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细胞培养（Cell Culture）专题：/special/experiment/Cellculture.htm一、所谓细胞培养(Cell culture)是指细胞包括单个细胞在体外条件的生长。 组织培养的发展史已有近百年，最初的组织培养是胚胎学和微生物学的引申，建立于无菌原则上，用天然体液（如胎汁、血浆）来维持从整体切下的组织块，对细胞进行形态和功能的观察。 通过许多学者大的改进和革新，培养基由天然动物血浆改为合成培养基，促进细胞生长物质从胎汁改为动物。现在全世界贮存的细胞约有万种以上。组织培养不仅是细胞生物学必需的技术，也是分子生物学、肿瘤学、遗传学和免疫学等学科必要的方法。 二．基本原理和方法 体外培养细胞的生存条件： (一)营养。 体外培养细胞所需的营养物质与体内相同，主要有糖、和三大类。目前市面上销售的合成培养基如等所含的已足够，但在使用合成培养基时，仍需加入一些天然成份，如人或动物的、血浆和胎汁等。目前主要使用血清，以牛血清为主。血清的生物效应早已证明，它含有多种促细胞、促贴附因子及其它活性物质等。不仅能促进细胞增长且能帮助细胞贴壁。不同血清对细胞作用不同。以小牛血清最好，成年牛和马血清次之。合成培养基中不加血清也能维持细胞生存，但不能很好生长，加入5%的血清，对大多数细胞来说，能维持细胞不死和缓慢生长，要使细胞正常生长，一般需加10～15%的小牛血清。每个批号血清使用前要加热处理，一般灭活于56℃中30分钟，每个批号血清使用前要加热处理，一般灭活于56℃中30分钟，每5分钟摇一次。10%血清营养液能促进细胞增殖称为生长液，2～5%血清培养液不能使细胞增殖而只能维持其生存称为维持液。添加血清，虽利于细胞生长，但增加了不明成分，给分析实验结果带来了困难。因此，人们正在探索不用血清的无血清液并已取得了一定进展。 （二）环境 1．无菌：无菌是保证培养细胞生存的首要条件。培养液不仅对细胞是高营养物，对细菌和霉菌也是高度营养物，细胞培养中如污染微生物，其繁殖比细胞快且能产生毒素使细胞死亡，因此细胞培养技术的关键之一是防止污染。污染微生物可来源于组织培养液、器皿、组织本身、工作者本身。因此，培养室的空气等要彻底消毒，所有操作均要严格实行无菌操作，各种物品拿入操作台前应消毒，用洒精擦表面，用前于紫外线照；操作者洗手、泡手，酒精擦手，打开培养管前须在火焰上烙烧一下瓶口以使灰尘固定，操作时须将瓶、管斜放，注入液体应避免和瓶口接触，操作时禁止讲话。 2.温度：组织培养的最适温度为35-37℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢和生长将会受到影响，甚至导致死亡。培养细胞对低温的耐受力比高温强。温度增加2-3℃对细胞产生不良影响，使之在24小时死亡，温度在43℃以上，细胞大多被杀灭，而低温对细胞影响较小，细胞置于25-35℃时，细胞仍能生存和生长，但速度缓慢，放在4℃数小时之后，再置37℃培养，细胞仍能继续生长。 3.气体：气体也是细胞生存的必需条件之一。所需的气体主要有O2和CO2。O2参与三羧酸循环产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。CO2既是细胞代谢产物也是细胞所需成分。它主要与维持培养液pH值有直接关系。 4.pH值：多数细胞的适宜pH值为7.0-7.4，偏离此范围对细胞可产生有害的影响。各种细胞对pH值的要求也不完全相同，但总的来说，细胞耐酸性比耐碱性大一些。培养液中的缓冲体系主要是碳酸氢盐/ CO2。细胞代谢产生的各种酸使pH下降，而培养液中的NaHCO3产生CO2排入空间又使pH增加。 5.培养器皿的处理：培养器皿处理的好坏与否对于细胞的贴壁生长影响很大，除少数悬浮生长的细胞外，绝大多数细胞属于贴壁依赖性细胞或培养物。它们只有贴附于不起化学作用的物体的表面时，才能生长、生存或维持功能。目前，常用的器皿主要有玻璃及塑料二大类。玻璃器皿一般须用清洁液浸泡1至7天，清水冲洗20次后再用水过洗2次，烤干备用。用前160℃高温消毒2小时后使用。96孔或24孔塑料板一般用2%NaOH浸泡4小时后，清水洗净再用1N HCL浸泡4小时，用清水冲洗后再用水漂洗，37℃干燥后，紫外线灯照射消毒；新橡皮塞须先用1/2NnaOH煮沸15分钟，冲洗后再用4%HCL煮沸15分钟，清水冲洗后用蒸馏水洗5次，煮沸10分钟灭菌，或送高压灭菌。 总之，细胞在适当的培养条件下可迅速增殖，但若遇到不良环境细胞会变圆，停止生长，甚至死亡，这是细胞的保护机制。综上所述，细胞培养的基本条件主要包括了营养液、无菌条件、PH、温度、气体条件和培养器皿的清洁度。 三．常用的培养方法 根据培养物细胞生物学的特点，组织培养可分为原代培养和传代培养。亦可根据培养条件和器皿的不同而分为静置培养和动态培养。静置培养为最常见的方式，细胞可为贴壁型细胞，亦可为悬浮的不贴壁细胞。细胞培养（Cell Culture）专题：/special/experiment/cellculture.htm
