNA2baseddetectionoftheAsianlong2hornedbeetle,Anoplophoraglabripennis(Motschulsky).ArchIn2sectBiochemPhysiol,52(4):193～204(inChinese)19 LeryX,LaRueB,CossetteJ,etal.2003.Characterizationandau2thenticationofinsectcelllinesusingRAPDmakers.InsectBiochemMolBiol,33(10): Li2B(李 斌),LuC(鲁 成),ZhouZ2Y(周泽扬),etal.1999.Progressinconstructingofmolecularlinkagemapandmolecularmarkersassistedbreedinginsilkworm.Hereditas(遗传),21(4):54～56(inChinese)21 LiY(黎 裕),JiaJ2Z(贾继增),WangT2Y(王天宇).1999.Typesofmolecularmarkersandtheirdevelopment.BiotechnolInf(生物技术通报),4:19～22(inChinese)22 LiangG2M(梁革梅),TanW2J(谭维嘉),GuoY2Y(郭予元).2000.PrimaryRAPDPCRanalysisontheresistantpopulationsofcottonbollwormtoBacillusthuringiensis.PlantProt(植物保护),26(3):4～6(inChinese)23 LiuC2L(刘春林),GuanC2Y(官春云),LiX(李木旬).1999.Stud2iesontheauthenticityofplantRAPDmarker.BiotechnolInf(生物技术通报),2:31～34(inChinese)24 LoweAJ,HanotteO,GuarinoL.1996.Standardizationofmoleculargenetictechniquesforthecharacterizationofgermplasmcollections:thecaseofrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD).PlantGenetResNewslett,107:50～5425 LuC(鲁 成),YuH2S(余红仕),XiangZ2H(向仲怀).2002.ThegeneticdiversityandphylogeneticrelationshipofBombyxmanda2rinaandB.morifromChinabasedonRAPDanalysis.ActaEntSin(昆虫学报),45(2):198～203(inChinese)26 LuchaiG,MarkovitchO,LoxdaleHD.2002.Host2basedgenotypevariationininsectrevisited.BullEntRes,92(2):159～16427 MartinezSS,deCarvalhoAOR,VieiraLG,etal.2000.Identifica2tion,geographicaldistributionandhostplantsofBemisiatabaci(Genn.)Biotypes(Homoptera:Aleyrodidae)intheStateofParana,Brazil.A
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