mark跑不出条带皮带跑偏的原因因分析

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-04-09 10:39 标签： 皮带跑偏的原因
pcr检测跑胶时，为什么mark很漂亮，可是样品条带没有呢_百度知道
pcr检测跑胶时，为什么mark很漂亮，可是样品条带没有呢
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希望对你有所帮助，请参照楼上的回答。，或者扩增出来了，再建50ul来扩增，第二次就会出现条件了，但是量不够。这样即使第一次量不够，可以取5ul第一次PCR产物为模板。没有扩增出来的话。，操作都没有问题。如果条件没有扩增出来
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明PCR没有得到产物.样本有问题2.引物不对3。1
这不是很正常的么 没有扩增出来呗 先再P一次 不行换退火温度 不行换引物 再不行不行换模板
原因可能主要有：（1）PCR产物没有扩增条带，这个原因就包括引物、反应条件、模板等等了（2）marker选择不合适；（3）点样漏了等等
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【求助】小分子量蛋白的电泳，已经用了20%的胶还是不行
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我的蛋白分子量是5KD，我用20%的分离胶跑的时侯，MARKER总是分得不理想，各条带之间分的不开，而且还是分不出１７以下的条带，我已经跑了4个小时的胶了，请问高手们这是怎么回事（我以前用15%或以下的胶也是跑不出17KD以下的MARK，但各条带之间分的比较开，最后曝光时在17KD位置可以看到蛋白的条带），
如果我用18%的胶会不会好一点，还是再另大胶的浓度，我看许多地方只提到15%以下的胶，是不是18%或是20%的胶不容易使用？
我想分离5KD的，对浓缩胶有要求吗？查看完整版本请点击这里：
standup ( 23:50:53)
一定要用TRICINE-SDS-PAGE吗，因为我用15%胶都做出蛋白条带来了，只是效果不是很满意？
TRICINE-SDS-PAGE是不是太麻烦了？
standup ( 23:53:27)
另外请问，TRICINE系统用的电泳仪是不是和我们现在用一普通电泳仪不一样呀，因为我看TRICINE系统里用的缓冲液还分正负极呀！
gogo ( 23:54:16)
您可以尝试下20%的胶在2X的电泳缓冲液中跑
yysr238 ( 23:54:35)
有没有哪个公司可以提供TRICINE系统的一整套试剂的！烦劳告诉小弟一下。
okhaha ( 23:56:41)
另外请问，TRICINE系统用的电泳仪是不是和我们现在用一普通电泳仪不一样呀，因为我看TRICINE系统里用的缓冲液还分正负极呀！
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tricine－tris电泳与tris－glycine电泳一样简单，别想的很麻烦。你只需要多买一个试剂tricine。电泳仪、电泳槽都时一样的。两者的差别就是缓冲液组成的差异，其它的制胶、电泳、染色、脱色等步骤都是相同的。对于5kd的多肽，建议你用这个系统。15或20％的分离胶浓度。
yysr238 ( 23:58:04)
谢谢大侠，我们实验室的老师让我用ＢＩＳ－ＴＲＩＳ试一下，今天第一次用，好像可以分出6kd的marker了，等明天有了结果向大家汇报。
yysr238 ( 23:59:13)
１、我跑了一次20%的胶跑的时间太长，我跑了4个小时还是没跑出6KD的，转膜后显色也没有结果，曝光后片子上一片空白，不知是不是时间太长，分解掉了，或是我的蛋白用了二周（负20度保存），时间太长了？
２、请问电泳时我的二块玻璃板之间的区域和电泳仪器内玻璃板以外的区域哪个是正极呢？
TNT ( 23:59:36)
内槽为负极，外槽为正极。
ha111 ( 23:59:58)
用tricine的电泳buffer，还要分三层胶来做，小分子的能跑得很好，我们公司也是摸索了好久才搞好小分子的
查看完整回复请点击这里：我要跑一个蛋白电泳 蛋白分子量是350kd 想要选择一个mark 请推荐合适的MARK 并且给出这个mark的条带图片
我要跑一个蛋白电泳 蛋白分子量是350kd 想要选择一个mark 请推荐合适的MARK 并且给出这个mark的条带图片
关键是要这个mark的条带图片
/protein_marker.html能找到的最大的也只有300kd了 其实无所谓的 一般的200Kd的也能用啊 只是让你大概估计个位置剪膜啥的 都是预染的marker 又不会出现在最后的结果图上
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& &SOGOU - 京ICP证050897号PCR跑胶的完成的时候，Mark特清晰，但样品甚至连条带都没有，做了好几次了都这样，请问原因何在！_百度知道
PCR跑胶的完成的时候，Mark特清晰，但样品甚至连条带都没有，做了好几次了都这样，请问原因何在！
电流170MA吧··电泳槽中的电泳液特别热电压140V，跑完之后胶的上端也跟着电流方向向一边倒，温度估计达到60°C
和电泳条件有关么！还有温度高会影响样品中目的片段的含量么·· 也没跑多久啊··以前没出现电泳液这么热的状况···最近才行出现的··
提问者采纳
除非电压大时间长你的片段“跑出去”了至于电泳液发热的情况我也遇到过，可能性小而且你说电泳液热，胶都融化了 和电泳条件应该无关原因是你的样品PCR没做成功，可能性大样品跑出去了，而且胶倒是因为电泳的电压大时间长把电泳液加热了，但是具体原因我也不是很清楚可能是缓冲液配置的问题，离子浓度大了或者是电泳槽的问题
提问者评价
好的··灰常感谢你的解答··顺便问下··两条引物的退火温度分别为56.9和56··总的退火温度要选择多少
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