食品中甲醛的测定滴定法为什么不能测定多种氨基酸的氨基氮

氨基酸等电点_百度百科
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在某一PH的溶液中氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等成为兼性离子呈电中性此时的溶液ph称该氨基酸的等电点
isoeletric point pI
2氨基酸静电荷为零时的pH值
3是在碱性溶液中表现出带在酸性溶液中表现出带在某一定pH溶液中所带的和相等时的pH,称为该的1对于侧链R基不解离得中性氨基酸来说pI=1/2pKa1+PKa2
2对于有多个解离基团的氨基酸来说只要写出它的解离公式然后取等电兼性离子两边的pKa的平均值则得出其pI值pI=1/2pKa左+PKa右
注pI值与该离子浓度基本无关只取决于等电中性离子A0两侧的pK值1氨基酸的甲醛滴定formal titration氨基酸虽然是一种两性电解质即是酸性又是碱性但它却不能直接用酸碱滴定来进行测量这是因为氨基酸的酸碱滴定的等电点pH过高12-13或是过低1-2没有适合的指示剂可备选用而向氨基酸中加入过量的甲醛用氢氧化钠滴定时由于甲醛可与氨基酸上的N+H3结合形成NHCH2OHN(CH2OH)2等羟甲基衍生物而降低了氨基酸的碱性相对增强了N+H3的解离使滴定终点移到了pH9附近在酚酞指示剂的变色区域内能够用酚酞作为指示剂进行滴定
以上出自生物化学 2006.5王镜岩等主编甲醛滴定法测定氨基酸含量
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
水溶液中的氨基酸为兼性离子因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基甲醛可与氨基酸上的N+H3结合形成NHCH2OHN(CH2OH)2 等羟甲基衍生物使N+H3上的H+游离出来这样就可以用碱滴定N+H3放出H+测出氨基氮从而计算氨基酸的含量
若样品中只含有单一的已知氨基酸则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量若样品中含有多种氨基酸如蛋白质水解液测不能由此法算出氨基酸的含量
脯氨酸与甲醛作用后生成的化合物不稳定导致滴定后结果偏低酪氨酸含酚基结构导致滴定结果偏高
材料试剂与器具
10.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中
20.05%溴麝香草酚蓝溶液
取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中
31%甘氨酸溶液
取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水
4标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液
5中性甲本醛溶液
取甲醛溶液50ml加0.5%酚酞指示剂约3ml滴加0.1mol/LnaOH溶液使溶液呈微粉红色临用前中和
二实验器具
2碱式滴定管
移液管洗耳球
8玻棒与烧杯1取3只100ml锥形瓶按下表加入试剂
锥形瓶编号
1%甘氨酸溶液或样品ml
中性甲醛溶液ml
0.05%溴麝香草酚蓝溶液滴
0.5%酚酞乙醇溶液滴
2混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色pH8.7~9.0
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积ml
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积ml
1.4008 为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量mg利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度随着蛋白质水解度的增加滴定值也增加当蛋白质水解完成后滴定值不再增加甘氨酸5.97
丙氨酸6.00
缬氨酸5.96
亮氨酸5.98
异亮氨酸6.02
苯丙氨酸5.48
丝氨酸5.68
苏氨酸6.16
酪氨酸5.68
半胱氨酸5.05
蛋氨酸5.74
脯氨酸6.30
色氨酸5.89
赖氨酸9.74
精氨酸10.76
组氨酸7.59
