临床上用煮沸、高压蒸汽、紫外线等灭菌的原理是什么（生物学）_百度知道
临床上用煮沸、高压蒸汽、紫外线等灭菌的原理是什么（生物学）
由于紫外线是以直线传播。用于紫外线灭菌的波长一般为200~300nm。是指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法。应该是通过高温进行的物理灭菌，紫外线不仅能使核酸蛋白变性，可被不同的表面反射或吸收。也是物理灭菌法的一种，灭菌里最强的为254nm。临床上大多无菌物品都是这么出来的。煮沸是指将待灭菌物置于沸水中灭菌的方法，常用于注射器。煮沸时间通常为30-60分钟，从而达到共同杀菌作用；不适用于药液的灭菌及固体物料的深部灭菌、应用最广的灭菌方法、注射针等器皿的消毒、无菌室空气及蒸馏水的灭菌，是灭菌效果最好。该方法属于表面灭菌。该法适于照射物体表面灭菌，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，普通玻璃可吸收紫外线。该法灭菌效果较差。一般用于实验室照射等高压蒸汽灭菌法（autoclaving） 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，穿透力微弱，因此装于容器中的药物不能用紫外线来灭菌
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细菌会产生抗逆的芽孢，但也不是绝对无菌的，生物也就死亡了在极端环境下生物体内的蛋白质会变性
应该是破坏蛋白质的结构
紫外线的相关知识
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出门在外也不愁煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中，&DNA&分子的切割是由限制性内切酶来完成的。
试验原理：
煮沸法是根据Holmex和Quigley(1985)的方法改进而成的。在基因工程中， DNA 分子的切割是由来完成的。能识别特定的 DNA 序列，在一定的条件下切断双链 DNA 。限制性内切酶的作用效率是受多方面因素影响的，如反应温度，缓冲体系，离子种类与浓度， DNA 的纯度和甲基化程度等。对 DNA 进行酶切时，首先要选择适合的缓冲液。对于单酶切，应选用该酶的最适缓冲液；对于双酶切或三酶切，应选用一种能使所有酶都充分作用的缓冲液。 DNA 的纯度对于酶切的效果的影响也很大，因为蛋白质、酚、氯仿、
等杂质都会抑制限制性内切酶的活性。
糖凝胶电泳是分离，鉴定和纯化 DNA 的常规方法。利用低浓度的荧光嵌入染料 - 溴化乙锭进行染色，可确定 DNA 在凝胶中的位置。如有必要，还可以从凝胶中 回收 DNA 条带，用于各种克隆操作。糖凝胶的分辨能力要比聚丙烯酰胺凝胶低，但其分离范围较广。用各种浓度的琼脂糖凝胶可以分离长度为 200bp 至近 50kbp 的 DNA 。长度 100kb 或更大的 DNA ，可以通过电场方向呈周期性变化的脉冲电场凝胶电泳进行分离。
在基因工程的常规操作中，琼脂糖凝胶电泳应用最为广泛。它通常采用水平电泳装置，在强度和方向恒定的电场下进行电泳。 DNA 分子在凝胶缓冲液（一般为碱性）中带负电荷，在电场中由负极向正极迁移。 DNA 分子迁移的速率受分子大小，构象。电场强度和方向，碱基组成，温度和嵌入染料等因素的影响。
实验准备：
1、70% 乙醇（ -20 ℃）及无水乙醇（ -20 ℃）
2、STET 缓冲液（pH8.0 ）（ 8% 蔗糖， 0.5%Triton， 50mmol/L ，，10mmol/L
3、1.2M 氯化钠
4、TE 缓冲液（10mmol/L -HCl， 1mmol/L
5、STET:0.1mol/L NaCl，10mmol/L TrisCl（pH8.0），1mmol/L EDTA（pH8.0），5％Triton X－10（其他同碱裂解法）
试验步骤：
1、无菌操作台上取1.5ml培养菌体置于（Eppendorf管）中，微量上10000rpm离心1min，或者以4000rpm离心5－10min，弃上清液，倒扣于干净的吸水纸上吸干。
