细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
试剂、试剂盒
仪器、耗材
一、 样品RNA的抽提
取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12 000 rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
RNA清洗 移去上清液，每1 mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1 ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7 000 rpm离心5分钟。
RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
二、 RNA质量检测
紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
（1）浓度测定
A260下读值为1表示40 μg RNA/ml。样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 μg/ml。具体计算如下：
RNA溶于40 μl DEPC水中，取5 μl，1:100稀释至495 μl的TE中，测得A260 = 0.21
RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 μg/ml = 840 μg/ml 或 0.84 μg/μl
取5 ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 μl，剩余RNA总量为：
35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg
（2）纯度检测
RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
变性琼脂糖凝胶电泳测定
1 g琼脂糖溶于72 ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS电泳缓冲液 浓度
成分 0.4 M
MOPS，pH 7.0 0.1 M
乙酸钠 0.01 M
灌制凝胶板，预留加样孔至少可以加入25 μl溶液。胶凝后取下梳子，将凝胶板放入电泳槽内，加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。
（2）准备RNA样品
取3 μgRNA，加3倍体积的甲醛上样染液，加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10 μg/ml。加热至70℃孵育15分钟使样品变性。
上样前凝胶须预电泳5 min，随后将样品加入上样孔。5-6 V/cm电压下2 h，电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2-3 cm。
（4）紫外透射光下观察并拍照
28S和18S核糖体RNA的带非常亮而浓（其大小决定于用于抽提RNA的物种类型），上面一条带的密度大约是下面一条带的2倍。还有可能观察到一个更小稍微扩散的带，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖体RNA）组成。在18S和28S核糖体带之间可以看到一片弥散的EB染色物质，可能是由mRNA和其它异型RNA组成。RNA制备过程中如果出现DNA污染，将会在28S核糖体RNA带的上面出现，即更高分子量的弥散迁移物质或者带，RNA的降解表现为核糖体RNA带的弥散。用数码照相机拍下电泳结果。
三、样品cDNA合成
逆转录buffer
逆转录酶MMLV
轻弹管底将溶液混合，6 000 rpm短暂离心。
混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5 μl，37℃水浴60分钟。
取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。
四、 梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR
β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3 μl按10倍稀释（加水27 μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
反应体系如下：
标准品反应体系
SYBR Green 1 染料
阳性模板上游引物F
阳性模板下游引物R
阳性模板DNA
32.5 μl 8
轻弹管底将溶液混合，6 000 rpm短暂离心。
管家基因反应体系：
SYBR Green 1 染料
内参照上游引物F
内参照下游引物R
待测样品cDNA
32.5 μl 8
轻弹管底将溶液混合， 6000 rpm短暂离心。
制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃　2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
五、 制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板