门冬氨酸2.77
谷氨酸3.22
门冬酰胺5.41
谷氨酰胺5.65
出自有机化学 2004.11主编
新手上路我有疑问投诉建议参考资料 查看食用米醋中总酸量和氨基酸氮含量的测定
食用米醋中总酸量和氨基酸氮含量的测定
邓小雪 化学与环境学院化学02班
一、目前有关该元素常量测定方法的概述:
米醋的主要成分为醋酸,此外还有少量的其他弱酸。要测定其总酸度,我们可以用NaOH标准溶液滴定,用酚酞作指示剂,从而测得其总酸度。
对于氨基酸氮含量的测定,主要有4种方法:
(1)我们先是使-NH2与甲醛结合,其碱性消失,破坏内盐的存在,就可以用碱来滴定-COOH基,以间接方法测定氨基酸的量。由于米醋中氨基酸的含量比较少,所以测出的结果准确度较低,选择性较差,滴定终点不易掌握,结果不够理想,而且甲醛会对环境造成污染。
(2)把氨基酸中的-NH2转化成NH4+,因NH4+的酸性太弱,不能用NaOH标准溶液直接测定,所以用甲醛法进行测定NH4+。甲醛与NH作用生成质子化(CH2)6
N4H+和H+反应式为:
&&&&&&&&&&&&&&
&⑶氨基酸氮的测定还可以利用Hantzsh反应原理,用乙酰丙酮—甲醛混合溶液作为氨基酸的衍生物,采用吸光度法测定食醋中氨基酸态氮的含量。
⑷电位滴定法根据氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,将酸度计的玻璃电极及甘汞电极(或复合电极)插入被测液中构成电池,用碱液滴定,根据酸度计指示的pH值判断和控制滴定终点。
二、实验原理:
1、关于总酸量的测定
醋酸为有机弱酸(Ka=1.8&10-5), 与NaOH反应式如下:
HAc + NaOH = NaAc + H2O
反应产物为强碱弱酸盐,滴定突跃在碱性范围内,可选用酚酞等碱性范围变化的指示剂。食用米醋中的主要成分是醋酸,其总酸度用HAc的含量来表示。
2、关于食醋中氨基酸含氮量的测定
用甲醛法测氨基酸含氮量
氨基酸具有酸、碱两重性质,因为氨基酸含有-COOH基显示酸性,又含有-NH2基显示碱性。由于这两个基的相互作用,使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时,-NH2与甲醛结合,其碱性消失,破坏内盐的存在,就可用碱来滴定-COOH基,以间接方法测定氨基酸的含氮量。用碱完全中和-COOH基时的PH值为8.4~9.2,可用酚酞作为指示剂,NaOH作为滴定剂。
氨基酸态氮含量=(N&V&0.014&100%)/W
(N:NaOH标准溶液当量浓渡;V:NaOH标准溶液消耗的总量(m1);W:样品溶液相当样品重量(克);0.014:氮的毫克当量。)
用吸光度法测氨基酸含氮量
β-二酮与甲醛的混合试剂与α-氨基酸具有非常灵敏的显色反应。根据Hantzsch反应原理,认为显色产物为3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶羰酸衍生物,反应式如下:
三、所需仪器、试剂的计划用量及配制方法
1.台秤 2.电子天平 3.锥形瓶& 4.铁架台&
5.移液管& 6.烧杯&
7.碱式滴定管&&
&8.容量瓶& 9.塑料试剂瓶&
10.称量瓶& 11.量筒&
12.酒精灯&& 13.721型光栅分光光度计
1、NaOH溶液& 0.1mol/L
用烧杯在粗天平上称取4g固体NaOH,加入新鲜的或煮沸的除去CO2的蒸馏水,溶解完全后,转入带橡皮的试剂瓶中,加水稀释至1L,充分摇匀。
2、酚酞指示剂& 2g/L乙醇溶液
3、邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)基准物质&
在100—125℃干燥1h后,置于干燥器中备用。
4、食用醋酸试样
5、中性甲醛溶液18%(1+1)
6、氨氮标准溶液:称量105℃干燥2h的分析纯硫酸铵0.0472克于100mL容量瓶中,混匀,用水稀释成1mg/L
7、显色剂:15mL37%甲醛和7.8 mL乙酰丙酮混合,加水至100 mL
8、缓冲溶液: pH=4.7的NaAc-HAc缓冲溶液,取NaAc83g溶于水加冰醋酸60mL稀释至1L。
9、百里酚蓝指示剂
四、实验步骤“
1、0.1 mol/LNaOH标准溶液浓度的标定
在称量瓶中以差减法称量KHP3份,每份0.4—0.5g,,分别倒入2—3滴酚酞指示剂,加入40—50mL蒸馏水,待试剂完全溶解后,加入2—3滴酚酞指示剂,用待标定的NaOH溶液滴定至微红色并保持半分钟即为终点,计算NaOH溶液的浓度和各次标定结果的相对偏差。
