色谱柱老化换装应注意什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2012-06-04 02:01 标签： 色谱柱老化
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资生堂色谱柱使用及维护
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色谱柱的再生,操作,注意事项
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液相色谱柱的使用注意事项及再生
1 、色谱柱的使用说明：& &
（ 1 ）、 色谱柱使用前注意事项：
色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用 10 ％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（ 2 ）、 流动相：
流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过 0.45μm 的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的 PH 值适用范围是 2.0-8.0 ， BDS C18 适合于碱性化合物， PH 值适用范围为 2.0-10.0 。当必须要在 PH 值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（ 3 ）、 样品：
样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（ SPE ）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2 、色谱柱的保存
（ 1 ）、 反相色谱柱每天实验后的保养：
使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用 10% 的甲醇 / 水冲洗 30 分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗 30 分钟。 注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入 10% 的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（ 2 ）、 长期保存色谱柱：
如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。
3 、色谱柱的再生
因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（ 1 ）、 反相柱的再生 ： 依次采用 20-30 倍的色谱柱体积的甲醇：水 =10 ： 90 （ V/V ），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（ 2 ）、 正相柱的再生 ： 依次以 20-30 倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。
4 、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：
（ 1 ）、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
（ 2 ）、色谱柱头的填料被样品污染；
（ 3 ）、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；
（ 4 ）、流动相 PH 值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：
（ 1 ）、如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在 10 ％的稀硝酸内超声清洗 10 分钟，后再用纯水超声 10 分钟，重新装入色谱柱。
（ 2 ）、如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（ 3 ）、如确定定是盐结晶，用 10% 的甲醇 / 水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（ 4 ）、如果因 PH 值使用不当，很难恢复。
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色谱柱操作注意事项
【】【】【引用网址】http://www.chemalink.net/books/C/947/0.html