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等你回答的问题：己知空气主要是由78%的氮气21%氧气、以及稀有气体、二氧化碳等组成的混合物。下图为淀粉消化后的终产物a进入血液循环，井进入组织细胞进行代谢及其代谢终产物排出体外的过程示意图。图中a、b、c、d、f分别代表不同的物质。请据图回答下列问题： &#13;&#13;1．淀粉被彻底消化后形成的物质a是 &#13;[
]A．葡萄糖B．氨基酸 C．甘油 D．脂肪酸 2．图中b表示进入肺泡的气体，c表示从肺泡中排出的气体。下列有关对这两种气体主要性质的描述中，最确切的是&#13;[
]A．b为氧气，c为二氧化碳B．b中氧气含量最高．c中二氧化碳含量最高 C．b表示吸入肺泡中的空气，c表示经肺泡处气体交换后呼出的气体 D．b中气体不含二氧化碳，c中气件不含氧气 3．正常人血液中，a的含量能够保持相对稳定，起调节作用的激素主要是&#13;[
]A．生长激素 B．甲状腺激素 C．胰岛素D．肾上腺激素 4．正常人的血被、血浆、原尿与尿液四种液体中，含有物质a的是&#13;[
]A．血液、血浆和原尿B．血浆、原尿利尿液C．血液、原尿和尿液 D．血液、血浆和尿液 5．在组织细胞中，物质a彻底氧化分解以获得能量的过程主要是在细胞内的____中进行的。 &#13;[
]A．叶绿体 B．线粒体C．液泡D．细胞棱 6．图中d代表进入肾小囊的物质，e代表肾小管中回到血液中的部分物质，f代表经尿道排出的物质。正常的人体中，有关这三种物质的叙述，不正确的一项是&#13;[
]A．d物质含有蛋白质、葡萄糖、水、无机盐、尿素B．e物质含有葡萄糖、水、无机盐等 C．f物质含有水、无机盐、尿素 D．三种物质，都不含有红细胞
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在线咨询下载客户端关注微信公众号&&&分类：己知空气主要是由78%的氮气21%氧气、以及稀有气体、二氧化碳等组成的混合物。下图为淀粉消化后的终产物a进入血液循环，井进入组织细胞进行代谢及其代谢终产物排出体外的过程示意图。图中a、b、c、d、f分别代表不同的物质。请据图回答下列问题： &#13;&#13;1．淀粉被彻底消化后形成的物质a是 &#13;[
]A．葡萄糖B．氨基酸 C．甘油 D．脂肪酸 2．图中b表示进入肺泡的气体，c表示从肺泡中排出的气体。下列有关对这两种气体主要性质的描述中，最确切的是&#13;[
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]A．d物质含有蛋白质、葡萄糖、水、无机盐、尿素B．e物质含有葡萄糖、水、无机盐等 C．f物质含有水、无机盐、尿素 D．三种物质，都不含有红细胞 己知空气主要是由78%的氮气21%氧气、以及稀有气体、二氧化碳等组成的混合物。下图为淀粉消化后的终产物a进入血液循环，井进入组织细胞进行代谢及其代谢终产物排出体外的过程示意图。图中a、b、c、d、f分别代表不同的物质。请据图回答下列问题： &#13;&#13;1．淀粉被彻底消化后形成的物质a是 &#13;[
]A．葡萄糖B．氨基酸 C．甘油 D．脂肪酸 2．图中b表示进入肺泡的气体，c表示从肺泡中排出的气体。下列有关对这两种气体主要性质的描述中，最确切的是&#13;[
]A．b为氧气，c为二氧化碳B．b中氧气含量最高．c中二氧化碳含量最高 C．b表示吸入肺泡中的空气，c表示经肺泡处气体交换后呼出的气体 D．b中气体不含二氧化碳，c中气件不含氧气 3．正常人血液中，a的含量能够保持相对稳定，起调节作用的激素主要是&#13;[
]A．生长激素 B．甲状腺激素 C．胰岛素D．肾上腺激素 4．正常人的血被、血浆、原尿与尿液四种液体中，含有物质a的是&#13;[
