外源脱落酸对苹果、葡萄果实内ATPase表达的影响--《中国农业大学》2003年硕士论文
外源脱落酸对苹果、葡萄果实内ATPase表达的影响
【摘要】：
本实验以苹果(Malus domestica Borkh. cv. Red Starking)果实及葡萄(Vitis vinifera L. ×V. lubrusca L. cv. Kyoho)果实为试材，利用胶体金免疫电镜技术和Western印迹方法研究外源ABA对苹果、葡萄果实内PM H~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase和V-ATPase表达量的影响。结果表明，PM H~+-ATPase分子量为99.7 KDa，定位于质膜，少量位于囊泡膜，在苹果果实发育前期含量最高，且表达受ABA诱导。Ca~(2+)-ATPase广泛定位于生物膜系统，ABA处理使其总含量升高，在果实发育中期有一个高峰，且后期表达量多于前期表达量。抗体在苹果果实微粒体中杂交得到一条121.1 KDa的蛋白条带，而在葡萄果实微粒体中分别得到100.6 KDa和112.3 KDa的蛋白条带，且两条带变化规律相似。V-ATPase主要位于液泡膜、质膜和囊泡膜，在果实发育中期含量最低，在生长发育过程中，各亚基含量呈非一致变化，ABA主要诱导了催化亚基的合成与表达，并表现为在质膜上明显增强(含珠光壁的筛管分子除外)。在苹果果实中，62.2 KDa的结合亚基和71.3 KDa的催化亚基的含量分别于果实发育前期和后期达到高峰，而葡萄果实中58.1 KDa的结合亚基和75.4 KDa的催化亚基的含量变化恰与苹果果实中相应亚基的变化相反，即随葡萄果实成熟进程，结合亚基的数量逐渐上升，催化亚基的数量逐渐下降。外源ABA处理能不同程度地增加以上三种酶的酶量。
总之，PM H~+-ATPase、Ca~(2+)-ATPase的含量分别在果实发育的前期、中期达到最大值，而V-ATPase在果实发育中期含量最低，外源ABA处理诱导了以上各类ATPase的表达。
【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2003【分类号】：S482.8【目录】：
缩略语表5-6
ABSTRACT7-8
第一章 文献综述8-11
1 PM H~+ ATPase8
2 Ca2~+-ATPase8-9
3 V-ATPase9
5 ABA对ATPase的影响10-11
第二章 外源ABA对苹果、葡萄果实内ATPase表达量的影响及ATPase亚细胞定位11-28
2 实验材料与方法11-13
2.1 材料处理11-12
2.2 样品包埋12
2.3 免疫染色12
2.4 蛋白质提取12-13
2.5 蛋白质浓度测定13
2.6 SDS-PAGE13
2.7 Western blotting13
3 结果与讨论13-28
第三章 结论28-29
参考文献29-34
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