2、将菌体沉淀悬浮于350&l STET缓冲溶液中， 涡旋使其混匀。
3、加入25&l新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml，用10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)配制)， 涡旋振荡大概3秒钟。
4、将eppendorf管放入沸中，40秒后立即取出。
5、微量上以4℃，12000rmp离心10min。
6、用无菌牙签从eppendorf管中挑去细菌碎片。
7、在上清中加入40&l 5mol/L乙酸钠（pH5.2）和420&l异丙醇，振荡混匀，于室温放置５min。
8、微量离心机上以4℃，12 000rmp离心５min，回收核酸沉淀。小心吸去上清液，将倒置于一张纸巾上，以使所有液体流出。再将附于管壁的液滴除尽。（可参考裂解法中的做法）。
9、加入1ml７０％乙醇，以4℃，12 000rmp离心２min。轻轻地吸去上清，这一步操作要格外小心，有时沉淀块贴壁不紧，去除管壁上形成的所有乙醇液滴，室温下放置，直至乙醇挥发完全，管内无可见的液体为止（大概需要２－５min）。
10、用50&l无DNA酶的胰RNA酶（20&g/ml）的TE(pH8.0)溶解核酸，稍加振荡即可，贮存于-20℃。
注意事项：
1、大肠杆菌可从固体培养基上挑取单个菌落直接进行煮沸法提取质粒DNA。
2、添加溶菌酶一定要有限度，浓度过高细菌裂解效果反而不好，有时不同溶菌酶也能溶菌。
3、提取的质粒DNA中会含有RNA，但RNA并不干扰进一步实验，如限制性内切酶消化，亚克隆及连接反应等。
4、试验步骤中的细菌沉淀和核酸沉淀中去除上清液时，一定要除尽。
5、用 70% 的乙醇溶液洗涤核酸沉淀时一定要十分谨慎，防止将核酸同洗液一起倒掉。
6、实验过程中所用的器皿和都要进行高压灭菌。
7、当从表达内切A的大肠杆菌株（endA+株，如HB101 ）中小量制粒DNA时，建议不用煮沸法。因为煮沸步骤不能完全灭活内切Ａ，在Mg2+存在下温育（V中用限制酶时）质粒DNA可被降解。若要避免这一问题可以在用70％乙醇洗涤一步前增加一步用酚/氯仿进行抽提。
8、如果要通过限酶切割反应来分析DNA，可取１&lDNA溶液加到另一个含８&l水的微量离心管内，加１&l 10x限制酶缓冲液和１单位所需限制酶，在适宜温度温育１－２h。将剩余的DNA贮存于－20℃。通过凝胶电泳分析经限制酸消化的DNA段。如果小量制备的DNA不被限制酶切开，很有可能在收获细菌的步骤中未能很好地去除所有上清液体。这种情况下，可用酚：氯仿抽提DNA终产物，然后用乙醇重新沉淀 DNA，通常，用5－10倍过量的酶（特别是并不昂贵的酶）在100-200&l 体积中进行消化，可以克服限制酶切割反应遇到切割反应遇到的困难。消化后， 加0. 1 体积3mol/L乙酸钠（pH5.2)和２倍体积乙醇沉淀DNA。
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易生物VIP企业推荐本题考查的是食品保鲜的方法,可以从食品腐败的原因和防腐的原理方面来切入.
解:防止食品腐败的原理都是杀死或抑制细菌,真菌的生长和繁殖.,由图保存方法先对食物加热杀死食物中的微生物后阻止空气及空气中微生物的进入来进行防腐;而冰箱贮存食物是利用低温来抑制微生物的生长和大量繁殖的方法防腐.此说法正确.,由图我们可以看出清水将盆内进行了封闭,阻止空气及空气中微生物的进入,有利防腐.故不符合题意;,由图保存方法先对食物加热杀死食物中的微生物后阻止空气及空气中微生物的进入来进行防腐;而冰箱贮存食物是利用低温来抑制微生物的生长和大量繁殖的方法防腐,两者原理不同,因此此说法错误,故该项符合题意;,我们知道由各种细菌,真菌等微生物,接触到食物,并在依附其上利用食物的养分,生长与大量繁殖.期间会产生很多的生长代谢产物,产生各种各样酸,臭等味.因此食物腐败变质是由于微生物的生长和大量繁殖而引起的.故不符合题意;故选:.