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]A．叶绿体 B．线粒体C．液泡D．细胞棱 6．图中d代表进入肾小囊的物质，e代表肾小管中回到血液中的部分物质，f代表经尿道排出的物质。正常的人体中，有关这三种物质的叙述，不正确的一项是&#13;[
]A．d物质含有蛋白质、葡萄糖、水、无机盐、尿素B．e物质含有葡萄糖、水、无机盐等 C．f物质含有水、无机盐、尿素 D．三种物质，都不含有红细胞 科目:最佳答案1．A2．C3．C4．A5．B6．A 解析&#13;知识点:&&基础试题拔高试题热门知识点最新试题
关注我们官方微信关于跟谁学服务支持帮助中心键：而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成膦酸；ＤＮＡ聚合酶是以一条ＤＮＡ链为模板，将单个核苷酸；３.基因工程的载体需要具备那些条件？；答：能自我复制；有一个或多个酶切位点；有标记基因；４.限制酶所识别的序列有什么特点？；答：限制酶所识别的序列，无论是６个碱基还是４个碱；５.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以；答：不可以；６.若要生产人的糖蛋白，
键：而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成膦酸二脂键,不是在单个核苷酸与ＤＮＡ片段之间形成膦酸二脂键。
ＤＮＡ聚合酶是以一条ＤＮＡ链为模板，将单个核苷酸通过膦酸二脂键形成一条与模板链互补的ＤＮＡ链；而ＤＮＡ连接酶是将ＤＮＡ双链上的两个缺口同时连接起来。因此ＤＮＡ连接酶不需要模板。
３. 基因工程的载体需要具备那些条件？
答：能自我复制；有一个或多个酶切位点；有标记基因位点；对受体细胞无害
４. 限制酶所识别的序列有什么特点？
答：限制酶所识别的序列，无论是６个碱基还是４个碱基，都可以找到一个中心轴线，中轴线两侧的双链ＤＮＡ上的碱基是反向对称重复排列的。
５. 作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？
答：不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如：启动子、终止子和标记基因等。
６. 若要生产人的糖蛋白，可用大肠杆菌吗？
答：不可以。糖蛋白上的结合的糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的。内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。
７. 基因工程有那些应用成果？
答: 1）植物基因工程成果：抗虫转基因植物（抗虫棉是转入Bt毒蛋白基因培育的）
抗病转基因植物（病毒外壳蛋白基因、病毒复制酶基因）
抗逆转基因植物（生物的抗性基因）
转基因改良植物（营养价值、实用价值、观赏价值）
（2）动物基因工程成果：提高动物生长速度（外源生长激素基因）
改善畜产品的品质
转基因动物生产药物（牛、山羊等动物乳腺生物反应器中表达了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素、α-抗胰蛋白酶）
转基因动物作器官移植的供体（导入调节因子，抑制抗原决定基因表达或除去抗原决定基因培育没有免疫排斥反应的转基因克隆器官）
基因工程药物（利用转基因工程菌生产细胞因子、抗体、疫苗等） ８. 将目的基因导入受体细胞的方法有那些？
答：导入植物细胞：农杆菌转化法（转基因抗虫棉用的是花粉管通道法）；导入动物细胞：显微注射技术（注射入受精卵中）；导入原核生物：一般是将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。
９. 蛋白质工程的基本途径是什么？
答：基本途径：从预期的蛋白质功能出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）
１０. 克服远缘杂交不亲和障碍的技术有那些？
答：基因工程、植物体细胞杂交技术、动物细胞融合技术
1. 人们利用植物的微型繁殖技术来进行工厂化育苗生产，这是利用了该项技术的那些特
答：植物“微型”繁殖技术具有高效性和可以保持种苗的优良遗传特性的优势。工厂化育苗生产就是利用了该项技术的这两方面优势。