针对每一需要测量的基因，选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。
10× PCR缓冲液
MgCl2 溶液
dNTP混合液
加水至总体积为
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
35个PCR循环（94℃1分钟；55℃1分钟；72℃1分钟）； 72?C延伸5分钟。
（3）PCR产物与 DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
（4）将PCR产物进行10倍梯度稀释: 将PCR产物进行10倍梯度稀释: 设定PCR产物浓度为1×1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104几个浓度梯度。
六、 待测样品的待测基因实时定量PCR
所有cDNA样品分别配置实时定量 PCR反应体系。
体系配置如下：
SYBR Green 1 染料
待测样品cDNA
轻弹管底将溶液混合，6 000 rpm短暂离心。
（3）将配制好的PCR反应溶液置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增反应。反应条件为：93℃ 2分钟预变性，然后按93℃ 1分钟，55℃1分钟，72℃1分钟，共40做个循环，最后72℃7分钟延伸。
七、 实时定量PCR使用引物列表
引物设计软件：Primer Premier 5.0，并遵循以下原则：引物与模板的序列紧密互补；引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构；引物不在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。
各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
最新实验心得
(共4个心得)
CT值越高说明扩增的产物越多，这个方法我试过；还有就是可以在逆转录的时候增加total RNA量，一般是1000ng；镁离子浓度我没有试过，我们用的是东洋纺的SYBR MIX,就按上面的量来加，mg都是混好的。我们用的内参是18s，一般CT正常能在13,14左右。
发表于 12:57
多聚集链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技术实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具。
发表于 17:58
一般的RT-PCR引物是不能用来做是实时荧光定量的的引物的，但是你可以设计出兼顾二者的引物，除了要注意一般引物设计的原则外，愚见认为还要注意下两个问题：
1：设计引物扩增出来的片段一定要小一点不要超过250bp尽量在200bp以内，150bp以上
2：实时荧光定量的引物一定要更加注重它的错误引发效率，越低越好。
发表于 23:05
(共38个问题)
相关实验Protocol
谁能提供实验帮助？
谁做这个实验？
提取rna就是个难事儿，稍有一点污染误差很大
不会啊，好伤心
还是没明白实时荧光定量PCR的引物与普通PCR的引物有何区别
成功要加油！
初学者，觉得此实验很复杂，在一点点地学习中。作者这篇文章给我很大帮助。谢谢作者
谁关注这个实验？
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.找不到您所需的产品，发布求购试试？
请填写所需产品描述荧光定量PCR技术原理与应用_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
评价文档：
荧光定量PCR技术原理与应用
上传于||暂无简介
大小：7.63MB
登录百度文库，专享文档复制特权，财富值每天免费拿！
你可能喜欢实时荧光定量pcr仪_百度百科
实时荧光定量pcr仪
实时荧光定量pcr仪，由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。被绘制成相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。
实时荧光定量pcr仪概述
仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时检测系统。
实时荧光定量pcr仪PCR优势
样品到达域值水平所经历的循环数称为（的循环数）。域值应设定在使的扩增效率为最大，这样可以获得最准确，可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的，分析将产生一条，可以用来计算未知样品的浓度。
实时荧光定量pcr仪技术原理
所谓real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过对未知模板进行定量分析的方法。在 real-time 技术的发展过程中，两个重要的发现起着关键的作用：（1）在90年代早期，Taq的5′活性的发现，它能降解特异性荧光记探针，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。（2）此后荧光探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用。
PCR反应过程中产生的DNA是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，最终PCR反
