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为什么葡萄球菌不能在麦康凯培养基中生长
为什么葡萄球菌不能在麦康凯培养基中生长
09-10-14 &匿名提问 发布
1.{转载}粪大肠菌群标准检验方法及注解 GB
化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌群及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法粪大肠菌群 UDC 668：576 .85.07(GB)Standard methods of microbiological examination for cosmetics Fecal coliforms粪大肠菌群细菌来源于人和温血动物的粪便。检出粪大肠菌群表明该化妆品已被粪便污染，有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。1 方法提要根据粪大肠菌群所具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌在44℃培养24～48h能发酵乳糖产酸并产气，能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解色氨酸产生靛基质。2 培养基和试剂2.1 乳糖胆盐培养基成分： 蛋白胨              20g猪胆盐                      5g乳糖                        5g0.4％溴甲酚紫水溶液     2.5ml蒸馏水                  1000ml制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH到7.4，加入指示剂，混匀，分装试管(每支试管中加一个小例管)。115℃(10 1b)20min灭菌。2.2 双倍浓度乳糖胆盐培养基按上述乳糖胆盐培养基成分，蒸馏水量不变，其他成分量加倍。2.3 伊红美蓝(EMB)琼脂成分：蛋白胨             10g乳糖                      10g磷酸氢二钾                 2g琼脂                      20g2％伊红水溶液           20ml0.5％美蓝水溶液         13ml蒸馏水                 1000ml制法：先将琼脂加到900ml蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾蛋白胨，混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000ml。校正pH值为7.2～7.4，分装于烧瓶内，121℃(15 1b)15min高压灭菌备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂。冷至60℃左右以无菌手续加入灭菌的伊红美蓝溶液，摇匀。倾注平皿备用。2.4 蛋白胨水(作靛基质试验用)成分：蛋白胨(或胰蛋白胨)       20g氯化钠                          5g蒸馏水                      1000ml制法：将上述成分加热熔化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，高压灭菌121℃(15 1b)15min。2.5 靛基质试剂柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml。试验方法：接种细菌于蛋白胨水中，于44℃培养24h。沿管壁加柯凡克试剂0.3～0.5ml，轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红色。注：蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。2.6 革兰氏染色法2.6.1 染液制备2.6.1.1 结晶紫染色液：结晶紫                 1g95％酒精             20ml1％草酸铵水溶液     80ml将结晶紫溶于洒精中，然后与草酸铵溶液混合。2.6.1.3 脱色液：95％乙醇。2.6.1.4 复染液：a. 沙黄复染液：沙黄                 0.25g95％酒精              10ml蒸馏水                90ml将沙黄溶解于酒精中，然后用蒸馏水稀释。b. 稀石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95％乙醇100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液10ml，加5％石碳酸水溶液90ml混合，即为石碳酸复红液。再取此液10ml加水90ml即为稀石碳酸复红液。2.6.2 染色法2.6.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。2.6.2.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。2.6.2.3 滴加95％酒精脱色，约30s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，脱色10s，水洗。2.6.2.4 滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。2.6.3 染色结果革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。注：如用1：10稀释石碳复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。3 仪器3.1 恒温水浴或隔水式恒温箱：44℃。3.2 温度计。3.3 显微镜。3.4 载玻片。3.5 接种环。3.6 电炉。3.7 锥形瓶。3.8 试管。3.9 小倒管。3.10 pH计或pH试纸。3.11 高压消毒锅。3.12 灭菌吸管。3.13 灭菌平皿。4 操作步骤4.1 取10ml 1：10稀释的样品，加到10ml双倍浓度的乳糖胆盐培养基中，置44℃培养箱中培养24～48h，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。4.2 如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置37℃培养18～24h。同时取该培养液1～2滴接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落。亦常为大肠菌群，均应注意挑选。4.3 挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。4.4 在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5ml，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。5 检验结果报告平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。附加说明：本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草。本标准主要起草人周淑玉。