&&& 色谱柱操作包括安装、维护和修理等内容，下面就毛细管柱的问题分别简述之。更深入的内容请参看《色谱仪器维护与故障排除》分册。1.色谱柱安装&&& 当把毛细管柱安装在色谱仪上时，需要将其两端分别与进样口和检测器相连接。不同厂家的仪器所用的接头有两种，一是内螺纹接头，二是外螺纹接头（如图5-2-8所示）。原理都是用一个石墨密封垫。通过接头压紧而达到固定和密封的目的。安装毛细管柱时应注意三个问题：
&&& 第一，先将密封垫套在柱头，此时应将柱头朝下，避免密封垫碎屑进入柱管而造成堵塞。将石墨垫套在柱头后，应将柱头截去1-2cm。可用专门的柱切割器，也可用一个开安倍瓶的磁片，在柱管上轻轻划一下，然后用手别断。这样做可以保证柱端是整洁的，又避免了柱头污染物对分析的干扰，因为截去了穿过密封垫时可能进入柱头的污染物，或者运输过程中可能损坏的柱端。&&& 第二，柱端伸出密封垫的长度不同仪器有不同的规定，应严格按仪器说明书确定。比如，Hp仪器要求进样口一端伸出5mm左右，检测器一端则依据检测器不同而不同。总的原则是进样口一端安装好后，柱端应处于分流点以上，并位于衬管中央。检测器一端则是柱出口尽量接近检测点（如FID的火焰），以避免死体积造成的柱外效应。为保证柱端伸出的长度准确，可在截去柱端后，先量好柱头伸出长度，然后用记号笔或改字液在接头下方的色谱柱上做一记号，拧紧接头后保证该记号正好位于接头端面。这样就避免了拧紧过程中因柱管移动可能造成的伸出长度不准确。&&& 第三，接头不要拧得太紧，以免将色谱柱压裂或压碎。一般新的石墨垫用手拧紧后再用扳手拧1/4圈即可。如果是重复使用的石墨垫，则要多拧紧点，直到用手轻轻拉柱管拉不动为止。原则上每次安装色谱柱都要用新的石墨垫，不过同一色谱柱拆下再安装时，可重复使用石墨垫，但重复使用的次数不要超过( 次，否则会失去密封性。2.色谱柱的维护&&& 每次新安装了色谱柱后，都要在进样前进行老化。具体办法是，先接通载气，然后将柱温从℃左右以5-10℃、min的速率程序升温到色谱柱的最高使用温度以下30℃（如HP-5柱可到280℃）或者实际分析操作温度以上30℃（如分析时用240℃，老化温度应为270℃），并在高温时恒温30到120min，直到所记录的基线稳定为止。如果基线难以稳定，可重复进行几次程序升温老化，也可在高温下恒定更长的时间。注意，一定要等到基线稳定后，才可做空白运行或进样分析。色谱柱使用一段时间后，柱内会滞留一些高沸点组分，这时基线可能出现波动或出现鬼峰。解决此问题的办法也是老化。&&& 新购买的色谱柱一定要在分析样品前先测试柱性能是否合格。具体办法是按照出厂时的测试条件进行验收，如不合格，可以退货或更换新色谱柱。这样做可以避免不必要的经济损失。&&& 暂时不用的色谱柱从仪器上卸下后，柱两端应当用一块硅橡胶（可利用废进样隔垫）堵上，并放在相应的柱包装盒中，以免柱头被污染。&&& 每次关机前都应将柱箱温度降到50℃以下，然后再关电源和载气。温度高时切断载气，可能会因空气（氧气）扩散进入柱管而造成固定液的氧化降解。&&& 仪器有过温保护功能时，每次新安装了色谱柱都要重新设定保护温度（超过此温度值时，仪器会自动停止加热），以确保柱箱温度不超过色谱柱的最高使用温度。3.色谱柱的修理&&& 色谱柱都有一定的寿命，它与所分析的样品状况和维护情况有直接关系。柱寿命完结的主要标志是固定液流失太多而失去了分离能力，柱管堵塞或断裂也是导致柱失效的原因。有时只是因为一些高沸点的极性化合物的吸附而使色谱柱丧失分离能力，这时可对其进行清洗和修理。具体办法是先在高温下老化柱子，用载气将污染物冲洗出来；若柱性能仍不能恢复，就从仪器上卸下柱子，将柱头截去10cm或更长（柱头是最容易被污染的），再安装上测试。这是常用的柱性能恢复措施。如果还不起作用，可再反复注射溶剂进行清洗，常用的溶剂依次为丙酮、甲苯、乙醇、氯仿和二氯甲烷。每次可进样5-10μl，这一办法常常能奏效。如果色谱柱性能还不好，就只有卸下柱子，用二氯甲烷或氯仿冲洗。可用抽真空的办法将溶剂从另一端吸入，也可用对溶剂瓶加压的方法将溶剂压入。溶剂用量依柱子的污染程度而定，一般20ml 左右。如果这一方法仍不起作用，说明色谱柱应该报废了。需要说明，只有固定液交联的色谱柱才可用此法清洗，否则会将固定液全部洗掉。&&& 我们最不愿意看到的事故是由意外原因将性能很好的色谱柱折断了。这时断裂的柱子固然可以作为短色谱柱使用，但若能“断指再植”不就可以减少损失吗？市场上有商品柱连接器出售，但价格稍高。其实我们也可以用一截玻璃管连接断柱。具体方法如图5-2-9所示。即用干净的玻璃管在煤气灯上拉出一段细管子，管子中间的内径接近于柱外径，管子两端内径大于柱外径。这样将折断的柱子从玻璃管两端插入，直到两端对接，再在玻璃管与色谱柱的空隙中填充上聚酰亚胺黏合剂，固化后柱子就连接好了。这样连接后柱性能会有一定的下降，但仍能使用。连接好坏的关键是玻璃管中间一段的内径要接近或等于色谱柱的外径，还有断柱的端面要切割整齐，尽可能使两个断面对接在一起。

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