NEB牌 M2200V,Quick Ligation Kit,15
快速连接(TM) 试剂盒
商品编号：01.NEB.M2200V货号：01.NEB.M2200V品　　牌：所得积分：229
DNA, RNA：
包装大小：
酶、缓冲液：
市场价： ￥509.00
普通零售会员价：
限时特价：
￥356.00 &&
小时 分钟 秒
节省：￥102.10
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(库存情况仅供参考，请来电确认准确的现货情况)
本商品仅供科研之用，不可用于临床
■& 粘性或平齐末端连接仅需 5 分钟&
■& 连接反应在室温即可进行
快速末端平齐化试剂盒和快速连接试剂盒使您的克隆反应效率更高，同时购买节省15% 的开支。
本试剂盒可在室温（25℃）5 分钟条件下，完成 DNA 片段粘性末端或平滑末端的连接反应。
试剂盒成份
■& 快速 T4 DNA& 连接酶（重组酶）
■& 2X 快速连接缓冲液
2X 快速连接反应缓冲液
132 mM Tris-HCl20 mM MgCl22 mM DTT2 mM ATP15% 聚乙二醇（PEG 6000）pH 7.6 @ 25 ℃
按照以下步骤检测快速连接试剂盒连接产物的转化效率：
LITMUS 28 载体经 EcoRV 切割（平齐末端）或 HindIII 切割（粘性末端）后，用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）处理，胶回收纯化。插入片段来自 φX174 DNA 的 HaeIII 消化产物（平齐末端）或 λDNA 的 HindIII 消化产物（粘性末端），插入片段和载体以 3：1 的比例，按照快速连接程序进行连接。所得连接产物直接进行转化实验。
每一批试剂盒均高于以下标准：&&&&&&&&&&&&&&&转化率（转化子/μg）&&&&&&&&&&&&&& 重新环化数&&&&&&&&&&&& 插入数粘性末端&&&& 5 x 106&&&&&&&& && & 1 x 106平齐末端&& & 2 x 106&&&&&& &&& && 1 x 106未切载体&&&&&&2 x 107
使用前完全混匀。避免反复冻融。
用快速连接试剂盒能使大多数连接反应在 25 ℃ 条件下 5 分钟甚至更短的时间内达到反应终点，超过这个时间效果并不会更好。事实上，连接两小时后转化效率便会降低，如果 25 ℃ 反应过夜，则转化效率会降至 75%。
电转化可以使转化效率提高几个数量级。在用快速连接反应产物做电转化以前，一定要降低 PEG浓度。我们推荐使用柱离心式 DNA 纯化方法。
快速连接进程曲线：LITMUS 28 载体经 EcoRV 切割（平齐末端）或 HindIII 切割（粘性末端）后，用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）处理，胶回收纯化。插入片段来自 φX174 DNA 的 HaeIII 消化产物（平齐末端）或 λDNA的 HindIII 消化产物（粘性末端），插入片段和载体以 3：1 的比例，使用快速连接试剂盒进行连接。连接产物转化入化学方法制备的大肠杆菌感受态细胞，在 LB-amp 平板上 37 ℃ 生长过夜。
NEB内切酶使用攻略
NEB内切酶攻略（一）酶切反应条件的优化&
NEB内切酶攻略（二）双酶切反应
NEB内切酶攻略（三）限制性内切酶实验问题指南
NEB内切酶攻略（四）星号活性（特异性降低或改变）
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NEB内切酶攻略（六）克隆概述
NEB内切酶攻略（七）提高转化效率
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&&&&方法经双酶切和T4连接酶构建pLenti6/V5-GDNF表达质粒,经293FT细胞包装产生高滴度病毒。
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&&&&4. Construction of recombinant strains labeled with gfp gene in Bacillus thuringiensisBy SOE technic, a recombinant plasmid pBMBZGC10 with P4412 was obtained by the ligation of gfp-crylAc 10 fusion gene and vector plasmid pAD4412. Another recombinant plasmid pBMBZGC11 with PBtI-BtII was obtained by replacing promoter.