食用米醋中总酸量的测定
用移液管移取食醋试样20.00mL于100.0mL容量瓶中,用蒸馏水稀释、定容,摇匀。用移液管移取食醋稀释液20.00mL于250mL锥形瓶中,加入25mL蒸馏水,2滴酚酞指示剂,用NaOH标准溶液滴定至溶液由无色变为微红,30s不褪色即为终点,记录消耗NaOH的体积(平行做3次,相对平均偏差应小于0.2%)。根据NaOH标准溶液的浓度和滴定时消耗的体积(V),可计算出食醋中总酸量。
3、甲醛溶液的处理
甲醛中常含有微量酸,应事先中和。其方法如下:取原瓶装甲醛上层清液于烧杯中,加水稀释一倍,加入2~3滴酚酞指示剂,用标准NaOH溶液滴定甲醛溶液至呈现微红色。
4、食用米醋中氨基酸含氮量测定
用移液管取1.00ml上述实验中的 NaOH标准溶液于100ml的容量瓶中、定容、待用。
⑴用甲醛法测定
另取20ml的待测溶液,加入2滴酚酞指示剂,用 NaOH滴加到
刚好颜色变成粉红色30秒内颜色不变化,加入甲醛溶液10mL,再加入百里酚蓝指示剂10滴,用0.001mol/L的
NaOH滴定至蓝紫色,30s内不褪色为终点,记录加入甲醛后消耗NaOH标准溶液的毫升数。
⑵用吸光度法测定
①吸收曲线的制作和测量波长的选择
用吸量管吸取0.0mL和1.0mL氨氮标准溶液分别注入两个50mL容量瓶中,各加入20.0mL缓冲溶液,20.0mL显色剂,水稀释到刻度,混匀。于100℃水浴中加热15min,取出用冷水冷却到室温,移入1cm比色皿,以试剂空白为参比,在360—460nm之间,每隔5nm测一次吸光度,在坐标纸上,以波长λ为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制A与λ关系的吸收曲线,从吸收曲线上选择测定N的适宜波长,一般选用最大吸收波长。
②标准曲线的制作
& 在7个50mL的容量瓶中,用移液管分别加入0mL,0.2
mL,0.4 mL,0.6 mL,0.8 mL,1.0
mL1mg/L氨氮溶液,均加入20mL缓冲溶液,20mL显色剂,摇匀,再用水稀释到刻度,摇匀。于100℃水浴中加热15min,取出用冷水冷却到室温。用1cm比色皿,以试剂为参比溶液,在所选择的波长下,测量各溶液的吸光度。以含N量为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。
③食用米醋中氨基酸含氮量测定
用移液管准确吸取适量待测液10mL于50mL容量瓶(或比色皿)中,按标准曲线的制作步骤,加入各种试剂,测量吸光度。从标准曲线上查出和计算试液中铁的含量(单位为μg/mL)
五、数据记录和结果
1、邻苯二甲酸氢钾(KHP)的称重(每份约0.4~0.5g)
2、氢氧化钠溶液浓度的标定
计算公式:CNaOH=
mKHP/MKHP&VNaOH&10-3
3、食用米醋中总酸量的测定
试液体积数
VNaOH& 终读数
(mL)处读数
总酸量平均值
相对平均偏差
计算公式:
4、食用米醋中氨基酸氮含量的测定
用甲醛法测定:
计算公式:米醋氮含量=1/10&VNaOH&CNaOH*MN
用吸光度法测定:
1、吸收曲线的制作
2、标准曲线的制作及溶液含铁量的测定
氨氮标准溶液(1mg/mL)
比色测定的浓度(ug/mL)
吸取待测液体积(mL):&
10.00mL&&&&&&&&
定 &容 &体&
积(mL): &50mL
在曲线上查得米醋含量: 0.010
ug/mL&&&&&
计算原试液中氮的含量: 0.050 ug/mL
六、问题与讨论
1、为什么称取邻苯二甲酸氢钾基准物要在0.4-0.6g范围内?能否少于0.4g或多于0.6g?为什么?
因为一般分析天平的误差为±0.0002g,为了使测量的相对误差在0.1%以下,式样的质量就不可以太小,从相对误差的计算中就可以得到试样的质量必须在0.2g以上,所以称取得质量在0.4g以上可以保证用分析天平的误差在允许的范围之内,又因为在滴定分析中,滴定管读书常有±0.01的误差,在一次滴定中,需要读数两次,因此,可能造成±0.02的误差,所以,为了使测量时的相对误差小于0.1%,消耗滴定剂的用量必须在20.00ml以上,以减小相对误差,所以称取邻苯二甲酸氢钾基准物质的质量在0.4—0.6g以内,可以保证本次实验中滴定邻苯二甲酸氢钾所用的氢氧化钠标准溶液的体积即在20.00以上,又不至于太多,方便操作。
2、加入百里酚蓝指示剂的量可以随意定吗?如果不可以,多少才比较合适?
