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【讨论】急求：IBMX怎么溶解
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这个帖子发布于5年零272天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
想配MSC成脂诱导液，将100mg IBMX溶于2.7ml DMSO中，但好像溶解度不高，比较浑浊，还有沉淀，接着还需要过滤分装，就怕一过滤不剩多少药了，谁配过说说这是怎么回事啊
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不会啊，我的IBMX全溶解在DMSO中，见这个帖子
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我就是按照的方法做的，但液体就是很混浊，这样恐怕不能再过滤使用吧
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我是100mg除以分子量，然后按在溶解在4.4996ml的DMSO中，这样溶解了，但是会有不准的问题，那个帖子只是参考而已，不过我诱导的细胞已经是圆的，很多里面已经有比较亮的泡了 ，有浑浊肯定不能过滤了，不过据我用DMSO溶的吲哚美辛直接加到完全培养液中到现在也没有污染什么的
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zxmine edited on
zxmine 我是100mg除以分子量，然后按在溶解在4.4996ml的DMSO中，这样溶解了，但是会有不准的问题，那个帖子只是参考而已，不过我诱导的细胞已经是圆的，很多里面已经有比较亮的泡了 ，有浑浊肯定不能过滤了，不过据我用DMSO溶的吲哚美辛直接加到完全培养液中到现在也没有污染什么的那你用DMSO溶解IBMX的时候，管壁有没有出现油状物质，该怎么解决。剧烈晃动后还会掉下来一块一块的物质。
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那你用DMSO溶解IBMX的时候，管壁有没有出现油状物质，该怎么解决。剧烈晃动后还会掉下来一块一块的物质。没有，澄清液体
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【求助】不使DMSO溶解药物，直接用培养基稀释药物可以吗？
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这个帖子发布于4年零51天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教问题：如果 不使DMSO溶解药物，直接用培养基稀释药物可以吗？我做细胞培养实验
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药物如果是有机分子，培养基是溶解不了的
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不用DMSO稀释不了，我的也是要用DMSO稀释到一定浓度后在用培养液稀释
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谢谢，那么具体如何掌握DMSO稀释的浓度吗？那么是否所有的药物都需要使用DMSO溶解呢？药物是粉剂
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用DMSO溶解成一定浓度的母液，储存在的低温冰箱中。需要使用时再用培养液稀释母液，药物中的DMSO的浓度一定不能太高，要控制在1%以下，否则会对细胞产生毒性。
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您好，此时的培养基需要加血清吗
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whiteblue 用DMSO溶解成一定浓度的母液，储存在的低温冰箱中。需要使用时再用培养液稀释母液，药物中的DMSO的浓度一定不能太高，要控制在1%以下，否则会对细胞产生毒性。 不是1‰吗？怎么是1%啊？这是指母液中DMSO的含量还是终浓度里的含量？
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cheff0412 edited on
有的药物不用DMSO也可以溶解，我做的是一种总皂苷，提取出来是粉末，我直接用无血清1640溶解的，溶解后离心溶液没有沉淀，显微镜下观察也没有不溶解的颗粒。。。
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一般粉末药物说明书上会有该药物的溶解度，你根据溶解度计算，加入的DMSO量至少需要将药物全部溶解，然后再根据所需浓度进行稀释。
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翟小不 有的药物不用DMSO也可以溶解，我做的是一种总皂苷，提取出来是粉末，我直接用无血清1640溶解的，溶解后离心溶液没有沉淀，显微镜下观察也没有不溶解的颗粒。。。您好，您是直接用培养基溶解的药物粉末吗？培养基和药物会有反应吗？不会有不溶的部分吗？谢谢解答
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【求助】MTT中用DMSO为溶剂溶解天然药物
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这个帖子发布于11年零71天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
MTT实验中，以DMSO作为溶剂溶解天然小分子药物，并作用于细胞时，DMSO的浓度应该是多少？请高手指教
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干吗一定要用DMSO助溶呢，DMSO不是要用在最后一步的显色中吗？这样岂不是对最终的结果有影响吗？建议换一种助溶剂，只要能充分溶解，对细胞的毒性又相对较小且保证其最终浓度低于千分之一就行。我在做MTT时用的助溶剂是丙酮，我想咱们平常常见的有机溶剂都行吧！！！
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DMSO在细胞培养夜中的浓度必须小于千分之一，也就是在1ml培养夜中最多有1微升DMSO
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那就是说用DMSO溶解的药物浓度受到一定局限了，对MTT细胞实验还是可行的?