2. 人工种皮中应该具有的有效成分是什么？为了促进胚状体的生长发育，还可以向人工种
皮中加入那些物质？
答：针对植物种类和土壤等条件，在人工种子的包裹剂中还可以加入适量的养分、无机盐、有机碳源以及农药、抗生素、有益菌等。为了促进胚状体的生长发育，还可以向人工种皮中加入一些植物生长调节剂。
3. 细胞全能性的大小？
答：受精卵&生殖细胞&体细胞
4. 幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，那一种
更易培养？
答：幼龄动物组织、分化程度低的组织细胞比老龄动物的组织细胞、分化程度高的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。所以，幼龄动物组织、分化程度低的组织细胞易培养。
5. 体外培养细胞时需要提供那些物质和什么样的环境条件？
答：充足的营养供给，适宜的温度、适宜的PH和气体环境。环境条件需要是无菌和无毒的环境。
6. 体外培养细胞时所需要的气体主要有O2和CO2，他们的作用是什么？
答：O2 是细胞代谢所必需的。CO2的主要作用是维持培养液的PH。
7. 在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？
答：为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移致受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。
8. 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？
答：10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细胞核移植中，为保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用传代10代以内的细胞。
9. 克隆动物是否是对体细胞供体动物进行了100%的复制？
答：克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。所以不是100%的复制。
10. 胰蛋白酶会不会把细胞消化掉？
答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
11. 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用
胃蛋白酶行吗？
答：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胰蛋白酶作用的适宜PH约为2，当PH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜PH为7.2~8.4.多数动物细胞培养的适宜PH为7.2~7.4，胃蛋白酶在此环境下失活，而胰蛋白酶在此环境中活性较高。因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。
12. 植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？
答：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的时植物体细胞融合前需去除细胞壁，然后在融和；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。
13. 制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 答：因为B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此将二者融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性。
（10北京卷）29.（20分）
在验证生长素类似物A对小麦胚芽鞘（幼苗）伸长影响的试验中，将如图1所示取得的切段
进入蒸馏水中1小时后，再分别转入5种浓度的A溶液（实验组）和含糖的磷酸盐缓溶液（对照组）中。在23℃的条件下，避光振荡培养24小时后，逐一测量切段长度（取每组平均值），实验进行两次，结果见如图2。
请分析并回答：