应不再以指数方式生成模板，从而进入。在传统的PCR 中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终扩增产物，因此用此对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-time Q-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着反应时间的进行，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板最初的含量。为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （），荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct）。的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始的 存在，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的可作出，因此只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。
实时荧光定量pcr仪医疗应用
实时荧光定量pcr仪⑴ 病原体检测
目前，采用检测技术可以对、、、、、、肝炎病毒、流感病毒、、和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。
如：结核菌的意义主要表现在：
a.区分TB与其它；
b.检测TB耐药基因；
c.提高TB的阳性。
实时荧光定量pcr仪⑵ 产前诊断
到目前为止，人们对遗传性物质改变引起的还无法治疗，只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少遗传病患儿的出生，从孕妇的中分离胎儿DNA，用检测其Y区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。
实时荧光定量pcr仪⑶ 药物疗效考核
对(HBV)、(HCV) 定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，治疗作用不敏感，而低，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。如PCR技术在HBV检测中的应用及意义：
a.了解乙肝病毒在体内存在的数量。
b.是否复制。
c.是否传染，传染性有多强。
d.是否有必要服药。
e.改变是否由病毒引起。
f.判断病人是适合用哪类抗病毒药物。
g.判断药物治疗的疗效。
实时荧光定量pcr仪⑷ 肿瘤基因检测
尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过hTERT基因、WT1基因、肿瘤ER基因、PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。随着与肿瘤相关的新基因的不断发现，将会在肿瘤的研究中发挥更大的作用。
实时荧光定量pcr仪在优生优育中的应用
近年来经济发展迅猛，人民生活水平逐年提高，对自身及家人特别是下一代的身体健康愈来愈重视。另外，由于国内计划生育工作逐步走向深化，独生子女比较多，孩子的身体素质更成为长辈们关注的焦点。因此，怎样提高新生儿质量改善人类遗传素质，即已显得非常重要。①避免有严重和的个体出生。②增进体力、智力优秀个体的繁衍。其中避免有严重遗传性疾病及先天性疾病个体出生是优生优育最基本的内容。从角度分析具体工作包括在母亲妊娠期间对母亲及胎儿进行遗传学检查尽量排除常见的遗传性疾病个体的出生，另外在妊娠期检查母亲是否患有某些易引起的传染性疾病如、、等感染。以往对遗传性疾病的检测主要使用染色体分析法，而临床绝大部分遗传性疾病是基因病而不是，染色体发析法不能检出的。若使用PCR法联合单链构型分析（）、分析（RFCP）特异性寡核某酸（Aso）或差异PCR可以很方便地检出单个基因的突变而且其准确性可达95%以上，因此使这一问题得到了较好的解决。常见的易致胎儿畸形的感染性疾病原体主要有（HSVⅡ）、风疹病毒（RV）、（HCMV）、弓形体（TOX）及（CT）。以往这些病原体感染诊断比较困难，主要靠培养法进行确诊，而培养法费时，代价昂贵，而且受到采样、样本保存及用药等因素的影响，基本不能在临床中推广。PCR基因扩增法因其感性、高特异性非常适合这些疾病诊断及疗效跟踪，是最值得推荐的检验方法。
实时荧光定量pcr仪扩增法
实时荧光定量pcr仪在遗传性疾病产前诊断中的应用
PCR法在中的应用，遗传病是由于遗传物变化而引起的机体某一功能或缺陷或异常所致的疾病，其根本变化在于遗传物质。其类型包括，染色体遗传病及。遗传病诊断除询问病史，一般物理诊断，普通实验室检查及了解症状、体征外有特殊性。过去常应用，染色体及性染色色质检验作为遗传病诊断的主要依据，再辅以相关的酶学分析从而作出诊断。随着分子生物不的迅速发展及其在遗传性病诊断中的广泛应用，诞生，基因诊断技术为遗传病的临床诊断起了很大的促进作用。（PCR）技术是主要技术之一。这种快速、灵敏的基因技术与多种分子生物学手段相配合可以检出大部分已知的、基因缺失、染色体错位等，PCR技术日益成为遗传病诊断的最有效、最可靠的方法之一。以下举几个在国内有普遍意义的例子。
实时荧光定量pcr仪PCR检测地中海贫血