掌握食品防腐的原理,了解冰箱中保存食品的原理是低温抑制微生物的生长和繁殖.本知识可结合生活实际与食品的保存方法进行记忆.
3530@@3@@@@食品的腐败原因@@@@@@229@@Biology@@Junior@@$229@@2@@@@日常生活中的生物技术@@@@@@46@@Biology@@Junior@@$46@@1@@@@生物技术@@@@@@6@@Biology@@Junior@@$6@@0@@@@初中生物@@@@@@-1@@Biology@@Junior@@
第一大题，第6小题
求解答 学习搜索引擎 | 某同学为探究食品保存方法,将煮沸冷却后的鲜肉汤盛入玻璃杯中,用一个小盆倒扣上,再向大盆内加入适量的清水,肉汤可保存2∽3天.下列叙述不合理的是(
)A、对鲜肉汤煮沸的目的是杀死其中的微生物B、加清水主要是为了阻止空气中微生物的进入C、该保存方法和冰箱贮存食物的原理相同D、肉汤腐败变质的原因是微生物的大量繁殖煮沸法提取细菌DNA模板(模板,细菌,条带,冰浴) - PCR实验 - 生物秀
标题: 煮沸法提取细菌DNA模板(模板,细菌,条带,冰浴)
摘要: [煮沸法提取细菌DNA模板(模板,细菌,条带,冰浴)] 我现在用煮沸法提取细菌DNA模板，方法是离心过夜培养菌液，沉淀用150ulTE缓冲液混均后，沸水中煮沸10min，冰浴后离心取上清夜做PCR反应的模板。扩增不出来条带，我用的引物和条件都和师兄的一样，为什么他能扩出很弱的条带，而我却不能呢？还有一个问题是煮沸法DNA，提出的是不是基因组，上清夜直接电溶会是什么样的条带？谢谢大家的帮助！很急 ，盼！ 关键词:[模板 细菌 条带 冰浴 基因组 引物 缓冲液]……
我现在用煮沸法提取细菌DNA模板，方法是离心过夜培养菌液，沉淀用150ulTE混均后，沸水中煮沸10min，冰浴后离心取上清夜做PCR反应的模板。扩增不出来条带，我用的引物和条件都和师兄的一样，为什么他能扩出很弱的条带，而我却不能呢？还有一个问题是煮沸法，提出的是不是基因组，上清夜直接电溶会是什么样的条带？谢谢大家的帮助！很急 ，盼！
回复:上清液直接电泳这种简单活儿还是楼主自己动手求解吧！其实提了就要做一个DNA的电泳，看究竟提到需要的DNA没有这是一个习惯！这步省掉很不好的，不利于查找问题！PCR还是很费钱的，多做一步DNA的电泳，如果这步就有问题，可以省下很多PCR的钱的！回复:谢谢！这个我做过了，上清液直接电泳发现条带跑的很快，位置在100-400个之间都有，而且亮度很亮。是不是说基因组很多已经降解了，是不是因为这个P不出目的条带，可别人都是这么做的，有谁知道煮沸法提取细菌DNA模板的原理，请赐教！谢谢！回复:煮沸方法得到的基因组不可能所有的都完整,我们在操作的过程中机械剪切是避免不了的 ,所以你电泳后跑出来小的条带是很正常的.能用煮沸法来提模板的估计是革兰氏阴性菌吧,如果你实在不放心用菌液(取2微升)直接做PCR试试看.煮沸法的原理就是用热裂解法把细菌细胞裂解,让基因组释放出来,冰浴后通过离心把细胞壁(cell wall)和一些蛋白离到管底,基因组会悬浮在上清中.但这种方法提取,上清中还是存在一些蛋白的,在某些时候是会影响到PCR结果的.还有你师兄扩增的条带为什么是那么暗呢,是不是体系或程序不够完善呢?回复:问各位师兄师姐一个弱弱的问题：冰浴后离心，转速大概在多少正好沉淀蛋白而又不影响DNA呢？回复:我做过许多水煮法提取细菌DNA然后用于PCR扩增的实验，效果很好，但我的扩增片断大小是100多bp.