加入百里酚蓝指示剂的量不同,对滴定终点的观察是有影响的,在上述实验过程当中当滴入百里酚蓝的量为2-3滴的时候,滴定终点的颜色是粉红色的,而且不明显,随着滴数的增加,滴定终点的颜色逐渐明显,当加了12滴左右的时候,滴定终点变成蓝紫色,比较容易观察。
3、实验中测量出来的酸的量可否用ρHac(g.L-1)表示?
不可以,因为米醋中不仅含有醋酸,还存在其他的酸,因此测出来的酸包含有其他各种形式的酸,所以要用每升溶液中含有氢离子的量来表示。
4、酚酞指示剂由物色变成微红色时,溶液的pH为多少?变红的溶液在空气中放置会变成无色的原因是什么?
酚酞指示剂由物色变成微红色时,溶液的pH为8左右。变红的溶液在空气中放置会变成无色的原因是溶液也会吸收空气中的的二氧化碳等酸性气体,使溶液的PH下降到8以下,所以溶液又会变成无色。
5、 实验中的甲醛的用量是否可以随意加入?是否越多越好?
不是的,当加入的量太少时,-NH2无法充分反应,这时候测出来的值会偏小。而甲醛是致癌物质,无论是吸入蒸汽还是摄入液体都会引起中毒,对眼、皮肤和呼吸器官有强烈的刺激,所以不能用过多的甲醛。
6、参比溶液有什么作用?本实验中的用什么做参比?
用参比溶液来调节仪器的零点,可消除由于吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差,并消除干扰的影响,本实验用空白试剂,即0.0ml的氨氮溶液作为参比溶液。
7、 用吸光光度法测定的时候,温度是否对反应速度有影响?
有影响,本反应随着温度的升高,反应速度加快,当把溶液放在100℃的水浴中加热15min,即显色完全,吸光度达到最高恒定值,当我们把溶液放在室温下,要等一天才能显色完全,可见温度对显色是有影响的。
8、显色剂的量是否可以任意加入?
不是的,本实验显色剂加入过少,则显色不明显,但如果显色剂的量过多,又会使显色过深,试剂难以分辨。而且在本实验中,如果加入过多显色剂,待测液的颜色会比任何一瓶标准试剂都深。
9、用吸光光度法和甲醛法测出来的值为什么会有那么大差别?用吸光光度法有什么好处?
因为米醋中氮含量十分少,用甲醛法测定的时候由于用氢氧化钠标准溶液滴定邻苯二甲酸氢钾基准物质的时候有误差,而且滴定含氮量用的氢氧化钠浓度很低,滴定的过程中可能会与空气中的二氧化碳反应,又增大了误差,所以甲醛法的误差比较大,测得的值不太准确。相对来说,吸光光度法就有较高的准确度和精密度,而且本法的操作简便,快速,灵敏,选择性好,更适用于米醋中氨基酸氮含量的测定。
八、主要参考资料
1、武汉大学、中山大学、吉林大学,分析化学实验[第四版],高等教育出版社,2001
2、,有机分析,[北京],2004
[北京], 2003
8、北京大学化学系分析化学教研室,基础分析化学实验,北京大学出版社,1993
9、王建雅,分析专业实验,大连理工大学出版社,2005
实验心得体会
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以上网友发言只代表其个人观点,不代表新浪网的观点或立场。在食品中对氨基酸态氮的检验时用什么检验设备?
在食品中对氨基酸态氮的检验时用什么检验设备?
如题~~请高手指点!!!!
补充:需要的是设备!不是方法 谢谢!