生长素类似物是对植物生长发育有重要_______作用的一类化合物。本实验中
__________mg/L浓度的溶液促进切段伸长的效果最明显。
振荡培养的目的是：①增加溶液中的________以满足切段细胞呼吸的需求；②
使切段与溶液成分接触更___________。
生长素类似物A应溶解于__________中，以得到5种浓度的A溶液。切段浸泡
在蒸馏水中的目的是减少__________对实验结果的影响。
图2中，对照组切段的平均长度是__________mm。浓度为0.001mg/L的溶液对
切段伸长___________（选填“有”或“无”）促进作用；与浓度为1mg/L的结果相比，浓度为10mg/L的溶液对切段的影响是_________。
图2中，浓度为0.1mg/L时实验二所得数据与实验一偏差较大，在做原始记录
时对该数据应___________（选填下列选项前的字母）
C． 如实填写
为检验该浓度下相关数据的可靠性，还应___________。
答案（1）调节；1
（2）①氧气；②均匀
（3）含糖的磷酸盐缓冲液；切段中内源激素。
（4）7.0；有；促进伸长的作用减弱
（5）C；重复实验
【考点直击】本题考查生长素类似物对小麦胚芽鞘（幼苗）伸长的影响实验，同时考查考生从题干和图形中获取信息的能力，以及对知识的理解和应用能力。此考点几乎每年都有考查。
【要点透析】（1）生长素属于植物激素，对植物生长发育有重要调节作用；据图2，1mg/L浓度的生长素类似物A溶液促进切段伸长的效果最明显。
（2）震荡培养可增加溶液中的氧气的量，还能使切段与溶液成分混合均匀。
（3）对照试验的溶液为含糖的磷酸盐缓冲液，所以生长素类似物A要溶解于含糖的磷酸盐缓冲液中；切段浸泡在蒸馏水中可以减少切段自身产生的生长素的影响。（4）据图2，生长素类似物A溶液浓度为0的即为对照组，切段的平均长度是7mm，与7mm比较，浓度为0.001mg/L的溶液对切段伸长有促进作用，与浓度为1mg/L的结果相比。浓度为10mg/L的溶液对切段的影响是促进伸长的作用减弱。（5）试验得到的数据要如实填写，误差大的可以重复试验。【考场雷区】在日常生活或学习中，错误数据或舍弃或修改，这成了一个思维定势，而试验中所有数据都要如实填写，误差大的还要重复试验，这是考生应注意的一个雷区。
包含各类专业文献、文学作品欣赏、行业资料、各类资格考试、幼儿教育、小学教育、专业论文、外语学习资料、生物必修三选修三复习53等内容。　
　高中生物必修3必备知识点_高二理化生_理化生_高中教育_教育专区。高中生物必修3复习必备知识点,包括实验部分。高二生物必备知识点必修 3 第 1 章:人体的内环境与... 　必&#8203;修&#8203;一&#8203;第&#8203;六&#8203;章&#8203;必&#8203;修&#8203;三&#8203;前&#8203;三&#8203;章生物周周清九 1.右图表示某生物细胞有丝分裂过程中细胞核内 DNA 含量变化的曲线。下列有... 　高二下学期生物试卷(必修三+选修三)一.选择题(每题只有一个选项最符合题意,每题 4 分,共 5240 分) 1、春天一到,鸡的生殖腺就发达起来,这是由于白天变长,... 　高中生物必修三期末复习试... 13页 1财富值 高中生物必修三模块考试模... 7...(必修三+选修三)(必修三+选修三)隐藏&& 高二生物练习题 姓名 班级 1 .为了... 　龙山中学高三生物必修三、 高三生物必修三 2011 年龙山中学高三生物必修三、选修三测试一、单选题 每题 1 分,共 20 分 1. (08 无锡调研 29)一青年农民利用... 　2011届高考复习《基因工程... 8页 免费如要投诉违规内容,请到百度文库投诉中心...生物必修三生态系统和选修三基因工程试卷 隐藏&& 2012 月月考试卷 惠南中学 2012... 　高中物理选修3-1和生物必修三 知识点归纳_理化生_高中教育_教育专区。物理选修 3-1 一、电场 1.两种电荷、电荷守恒定律、元电荷(e=1.60×10 C) ;带电体... 　生物必修 3 复习提纲(必修)第二章 生物个体的稳态第一节 人体的稳态 一、稳态的生理意义 1、内环境: (1) 单细胞生物直接与外界环境进行物质和能量转换, 而... 　高中生物人教版必修三知识点总结_理化生_高中教育_教育专区 暂无评价|0人阅读|0次下载|举报文档 高中生物人教版必修三知识点总结_理化生_高中教育_教育专区。...