水煮的DNA并不完整，电泳大小在100－750bp不等，对于短片断扩增不会影响。不知wanghuijing1 扩增的片断大小多大？你师兄扩出很弱的条带说明PCR条件本身不理想，本身存在些问题。你可以通过细菌基因组DNA提取的方法(如传统的提取方法)提取完整的基因组DNA，电泳验证，确定DNA质量较好后做PCR，若PCR效果不好，就优化之。等确定PCR条件没有问题，可以再试试水煮法。（因为你PCR失败，不知道是PCR体系本身的问题，还是模板的问题）还有你菌液沉淀后最好用无菌水洗涤去除培养液中可能存在的PCR抑止剂，另外水煮后的DNA未必需要冰浴，一般放置室温，高速离心（13000rpm 8min）取上清就可以，不过小心取到底部的沉淀回复:革兰阳性的细菌也能用煮沸法提取dna吗？回复:我用水煮法提取细菌DNA后，跑电泳后看不到条带，只看到一些亮点。不知道是什么原因。请高手指教！回复:你的DNA片段是多少BP的？如果片段在1KB以上的，煮费时间不要超过8分钟。离心的话我是12000RPM离心3分钟，然后取上清。
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电话：021-煮沸法的原理_百度知道
煮沸法的原理
煮沸饮水时除了很可靠的得到温度之外，煮沸20分钟所产生的燃料浪费及时间成本，应该是自古以来所惯行的作法，必须将水连续煮沸20分钟，教导民众将自来水在沸腾之後，於是三卤甲烷随著温度上升而增加。不仅如此，俾让自来水中的馀氯挥发殆尽，酿成火灾，人们使用几千年来行之如仪的煮沸法，已经不再是个安全的法子了，更进一步的把这些白色块状垢想像成「结石的化身」：鉴於专家学者一再警告「氯」的问题，成群结党的集合成白色的「水垢」。更何况。注！重要的是，却没警觉到煮沸法在地球被人类糟遢蹂躏的今天，不出二天，但若打开锅盖继续加热3-5分钟，锅子里还剩多少水可用呢，也把水里头人体所需要的钙、镁等矿物质变成人体无法应用的碳酸钙和氧化镁。虽然目前人们依然使用煮沸的方式，也有很多人以为只要经过煮沸、消毒的「氯」，最近的自来水公司说帖当中增加了一些台词，煮沸的过程也同时将水里面的含氧量完全耗尽，就可以解决所有的饮水问题，而自来水公司也强调我们的自来水只要经过煮沸就可以安心饮用了、病毒及将三卤甲烷挥发到完全没有，但仔细想想，由於水中不可避免的会存在一些有机质。虽然说，这二者的条件已经俱足，甚至反而把原本水里的溶氧排的乾乾净净，怎知自来水在加热过程。（注），一锅子水连续沸腾20分钟之後，对只是想喝个安全的水的人们言之，相信吗，让它持续沸腾个3-5分钟？煮沸过的水用来养金鱼。这似乎提供了一个可行的办法。事实上，无论如何，如果想完完全全的杀死2公升饮水中的细菌，说真的，而产生具致癌性的三卤甲烷，也就只能把水里面有害的细菌及病毒杀死而已，可以把三卤甲烷的含量大幅降低（但非完全去除），其他的杂质及有机污染物仍留在开水中，又提供了一个更好的催化条件。再者，自来水在净水场加进去用来杀菌，水里面的重金属，金鱼就会和你说再见了，当自来水加热到100℃时三卤甲烷的量会达到最高点，似乎并不划算？如果万一沸腾冒出来的水把瓦斯给浇熄了，加热煮沸的方法，才真的是可怖呢，它们是永远去不掉的一、煮沸法
藉由柴火的温度将水煮沸饮用
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