（Thalassemia）是一种遗传性慢性病，是世界上最常见且发病比最高的一种。在两广、贵州、四川等地发病率较高，在广西等地高达15%。地中海贫血是由于造成的不平衡，使结构正常的肽链合成量减少甚至没有合成表现为溶血性贫血。接受累基因种类分为α、β、γ等，其中以 α、β地贫为最常见，危害了最大。簇位于人6号染色短臂上，有两个基因位于α1、α2、两个α基因及其旁侧序列有很大的，易出现染色体，导致α基因缺失－α地贫。α部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同时缺失及非缺失型地贫。可以应用PCR技术扩增α1、α2基因从而检测这些基因是否缺失、突变等，从而对α型作出诊断。β地中海贫血基因缺陷主要表现为基因序列中单一核苷酸的突变，或少数的缺失、插入，使正常β肽链合成减注或缺失。应用位点特异性寡核苷探针（Aso）进行PCR产物即可对其作出诊断。
实时荧光定量pcr仪苯丙酮尿症
苯西酮尿症（PKU）是一种，患者因苯丙酸羟化酶转化为酷氨酸，使苯氨酸及其代谢物在体内大量蓄积，出现脑组损伤及不可逆性智力发育障碍。PKU患者出生时正常，新生儿一经确诊为PKU停止母乳喂养采用低钦食疗法8—10年，可使患者智力水平发展维持正常。由于低苯丙氨酸钦食非常昂贵，一般家庭难以承受，因此，施行，防止患儿出生是最好的选择。PAH只在中表达，不能用，、羊水、绒毛细胞进行酶活性分析，只能进行。PKU的基因变化并非全部PAH基因的缺失，而是以点突变为主要表现形式，而且其突变位点很多。必须使用结合，ASO，或使用分析（AmpFLA）进行检测，这些技术都较复杂，检验人员须经专业培训。
实时荧光定量pcr仪血友病
是一组最为常见的遗传性，根据因子缺陷的不同分为甲、乙两型，（Ⅷ、Ⅸ因子缺陷），也有复合型血友病，但不常见。发病率为1/10000，Ⅷ因子基因位于基因附近，全长186Kb，大范围的（缺失、插入、重复）导致甲型血友病的病例很少，仅为Ⅷ因子缺陷的5%，大部分病人表现为单个或少数碱基的突变。由于Ⅷ因子基因长度为186Kb，突变位点多，而且新生突变频率高，从临床角度讲不能对每一个突变都检测，可对最为常见的几种突变类型进行检测，主要的检测手段是PCR结合RELP分析。发病率占血友病的20%，其基因变化及检测方法与甲型血友病类似。
实时荧光定量pcr仪性别发育异常
区别雄性及雌性的物质基础是，哺乳动物中，雌性不需要任何调节，而雄性表型则由多因素决定，位于上的指导雄性性别分ss化的基因命名为决定因子（TDF）。现代研究表明，SRY（Sex-determining region of Y chromosome）基因是TDF基因，位于Y染以体短臂末端。SRY区缺失易导致46XY成女性。进行基因检测可以检出SRY的易位及缺失，从而诊断异常，这一探索性别异常的研究非常热门。另外还有一种46XY核型异常的病人即睾丸女性化，这是用于（androgen receptor,AR）基因缺欠，使雄激素的对雄激素不应答就答或不全而引起的，根据病情的不同有不同的表型，AR缺陷有很高的新生，表现为无家族史的散发病。AR基因长90Kb，位于上，AR基因异常大部分为个别基因的突变，可以通过PCR结合ASO或SSCP检出。
实时荧光定量pcr仪脆—X综合征
脆—X综合片（fragile-X Syndrome,Frax）是发病率最高的一种X-连锁的智力低下综合症（X-linked mental retardation XLMR）。因这种综合症与X染色体上的脆位点连锁而得名。大多数FRAX男性智商（IQ）低于50，并有随着年龄增长而下降的趋势。用人工酵母染色体（artificial yeast chromosome,YAC）分离获得覆盖X-脆位点区域的YAC克隆，在这一克隆中获得一个能在人脑中表达的基因命名为FMR-1（fragile X mentai retardation-1）,FMR-1的5‘端有一个CGG（精）三核苷酸串（CGG）n,正常人群中（CGG）n中存在，重复序列为6-46个，当重复超过52个时，此区域的分裂呈不稳定，导致重复序列大幅度增加，无临床表现的携带者长度小于500bg，有临床表现者，长度都大于600BP而且伴有。人们将500bp作为与的。对Frax的诊断以前用细胞遗传学的方法检测脆位点，实验条件严格，成功率不高。现在采用方法即可诊出前突变及全突变。用CGG重复序列，检测扩增产物的长度。突变基因的扩增片段增大，体细胞时出现多条长度不等的扩增带甚至拖尾成一片，或者因为扩充的全突变插入片段过长超出PCR扩增能力而结果无扩增现象。
实时荧光定量pcr仪在“Torsch”诊断中的应用
PCR法在“Torsch”诊断中的应用，在妊娠早期（1-3个月），有些病原微生物的感染易导致胎儿畸形，这些病原体中最常见的有弓体（TOX）、（RV）、（HSV）、（CT）、及巨细胞（HCMV），对这几种病原体的检测根据其英文词首简称为Torsch试验。
实时荧光定量pcr仪弓形体的PCR检测
弓形体有广泛的自然疫原性，人体多为，抵抗力低时可以有临床表现。弓形体的诊断较困难，血清学方法敏感性较高但有交叉性出现假阳性而且无法确定近期感染、远期感染或一过性感染。确诊的方法是或动物接各，这些方法阳性率太低不能推广。PCR检测可以检出样本中1-2个病原体而且准确性高，是目前对弓形体检测最优秀的方法。作为优生优育检查应于妊娠前或妊娠早期取全血样本，可以用或抗凝，以EDTA抗凝效果最好，检测中是否有TOX存在。对于不孕，多次或养小动物的产期妇女，作检测有更重要的临床意义。
实时荧光定量pcr仪风疹病毒感染