本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释注解：（1）用粪大肠菌群作为化妆品受粪便污染的指示菌是比较合适的。考虑到总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境（水与土壤）中亦经常存在。在粪大肠菌群这一组群细菌中大肠埃希氏菌（E.coli）数量最多，是较理想的指示菌，但欲正确鉴定此细菌，手续较繁复，因此在化妆品检验中采用粪大肠菌群作为指示菌。（2）本方法采用乳糖胆盐培养基，是具有选择性作用的培养基。其中胆盐具有抑制革兰氏阳性菌的作用。胆盐的品种来源及用量不同，其抑菌效果也不同。目前国内常见的胆盐有国产的生检7号和3号胆盐，进口的Difco和Oxoid,No.3胆盐，以及牛胆盐、羊胆盐、猪胆盐，免胆盐和家禽胆盐等。有时因某种胆盐不易购得，需用其他胆盐代替时，应重新测定抑菌的有效剂量，这些情况给使用者带来不便。经实验观察，猪、牛、羊三种胆盐对大肠菌群的检验效果无明显、差异，可互相替代；而其他胆盐的检验效果则不一致。不宜相互代替。在胆盐用量上，实验表明l％、0.5％和0.25％三个剂量间无何差异，所以本方法采用的胆盐剂量（0.5％）是适宜的，在称量时稍有误差，亦不致影响大肠菌群的检出。（3）乳糖发酵试验乳糖发酵试验使用乳糖胆盐发酵培养基，细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用，细菌产生的分解糖的酶随细菌种类不同而异，可以此鉴别细菌。大肠杆菌能分解乳糖而产生酸，使培养基的pH降低（指示剂变色）。这一现象可作为观察结果的指标。大肠杆菌细胞在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，可使甲酸分解成C02和H2，在培养基中产生大量气体而进入倒管中，以观察产气。在乳糖发酵试验中，经常可以看到在发酵倒管内有极微量的气泡，类似这样的情况能否算产气阴性？一般来说产气量与大肠菌群检出率呈正相关，但产气量小不一定大肠菌群都是阴性，因此应慎重处理。对这种产气量小或倒管内虽无气泡，糊液面及管壁可看到缓缓上浮的小气泡的情况时，均应作进一步观察与鉴别。（4）伊红美兰琼脂分离大肠菌群细菌大肠菌群细菌发酵乳糟产酸，使伊红与美兰结合成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有时还可产生金属光泽。不发酵乳糖的细菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）则为无色菌落。粪大肠菌群菌落在伊红美兰琼脂上呈黑紫色有光泽或无光泽的检出率最高；红色、粉红色菌落检出率较低。菌落形态的其他方面（如菌落大小、光滑与粗糙、边缘完整情况、隆起情况、湿润与干燥等）虽亦应注意，但不如色泽更为重要。影响粪大肠菌群检出率的因素很多。如化妆品种类，茵落色泽和形态，细菌种类等，如只挑一个菌落，由于机率问题，很难避免假阴性出现，尤其当菌落呈不典型时：因此挑选菌落一定要挑取典型菌落，如无典型菌落则应多挑几个，以免出现假阴性。表1 粪大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征培养基                                   菌落特征伊红美国微软公司兰培养基(EMB) 紫黑色、有金属光泽，紫黑色、不带或略带光泽，淡紫红色、中心紫黑色、黑红或深紫红色口红亚硫酸纳(远藤氏平板) 紫红色、有金属光泽，深红色、不带或略带金属光泽，淡红色、中心较深中国兰平板 深蓝色，浅蓝色、中心深蓝色麦康凯平板(Mac C) 桃红色，粉红色、中心桃红色中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所 信息室a href=&www.china2002/forum_view.asp?forum_id=37&view_id=5797& target=&_blank&www.china2002/forum_view.asp?forum_id=37&view_id=5797/a 金黄色葡萄球菌  绿脓杆菌a href=&www.china2002/forum_view.asp?forum_id=37&view_id=5796& target=&_blank&www.china2002/forum_view.asp?forum_id=37&view_id=5796/a
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牛胆盐，牛胆盐批发，牛胆盐生产商"用于抑制革兰氏阳性菌的生长
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牛胆盐& 产品编号：140612产品规格：1.5g产品用途：效价测定&培养基的类型 根据原料来源不同，可将培养基分为合成培养基、半合成培养基与天然培养基。合成培养基：由化学成分已知的有机物和无机物配制而成。成分精确，重复性强。但营养局限，微生物生长缓慢。适用于菌种分离、选育、遗传分析及生物测定等。如培养放线菌的高氏培养基、培养霉菌的察氏培养基以及各种化能自养菌培养基等。半合成培养基：由某些天然物质与少量已知成分的化学物质配制而成。营养全面，能有效地满足微生物对营养的需求。广泛应用于微生物的培养。如培养细菌用的牛肉膏蛋白胨培养基，培养霉菌的土豆葡萄糖培养基，工业生产中常用的玉米粉等天然物质加无机盐配制的各种发酵培养基等。天然培养基：由化学成分不清楚或不衡定的天然有机物配制而成。成分复杂，但营养丰富全面。常用于实验研究和生产。如麦芽汁培养基、玉米粉培养基，以及生产中使用的麸皮、锯末等。根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、固体培养基和半固体培养基。液体培养基：用各种营养成分加水配成，或用天然物质的浸汁（麦芽汁、豆芽汁等）制成。组分均一，适宜各类微生物的营养生长。广泛应用于实验研究及大规模工业生产中，有利于广泛获得大量菌体或代谢产物。固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂，或用麸皮等固体原料配制。常用的凝固剂是琼脂（又称琼胶、洋菜），由石花菜等海藻中提取加工制成。市售琼脂为条状、片状或粉末状，主要成分为多聚半乳糖的硫酸酯，绝大多数微生物不能将其分解，在培养基中仅起支撑作用。其熔点约98℃，凝固点42℃，1.5～2％的水溶液在一般培养温度下呈凝胶状态。琼脂固体培养基广泛应用于微生物的分离培养、菌种鉴定和保藏。半固体培养基：液体培养基中加入0.2～0.5％琼脂制成。用于观察细菌的运动、菌种鉴定及测定噬菌体的效价等。根据培养基的用途，可分为选择培养基、鉴别培养基、加富培养基、基本培养基等。选择培养基：根据某一类或某种微生物的特殊营养要求而设计的培养基，用于提高所需微生物的分离效率。如分离固氮微生物的无氮培养基、加入滤纸条或纤维素粉为碳源分离纤维分解菌的培养基。在培养基中加入某种化合物，可有效地分离出对这种化合物有抗性的微生物，例如在放线菌培养基中加入数滴10％的酚，可抑制细菌和霉菌的生长；加入一定量的青霉素、链霉素，可抑制细菌生长等。鉴别培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂，通过显色反应以鉴别不同的微生物。例如检查乳制品和饮用水中是否有肠道细菌污染所用的伊红-美蓝培养基。当大肠杆菌等肠道细菌生长时，发酵培养基中的乳糖，使加入的伊红-美蓝变色，在菌落上沉积为紫黑色，并呈现金属光泽。
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