&&&&本研究利用SOE法将构建的绿色荧光蛋白基因gfp和苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白基因cry1Ac10的嵌合基因克隆到穿梭载体pAD4412上获得成重组质粒pBMBZGC10。 同时又将苏云金芽胞杆菌启动子P_(BtⅠ-BtⅡ)替换蜡状芽胞杆菌启动子P_(4412)，经同一穿梭载体pAD4412构建得到了pBMBZGC11。
查询“ligation”译词为用户自定义的双语例句&&&&我想查看译文中含有：的双语例句
为了更好的帮助您理解掌握查询词或其译词在地道英语中的实际用法，我们为您准备了出自英文原文的大量英语例句，供您参考。&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& The regeneration of the pancreas of rabbits was studied with histological, histochemical and biochemical methods. Amylase activity of the blood and the pancreas in the different stages of regeneration were determined by biochemical method. The corresponding morphological changes of the pancreas were shown by ordinary histological method. Histochemical observations on lipase, alkaline phosphatase and RNA were also made. The experimental animals were divided into three groups: (1)those after 24 hours starvati... &&&&&&&&&&&&(一) 結扎家兔胰导管,使胰腺退化至5天或7天时,重新使其恢复暢通,胰腺組織可以再生。在其再生过程中,腺体内淀粉酶活力的变化是随腺体的再生时間的延长而逐漸增强的,而血液淀粉酶活力則仍維持正常水平不变,說明在胰腺功能的退化和再生期間,血液淀粉酶可能不是由胰腺而来的。 (二) 随着家兔胰腺腺泡細胞的新生,腺泡細胞内RNA及脂肪酶的組織化学反应又重新出現,并逐漸恢复增强,且与胰腺内淀粉酶活力上升的变化有平行关系。 (三) 家兔胰腺再生过程中,用組織化学显示碱性磷酸酶的方法証实在胰腺退化期間已扩大的閏管可以逐漸恢复到正常时期的細长形态。 (四) 家兔胰腺再生初期(4天),腺細胞的核与核仁的容积增大,是随着腺体再生时間的延长而恢复到正常。 (五) 本实驗用显示腺泡内的脂肪酶,RNA和閏管細胞的碱性磷酸酶的組織化学方法进一步証实了家兔胰腺再生过程中,腺泡細胞的来源問題,結果表明在胰腺退化期間残留着的腺泡細胞能重新回生成为新的腺泡細胞,同时閏管細胞亦能分化轉变成为腺泡細胞。&&&&&&&& Acute experiments were performed on rabbits anesthetized with urethane. The change of concentration of free fatty acid (FFA) in the plasma was observed after stimulation of the peripheral ends of the dorsal and ventral subdiaphragmatic vagus nerves with induced shocks. The results were as follows: (1) The concentration of FFA in the plasma without stimulation was fairly con stant within two hours under the experimental conditions. After stimulation of the vagi, a pronounced increase in the concentration of ... &&&&&&&&&&&&本工作主要用兎做急性实驗,用强直感应电流刺激腹侧和背侧膈下迷走神經外周端,观察血浆自由脂肪酸濃度的变化,結果如下: (一)兎在麻醉情况下不进行刺激时,血浆自由脂肪酸濃度是比較稳定的;刺激膈下迷走神經后,血浆自由脂肪酸濃度卽显著升高;注射阿托品后,此反应卽消失。这說明兴奋迷走神經有使血浆自由脂肪酸濃度升高的作用。 (二)切除两侧腎上腺后刺激膈下迷走神經,血浆自由脂肪酸濃度仍表現明显的升高;而当切除胰腺后,此反应卽消失。这說明兴奋迷走神經所引起的血浆自由脂肪酸濃度的增高性变化,主要是通过胰腺而实現的。 (三)为了探討胰腺中那一因素与上述現象的产生有关,曾以注射氯化钴以及四氧嘧啶方法分別破坏胰島α和β細胞。初步結果指出,破坏α細胞后,再刺激膈下迷走神經,血浆自由脂肪酸濃度仍表現升高反应;而当破坏β細胞后,此反应卽基本消失。又結扎胰导管16—23天后,在胰腺腺泡細胞萎縮的基础上,刺激膈下迷走神經,血浆自由脂肪酸濃度不仅不表現升高,反呈明显下降。总結以上結果,可以认为:兴奋迷走神經可通过对于胰腺(可能与胰島β細胞以及胰腺外分泌系統有关)的作用明显地增高血浆自由脂肪酸的水平,这对于进一步闡明在正常机体中脂类代謝的神經体液...&&&&&&&& T_4 RNA ligase catalyzes the ligation of [5'-~(32)p] nucleoside-3', 5'-bisphosphate donor to a 3'hydroxyl-terminated RNA acceptor. The RNA labelled by this method can be used in the determination of base sequences near 3'-end. &&&&&&&&&&&&T_4RNA连接酶可以把[5′-~(32)p]核苷-3′,5′-双磷酸连接到RNA的3′羟基上,用此方法标记的RNA可以用于3′末端及其邻近的碱基顺序分析。&nbsp&&&&&&&&相关查询:
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&2008中国知网(cnki) 中国学术期刊(光盘版)电子杂志社水木社区手机版水木社区手机版版面-生命科学(LifeScience)主题:[生物通新技术专题]如何提高PCR产物克隆的效率以下转载其文字部分，图示等请到生物通网站浏览：/bbsf/xjszl/B.asp如何提高PCR产物克隆的效率发布日期:&&------------------------------------------------------------------------ &&&&生物通编者按：把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1.直接克隆到T载体（或者U载体上）2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。&&&&方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，New England Biolabs公司的Vent酶，以及QIAGEN公司新出的同时具有热启动功能的高保真ProofStart酶，进行PCR扩增，由于这类酶有很强的校读功能，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇（PEG2000），以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒，比如New England Biolabs新出的5分钟快速连接试剂盒，能够简化平端连接步骤和条件，缩短连接时间，提高连接效率。&&&&不过需要注意的是一些厂家（例如Clontech、Gibco/BRL、Roche）也生产一些用于PCR的高保真混合酶，是采用常规Taq酶和一些有校读功能的（proofreading）的聚合酶按比例混合（这样得到的混合酶的保真性比普通Taq酶高一点，但通常不如Pfu、ProofStart等酶），因而得到的PCR产物也是平端和A末端的混合产物，是否能用TA克隆试剂盒需要参考厂家的说明。&&&&方法2是比较常用的经济的方法，不需要购买T载体，可以直接通过酶切PCR产物，得到粘末端，直接连接到目的载体上。在顺的时候，这种方法是非常简单的。可有时候也会出问题，双酶切就是连不上，比较常见的原因是PCR产物双酶切不完全，比如没有纯化产物就直接双酶切，有的酶比较“娇气”容易出现“切不动”或者是“星号活力”，得不到正常的粘末端而连不上。有时是因为选定的两种酶反应条件相差比较大，为了省事同时双酶切（通用Buffer不是一定通用的，不能过分迷信，有时会成为莫名其妙出错的根源），也会出现类似的错误。还有一种情况是由于有些酶在酶切时需要一定的“占位空间”，也就是要求酶切识别序列的前后有一定数量的碱基才能正常酶切，而设计引物时酶切位点直接就在5'末端，没有留下足够的保护碱基而导致PCR产物酶切不动，无法正常的克隆。由于这些错误很难检查，有的时候会浪费大量的时间，还是莫名其妙没有结果。&&&&由于常见的Taq酶或者没有校读功能的DNA聚合酶（即不是高保真）在PCR扩增的时候通常会在PCR产物末端多添加一个A（即增加一个模版上不存在的A）。这个突出的A成为PCR产物TA克隆技术的基础。带有互补的突出T末端的线性载体能够有效提高PCR产物的克隆效率，解决方法2遇到的难题，所以方法1也是目前比较常见的方法。&&&&TA克隆在顺的时候也很简单，简直就是“a piece of cake”，不用考虑酶切位点，引物设计等等问题，好的载体克隆效率高、重组率高而且两端有丰富的单酶切位点便于后继的克隆，但是烦的时候也会出现无缘无故克隆不上或者重组率很低的问题。比较容易忽略的问题是用高保真的酶进行PCR扩增，应该选用平端克隆载体而错用了TA载体。常见但很难解决的问题则是由于T末端容易和其他碱基错配而导致自身环化或者克隆了引物/自身褪火引物二聚体或者PCR不完整产物，因而出现假阳性。因而QIAGEN公司推出了UA克隆试剂盒，用突出的U末端代替T末端，由于U碱基能够有效减低和其他碱基（T、C、G）非特异退火的几率，因而能有效提高PCR产物的克隆效率。&&&&但是，是否还有其他因素会影响PCR产物的克隆效率呢？最近，QIAGEN公司的研发专家发现，PCR引物5'端的碱基（也就是引物第一个碱基）的不同，会影响PCR产物的克隆效率！以后设计引物可要注意了！看看QIAGEN的专家怎么说——Ralf Peist, Dorothee Hosel, Thea Tutjes, and Dirk Loffert&&&&基于UA的克隆技术广泛应用于PCR产物的快速、简便和高效的克隆。由Taq DNA聚合酶为PCR产物添加的多出来的一个A碱基能够和pDrive Cloning Vector（QIAGEN PCR CLoning Kit提供）载体上的互补的U碱基配对结合。PCR产物能够高效地结合到载体上，无需在引物中引入限制性内切酶位点，无需酶切或者平端连接。&&&&在某些特殊情况下，由于一些未知的原因，一些表面很正常的PCR产物的克隆效率却很低。在这里，我们证实：PCR引物的5'末端碱基能够显著影响TaqDNA聚合酶添加A末端的效率——有的时候导致只有一小部分PCR产物带有A末端，从而使PCR产物克隆效率明显降低。在这里我们提供一些简单的建议如何提高这些“难克隆”的PCR产物的克隆效率。材料和方法GeneScan?分析以确定PCR产物的长短&&&&用QIAGEN公司的QIAprep Spin Miniprep提取质粒pTZ19R。采用没有校正功能的DNA聚合酶和特异性引物分别扩增质粒上的112bp、213bp和363bp片断。每个片断的扩增都分别进行4组反应，采用同一个荧光标记的正向引物（forward primer）和4个不同的反向引物之一进行扩增，4个reverse primer的区别仅在于引物的5'端碱基分别为（A、T、G、C），其他序列都相同。PCR产物用ABI PRISM 377测序仪分析，并用ABI GeneScan分析软件进行分析。