（RV）是一种单股正极性，人是病毒的唯一。RV感染可以引起胎儿的畸形，影响胎儿免疫系统的发育，因此RV检测在工作中显得非常重要。RV检测可以用直接培养法及测试法。培养法费时很长而且常受到其它病毒的干扰，IgM测定法结果了不太准确，PCR法敏感性及特异性都很高而且简便快速，是RV感染最优秀的测试方法之一。风疹病毒侵入体内后在上呼吸道增殖而出现症状，面部出现丘疹，迅速遍及全身。样本采用妊娠母亲的咽部拭子、血清、产妇的绒毛或妊娠如羊水等。RV病毒是RNA病毒，较复杂，应注意样本的采集时机，操作的准确性。
实时荧光定量pcr仪单纯疱诊病毒
（herpes simplex virus,HSV）是一种，可引起多器官的炎症，可通过性。HSVⅡ感染复发率高，80%的感染者于12个月内复发。HSV感染后经机体免疫系统清除，少数病人终生携带，体弱时复发。检测HSV敏感性高而且可以直接对HSVⅠ/Ⅱ型进行分型鉴定。
实时荧光定量pcr仪沙眼衣原体
（CT）不仅能引起而且能引起感染，是一种性传播性疾病。与（NG），等经典性传播性疾病不同，CT易经其它接触途径传播，少数地区对妊娠期妇女普查结果表明此人群中发病率高达20%-30%。在欧美等国家CT的感染已超过淋病而居性传播性疾病之首。衣原体感染常呈无症性或非特异性症状的，不容易诊断。以往用培养法进行确诊，费时且敏感性、准确性都不足。PCR用于CT检测时应注意不同检测目的的取材不同，对于性传播性疾病诊断应取生殖道分泌物（查），而对于病人应查其全血样本，在妊娠后期或临产时再查阴道分泌物以便指导生育时清理。
实时荧光定量pcr仪人巨细胞（HCMV）
HCMV感染十分普遍，除少数感染发生原发性外，极大多数为。HCMV可以长期潜伏在体内，当机体时，病毒会激活而造成严重疾病在妊娠期如果孕妇感染HCMV可以引起早产、畸形、及新生儿等。HCMV属，可以从唾液、尿、宫颈分泌物及乳汁排出。HCMV“金标准”的诊断试验是用单层作病毒培养，其它的实验检查有血清学的检测及包涵体检测。PCR是HCMV检测的一种新方法，用于检测的样本有血，生殖道分泌物拭子等，用于检测时应取血样本。对于早期妊娠病人若有HCMV感染应再检测，或其它妊娠物，对病人认真及进跟踪检查，综合判断并采取相应的医疗措施。
PCR应用于优生优育有很大的优越性，使这一技术的推广应用刚刚起步，应注意操作的准确性，尽量避免误诊。对感染性疾病首先应取孕妇血样检测，有可疑时或血中检出病原体核酸时应尽早作羊水等妊娠物检查。不管是否怀疑胎儿有严重遗传病倾和中或有感染引起的畸形风险，对胎儿的去留应尊重胎儿父母亲的意见。
实时荧光定量pcr仪部分应用
实时荧光定量pcr仪新药开发研究，人用药物及其他药物
针对一些感染性疾病的药物，如各种病毒病、细菌病等，在新药的开发过程中，快速了解药物对疾病进程的影响可以为新药开发节约大量的人力、时间和资金，与以前所用的Elisa等方法相比，技术可以快速、准确、定量、灵敏地测定血液或组织中病原体的含量，因此有利用分析药物的作用效果，为比较不同的配方的疗效、用药量、用药时间等等提供快速、定量的评价。
此方法除了用于人用药物以外，还可以用于畜用药物，甚至其他经济动物及植物的药物研究等，因此其在药物研究方面的应用范围是很广的。
实时荧光定量pcr仪超早期感染用药物及疗法的研究与开发
方法测定是血液中病毒核酸的含量，因此不必等到病人体内产生抗体，同时，由于其灵敏度与Elisa相比，在病毒感染的早期，即血液中病毒含量很低时就可以测定。因此就出现了一个新的领域，即在病毒或细菌含量很低时如何用药，用什么药以及用药量等进行研究，为将疾病消灭在超早期作出贡献。
实时荧光定量pcr仪药物疗效研究，人用药物及其他药物
对于一些已经上市的新药或是应用了很长时间的老药，其用药的效果以及用药量及用药时间都可以进行进一步的研究，为更加合理化的应用这些药物为人类造福进行进一步的研究。以前所用的方法由于不能准确定量，灵敏度也不够，因此有很多需要研究的内容没有完成。这一方面需要研究内容很多，意义也很大。
实时荧光定量pcr仪新的愈后指标的研究
对于感染性疾病，在药物作用至一定程度后，就认为可以停药了，但是应该在什么停药，现在大都没有一个明确的指标，现在所用的指标由于受到检测方法的灵敏度及准确性限制，这一指标未必合理，因此有必要对治愈的指标以及指标与复发率以及疾病转化为其他疾病之间的关系等进行进一步的研究，从而为药物或疗法彻底治愈疾病打下坚实的理论基础。
实时荧光定量pcr仪新诊断及检验试剂的开发
现有的很多诊断及检验方法都不能同时满足快速、灵敏、定量的要求如现有培养法、等等，而方法以则可以做到这一点，从而可为临床疾病、、粮油检验、食品检验、血液检验等等开发新的试剂，从而提高检验的灵敏度、速度及准确性等；这类试剂的种类是非常多的，所开发的试剂的社会效益及经济效益都是很巨大的。
实时荧光定量pcr仪血液检验漏检率
由于方法比Elisa灵敏很多，因此，血站或血液研究所一般用来研究Elisa方法的漏检率，即分析Elisa方法测定为阴性的血样，再用实时荧光定量PCR方法来复检。复检时，一般24个Elisa阴性的血样混合成一个样本进行检测。上海用此方法在用于血液制品的血液中发现一例HIV，后经测定供血者，证实病人的确是HIV。正在测定北京中5万份Elisa阴性血样的漏检率。由于不同地区所用的Elisa试剂、方法、批号等都不相同，因此不同地区都有必要进行这一工作。
由于方法的快速、灵敏、定量的特点，其在研究及开发方面的应用是不胜枚举的，如研究个人与药物疗效之间的关系等；研究人员也可以根据自己研究项目开发其新的用途。
企业信用信息