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检测方法来源:一是将国标法、AOAC法或经典的教科书方法所用的诸多试剂事先做成试剂盒、试剂包或试纸卡,尽量减少现场试剂的配置。将方法中所用的仪器、器皿等研制成为或精心选购一些小巧和便于携带的设备。二是将实验室中最新的科研成果转化成为能适于现场使用的检测设备和方法。所采用的一些快速检测方法正在制订我国国家标准,如蔬菜中亚硝酸盐快速检测方法等,还有已成为了国家标准方法,如大肠菌群的检测方法、农药残留快速检测方法等。
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酱油中总酸与氨基酸态氮含量的快速测定:滴瓶计数法(国标基础上的快速方法)。主要用于产品质量和假冒伪劣产品的现场检测。10分钟内出结果,本方法总酸测定误差±0.45%,氨基酸态氮测定误差±0.078%。
一般可用方法:
1、单指示剂甲醛滴定法:
(一)原理:氨基酸具有酸、碱两重性质,因为氨基酸含有-COOH基显示酸性,又含有-NH2基显示碱性。由于这二个基的相互作用,使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时,-NH2与甲醛结合,其碱性消失,破坏内盐的存在,就可用碱来滴定-COOH基,以间接方法测定氨基酸的量,反应式可能以下面三种形式存在。
(二)试剂
(1)40%中性甲醛溶液,以麝香草酚酞为指示剂,用1N NaOH溶液中和。
(2)0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。
(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。
(三)操作步骤:
称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升),加2-3滴指示剂,用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛20毫升,摇匀,静置1分钟,此时蓝色应消失。再用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数,用下述公式计算
氨基酸态氮(%)=( N V×0.014×100)/W
N:NaOH标准溶液当量浓渡。
V:NaOH标准溶液消耗的总量(m1)
W:样品溶液相当样品重量(克)。
0.014:氮的毫克当量。
2、双指示剂甲醛滴定法:
(一)原理:
与单色法相同,只是在此法中使用了两种指示剂。从分析结果看,双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂,不作介绍)相近单色滴定法稍偏低,主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。PH值在9.2,而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点,PH值为7.0,从理论计算看,双色滴定法较为准确。
(二)试剂:
(1)三种试剂同单指示剂法
(2)0.1%中性红(50%乙醇溶液)
(三)操作步骤:
取相同的两份样品,分别注入100毫升三角烧瓶中, 一份加入中性红指示剂2-3滴,用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色),记录用量,另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升,摇匀,以0.100NNaOH准溶液滴定至淡蓝色。按下述公式计算。
氨基酸态氮(%)=( N(V2-V1)×0.014)/W×100
V2:用麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量(毫升)
V1:用中性红作指示剂时碱液的消耗量(m1)。
N:标准碱液当量浓度。
W:样品的重量(克)。
0.014:氮的毫克当量。
注意事项:
测定时样品的颜色较深,应加活性炭脱色之后再滴定.
3.酸度计法
精确吸取稀释液10ml或20ml放入150ml烧杯中,加入80ml蒸馏水,开动磁力搅拌器,然后用0.0500N氢氧化钠标准溶液滴定至PH8.2,然后加入甲醛10ml,摇匀,继续用0.0500N氢氧化钠标准溶液滴定至PH9.2,记下加入甲醛后耗用0.0500N氢氧化钠标准溶液毫升数V。用同一条件做一空白对照,记下耗用数V0。
按式(6)计算:
(V-V0)×N×0.014
氨基酸态氮(g/100g)=_×100 _
式中:V 样品加入甲醛后,耗用0.0500氢氧化钠标准溶液毫升数;
V0 空白加入甲醛后,耗用0.0500N氢氧化钠标准溶液毫升数;
N 氢氧化钠标准溶液当量浓度;
0.014 氮的毫克当量;
W 样品重量;
S 样品稀释液体积,ml。
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药物领域专家实验24 可溶性糖的测定和成分分析_豆搜网
实验24 可溶性糖的测定和成分分析
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实验1& 可溶性糖的测定
一、实验目的
&&&1.学习蒽酮比色定糖法的原理和方法。
&&&2.学习721型分光光度计的原理和操作方法。
二、实验原理
&&&总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
&&&蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
&&&其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14H10O)缩合成蓝色化合物。溶液含糖量在150μg
/ml以内,与蒽酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
&&&蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接作用,样品不必经过水解。
三、实验器材
&&&1.试管(或具塞试管) 2. 吸量管及试管架(1 ml、10 ml)& 3.沸水浴&& 4. 冰浴
&&&5.721型分光光度计&&&
&&&6.蒽酮试剂
&&&称取100
mg蒽酮溶于100 ml 98%硫酸溶液(A.R)中,用时配制。
&&&7.葡萄糖标准溶液(100 μg/ml)&&200
&&&精确称取100
mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 ml。
&&&8.样品溶液&& 200 ml&&
可自选待测物制成样品溶液。
&&&举例:称取500
g市售白薯(或淀粉),洗净切碎后用多功能食品加工机磨成浆,4层纱布压滤、弃滤液溜渣,将渣放于烘箱内80~85℃烘干后,再用植物粉碎机(微型)研细,过筛,取100目筛下物为待测样品。
&&&取样品在烘箱内105℃烘干,恒重后,精确称取1~5
g,置于锥形瓶中,加入80 ml沸蒸馏水,放入沸水浴。不时摇动,提取0.5
h。取出立即过滤,残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤,合并滤液。冷却至室温,用蒸馏水定容至100
&&&9.白薯。
四、实验步骤:
&&&1.制作标准曲线& 取7支干燥洁净的试管,编号后按下表操作。
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