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(生物化学与分子生物学专业优秀论文)重组苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶表达条件的优化及结构预测.pdf52页
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(生物化学与分子生物学专业优秀论文)重组苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶表达条件的优化及结构预测.pdf
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硕士学位论文 MASTER’S ⑨ THESIS 摘要 丙酮酸脱氢酶复合体①DHc 是焦磷酸硫胺素依赖型多酶体系,广泛存在于原核 生物和真核生物中。PDHc复合体催化丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA,乙酰CoA进入 三羧酸循环被彻底的氧化分解,为生物体的生命活动提供必要的能量。丙酮酸脱氢 酶 E1 是催化丙酮酸氧化脱羧反应的第一个酶,其催化的反应是整个反应过程中唯 一的不可逆步骤,其活性一旦受抑制,则有氧代谢受阻,生物体的代谢活动受到影 响。鉴于丙酮酸脱氢酶在代谢中的重要作用,研发以丙酮酸脱氢酶为靶标、具有低 毒的抑制剂,将会为抑制剂的研究打开一个全新领域。本研究试图为筛选出以丙酮 酸脱氢酶为靶标的杀菌剂提供充足的酶制剂。 本课题组在前期工作中已经在大肠杆菌中成功表达了苏云金芽孢杆菌丙酮酸
脱氢酶,但表达产物主要以没有生物活性的包涵体形式存在。本研究通过对宿主菌 的表达条件 培养基组成,培养基的pH值,菌体密度,诱导剂浓度,诱导温度和诱
导时间 进行优化进而获得有生物活性的重组酶。一般的表达条件是使用pH值为7.2
小时。在此条件下所表达的可溶目的蛋白为0.945m∥每loomL培养液,活力为
基,从培养液菌体密度4―4.5 O.D600 起,在21℃下,使用终浓度O.04n瑚ol/L的口TG
诱导8小时可使可溶的苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶在大肠杆菌中表达量达到 目的蛋白含量增长484%,活性提高近200%。通过亲和层析,每100mL培养液可获
液中有125%的相对活性;重组酶的Vm积是16.34岬∞№洫,Km2.14HHllo儿。 在获得重组苏云金芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶的基础上,对同源性进行了分析。
NCBI BLAST显示,与蜡状芽孢杆菌丙酮酸脱氢酶有高达99%的同源性,和枯草芽
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【优秀毕业论文】基于量子化学的蛋白质分子场建模及其应用
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分子伴侣GroEL%2fGroES介导重组蛋白可容表达折叠的组装初步和研究.pdf95页
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分子伴侣GroEL/GroES介导重组蛋白 可溶表达及折叠与组装初步研究 ⑧ 论文作者签名:―二司舡 指导教师签名:基』尘墨堡 论文评阅人1: 隐名翌宣 评阅人2: 隐垄迁宣 评阅人3: 隐垒望宣 评阅人4: 评阅人5:
答辩委员会主席 委员l: 委员2: 委员3: 委员4: 委员5: Soluble ofrecombinantmediated expression proteins by GroEL/GroESandthe
chaperonin folding-assembly Author’SS Supervisor’S Thesisreviewer1:
△坠Q壁Y也Q坠曼巡i望塑壁£ Thesisreviewer2: △坠Q坠Y堕Q坠墨!:呈翌i皇塑璺£ Thesisreviewer3: △塾Q望Y磐Q坠墨醴Yi曼盟曼£ 4. Thesisreviewer Chair:Prof.Yun Junxian oforal Committeedefence Committeeman1: £艘£№QS塾垒塾ji塾g Committeeman2: £丝£Li塾坠Q塾gqi垒塾g Committeeman 3:Prof.GuanYixin Committeeman4. Dateoforal defence:圣量:丛星YI2Q曼2 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的
研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发
表或撰写过的研究成果,’也不包含为获得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或
证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文
中作了明确的说明并表示谢意。 糊黼始f习巧鳓期:渺年…弓日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 逝姿盘堂 有权保留并向国家有关部门或机
构送交本论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂
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水稻ospen基因的克隆及功能初步研究.pdf75页
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水稻ospen基因的克隆及功能初步研究
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摘 要 近年来,随着许多抗性基因 R基因 的克隆,对植物与病原物相互作用分子机理 的研究取得了许多突破性进展,推动了对植物抗性的研究。然而与R基因控制的植物
抗性研究相比,对植物非寄主抗性分子基础的认识还比较滞后。非寄主抗性是植物对
大多数病原物产生抗性,对少数病原物感病,是最主要的抗病类型,它不是由植物单
个专化性抗病基因控制的,不易随着病原微生物的变异而丧失,具有稳定持久抗性的
特点,因此在农业上有广阔的应用前景。 f 大麦白粉病菌 Blumeriagraminissp.Hordei,Bgh 对拟南芥本身是不致病的,通
过筛选Bgh对拟南芥有高致病力的拟南芥突变体克隆了PEN基因,目前有三个基因
程,AtPENl编码一个可溶N.乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的因子适配器蛋白质受体
相关的抗性机制产生对粉状病原物的非寄主抗性。拟南翔垆EM和大麦HvROR2对植
物非寄主抗性的研究起着重要作用,我们通过研究也发现拟南芥AtPENl对小麦白粉
病菌 Blumeriagraminisf.sp.trtici,Bgt 的非寄主抗性也同样起着非常重要作用,水稻
我们推测伪尸EM对水稻抗性起着重要作用。 本研究通过在NCBI网站上BLAST比对,在水稻日本晴中获得了与拟南芥
对OsPENl基因构建过量表达和RNA干涉载体并通过农杆菌介导法转化水稻,通过
基因植株接种水稻真菌稻瘟病菌和纹枯病菌和水稻细菌白叶枯病菌进行抗病性鉴定,
最后对OsPENl蛋白进行生物信息学分析,其主要的研究结果如下:
电泳分离、回收,并连接进pMDl8.T载体中,酶切、测序鉴定重组阳性质粒。 2.植物表达载体的构建。将重组质粒和植物的表达载体分别用相应的限制酶酶
切后,将酶切的OsPENl片段亚克隆到表达载体中构建重组表达载体
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