分析克隆效率&&&&用DNeasy Tissue Kit和QIAamp DNA Blood Mini Kit分别纯化小鼠和人类基因组DNA。用QIAGEN Taq DNA聚合酶或者HotStarTaq DNA聚合酶分别扩增小鼠p53基因上一段500bp的片断、人类prion蛋白基因上一段750bp的片断，以及人类白介素9基因上一段1000bp的片断。每个片断的扩增都分别进行4个反应，分别采用4对引物（区别仅在于5'末端碱基分别为A、T、G、C，其他序列相同，如表1）进行扩增。PCR产物克隆到QIAGEN PCR克隆试剂盒中的pDrive&&Cloning Vector中。计算克隆数，以其中一组5'端带A碱基的克隆数为基准（normalized to）进行比较,结果如图。Table1:Conbinations of primers used to genetate a 1000 bp fragment of the human interleukin 9 gene PCR fragment Forward primer Reverse&&Primer A 5'-ACTC...TGC-3' 5'-ACGC...TGT-3' C 5'-CCTC...TGC-3' 5'-CCGC...TGT-3' G 5'-GCTC...TGC-3' 5'-GCGC...TGT-3' T 5'-TCTC...TGC-3' 5'-TCGC...TGT-3' 　结果和讨论引物的5'末端碱基对添加A末端反应的影响&&&&没有校读功能的DNA聚合酶如Taq酶，会在PCR产物的3'末端添加多一个A（即：比模版多加一个A）为了比较引物的5'末端碱基对添加A末端反应的影响，我们比较了3个不同片断的各4组PCR产物的长短。结果表明：引物5'末端是A碱基的，PCR产物末端添加A的效率最高。引物5'末端是G的，PCR产物末端添加A的效率也很高，但是反应时间的延长，会导致添加2个A，从而影响后继的PCR产物克隆。 The effect of the primer's 5'terminus on A-addition was investigated using 3 different PCR products. Efficiency of A-addition was deternined by analyzing the PCR product length on an ABI PRISM 377 Sequencer. Absolute percentages of A addition for each fragment are shown. 引物5'末端碱基对PCR产物克隆效率的影响，以及连接时间对克隆的影响&&&&既然引物的5'末端碱基的不同会影响PCR产物末端添加A的反应效率，我们也研究了这种现象对PCR产物克隆的影响。结果表明PCR产物克隆效率与添加单个A碱基的效率正相关，引物5'末端是A的PCR产物得到的重组阳性克隆（insert-bearing colonies）最高。不同长短的片断克隆结果都证实了这一点。因此，引物设计时应该尽可能在5'末端添加A碱基。 The effect on the cloning efficiency for primers with different 5' ends was investigated using 3 different PCR products. Each of the 4 reverse primers was identical except for a different base(A,C,G,T, as indicated) at the 5' terminus. The PCR products were cloned into the pDrive Cloning Vector using the QIAGEN PCR Cloning Kit. Numbers of colonies were normalized to the number obtained when both primers contained a 5'-terminal A. &&&&如果引物设计时5'末端无法加A，延长连接时间能够弥补克隆效率的不足。30分钟的连接时间能够保证引物末端带A的PCR产物有足够高的克隆效率。如果延长连接时间到2小时，能够显著提高引物末端带C的PCR产物克隆效率。 The effect of ligation time on cloning efficiency was determined for two 1000bp PCR fragments,generated using primers containing either 5'-terminal Cs or 5'-terminal As. The PCR products were cloned using the QIAGEN PCR Cloning&&Kit with the indicated ligation times. Numbers of colonies were normalized to the number obtained using primers containing a 5'- terminal A and a 120-minute ligation time. 结论1.QIAGEN PCR Cloning Kit能够简单快速将PCR产物克隆到PCR载体中，采用QIAGEN试剂盒中特制的感受态细胞，只需要40分钟可以完成从克隆到涂板的全过程。2.偶然，PCR产物克隆效率会意外的低，此时可以通过设计一对5'端带A的引物（引物的第一个碱基是A），这样可以提高Taq酶在PCR产物末端添加A的效率，从而提高PCR产物在UA（TA）载体的克隆效率。3.如果不能在引物5'端加A，可以通过延长连接时间来提高克隆效率。 --FROM 166.111.174.50 选择讨论区&BYR-Team2010. KBS Dev-Team2011&&quickligationbuffer_百度文库
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