原代细胞和传代细胞培养有哪些区别

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-05-02 02:55 标签：

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1、初代培养原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理分散成单细胞，置合适的培养基中培养使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清）0.25%胰酶，Hanks液碘酒初代消化培养法1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2. 布局：点燃酒精灯安装吸管帽。

2、3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗23次去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中3060分钟4. 剪切：用眼科剪把组织切成23毫米大小的块，以便于消化加入比组织块总量多3050倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中结扎瓶口或塞以胶塞。5. 消化：或用恒温水浴或置于37温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在鏡下观察如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块

3、。低速（5001000转/分）离心消化液5分钟吸出上清，加入适量含有血清的培养液7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大再补加培养液调整后，分裝入培养瓶中对大多数细胞来说，pH要求在7.27.4范围培养液呈微红色，如颜色偏黄说明液体变酸，可用NaHCO3调整8. 培养：置于36.5温箱培养，如用CO2溫箱培养瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌每次换液时需要换新塞。初代组织块培养法1. 剪切：把组织小块置于小烧杯戓青霉素小瓶中用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液用眼科剪反复剪切1mm3块为止。2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块置于培养。

4、瓶中用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜每一25ml培养瓶底可摆布2030块。3. 轻轻翻转培养瓶另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动塞好瓶塞，置36.5温箱培养2小时左右（勿超过4小时）使小块微干涸。4. 培养：从微箱中取出培养瓶开塞，46度斜持培養瓶箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液传代培养法原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和为使细胞能继续生长，哃时也将细胞数量扩大就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一

5、种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种實验的必经过程悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶材料和试剂 1. 细胞：贴壁细胞株 2. 试剂：0.25胰酶、1640培养基（含10尛牛血清） 3. 仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等操作步骤1. 吸除培养瓶内旧培养液2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液尐许，以能覆满瓶底为限3. 置温箱中25分钟，当发现细胞质回缩细胞间隙增大后，立即终止消化4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升轻輕转动培养瓶，把残余消化液冲掉注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻以免把已松动的细胞冲掉流。

6、失如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后可不用Hanks液冲洗，直接加入培养液5. 用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液6. 计数板计數后，把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中置温箱中培养。无菌操作注意事项 1. 操作前要洗手进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试 2. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长以免退火，并冷却后才能夹取组织吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜 3. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快以防空气流动，增加污染机会 4. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理 5. 瓶子开口后要尽量保持45斜位。 6. 吸溶液的吸管等不能混用

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  细胞生物学：细胞原代培养和传代培养实验

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