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干吗一定要用DMSO助溶呢，DMSO不是要用在最后一步的显色中吗？这样岂不是对最终的结果有影响吗？建议换一种助溶剂，只要能充分溶解，对细胞的毒性又相对较小且保证其最终浓度低于千分之一就行。我在做MTT时用的助溶剂是丙酮，我想咱们平常常见的有机溶剂都行吧！！！
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讨论和争论都是本版所提倡的！鼓励！
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hdhdhd0000您好！我有一个问题 想请教您，我在溶解在现在要做的药物时，因这种药是非水溶性的，要用DMSO，但我用DMSO溶解该药物后一加到培养基就出现絮状沉淀，我试了好多次都同样的结果，因我是做体外细胞实验，不能用其他的助溶剂，但现在这样实验也没办法进行，我该怎么办呢？我又不能放弃我的实验，老板要我想办法。
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呵呵，把难题抛给我了！这方面的内容俺不懂，请哪位帮忙，并请其它版主转移1分给应助战友以资鼓励！谢谢！
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我的试验也遇到这个问题，明明用DMSO溶了，一加入培养液马上就会析出絮状沉淀，很是头疼，哪位高手知道该怎么解决啊？
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出现絮状沉淀应该是血清的问题，建议在加药时减少血清用量，有资料显示在加药处理时减少血清用量可以加快细胞出现反应，不过这一切要在不影响细胞生长，或者是药物处理时间比较短的情况下。资料说血清会结合部分药物。
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我是用DMSO溶后加入无血清培养基的，我也试过加入蒸馏水，但也同样的结果。好头痛哦，没办法解决，哪位高手能帮一帮哦
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过滤一下撒
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药物都起反应了，过滤有什么用哦
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我觉得出现絮状沉淀是因为DMSO溶解后的药物加到培养液中后，其溶解度发生了改变，溶解的药物重新析出而产生的。我以前也碰到这样的情况，在细胞培养允许的条件下可以适当增加DMSO的用量试试看吧，还可以换一种助溶剂，可以试试乙醇，即可以溶解非水溶性物质，又可以溶于水。希望对你的实验有帮助！
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非常感谢********na9719，不过如果用乙醇，对培养细胞影响很大，乙醇本身就是一种细胞的固定液，所以只能用DMSO。不想请教一下********na9719，你当时出现这种情况后是如何解决的？ 能否相告？谢谢！
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不一定吧，我看见有的文献就是用乙醇溶解的药物啊，好像还要过滤一下的
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不能用乙醇吗？乙醇作为细胞固定液浓度是70％，那做助溶剂时终浓度小于千分之一也不行吗？
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将你的药物用DMSO配成200倍的母液，用时先在试管里用培养液稀释到你要的浓度，然后再加入96孔板，应该没有问题的，其中的DMSO对细胞生长也没有影响（我试过的！）。祝你成功！
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我是先用DMSO溶解了，但当我要用培养基配制成各种浓度的时候，溶解在DMSO的药物一加到用培养基就出现沉淀了，根本就没办法配制成各种浓度了，更谈不上加到96孔板上了，我也试过用乙醇，也不行。
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请问你的药物在DMSO中完全溶解了吗？你可以把产生沉淀的溶液放在显微镜下看一看，如果溶解不完全就会看到结晶，这样就会发生沉淀。建议如下：
1.将配药所用的DMSO上磅高压蒸汽灭菌，配药前预热至37度
2.将稀释药物所用的培养基也预热至37度，在超净台中操作时，房间需
3.如果仍然有沉淀出现，可用磁力搅拌器混匀，过滤除菌后再用。
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JIEYAN 请问你的药物在DMSO中完全溶解了吗？你可以把产生沉淀的溶液放在显微镜下看一看，如果溶解不完全就会看到结晶，这样就会发生沉淀。建议如下：
1.将配药所用的DMSO上磅高压蒸汽灭菌，配药前预热至37度
2.将稀释药物所用的培养基也预热至37度，在超净台中操作时，房间需
3.如果仍然有沉淀出现，可用磁力搅拌器混匀，过滤除菌后再用。经过1，2步处理后仍有沉淀的话，药物溶解肯定是不完全的，所加药量就不准确了
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建议用吐温80作溶剂试一试，不过用量不要超过千分之一。
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这个问题的反映那么的强烈，我下一步的实验也将回涉及到同样的情况，到底有没有好的解决办法呢？我顺便问一个MTT的问题，MTT用什么来溶解后使用呢？做MTT实验时要求加入MTT 10ul,但我不知道MTT母液的配制方法，包括浓度等。谢谢。
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oceanzt 这个问题的反映那么的强烈，我下一步的实验也将回涉及到同样的情况，到底有没有好的解决办法呢？我顺便问一个MTT的问题，MTT用什么来溶解后使用呢？做MTT实验时要求加入MTT 10ul,但我不知道MTT母液的配制方法，包括浓度等。谢谢。MTT用PBS溶解，母液配制方法：称取250mgMTT,放入小烧杯中，加50mlPBS（0.01mol/L,PH7.4）,在磁力搅拌机上搅拌30min，用0.22um的微孔滤膜除菌，分装，4度保存，两周内有效。使用时，96板中每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20ul，根据你的试验要求适当调整母液浓度。
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谢谢sonia1024的解答，我还有一个疑问，我看过的用MTT做细胞毒实验时都是加10ulMTT，你给的是20ul。这是怎么回事？
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我现在做的就是药物必须用DMSO或者乙醇溶解，我选择的是DMSO。刚开始也出现你说的情况，后来在老师指点下，用DMSO溶解药物配成较大浓度的母液（如0.1M，称取0.1mmol药物溶于1ml DMSO中），-20度保存。用时用1640稀释（例如需要药物浓度为100 uM，就是稀释母液1000倍），然后立即吹打混匀。在稀释那么多倍情况下是不会出现沉淀的！！！MTT做的也很好。当然对照组也要用含DMSO的1640。MTT配法：一般MTT加到96孔板上终浓度为0.5mg/ml。如果加180 ul培养液，那就加20 ul MTT（5mg/ml）。如果配成10mg/ml MTT那就按加10 ul和190 ul 1640。
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goldenphoenix edited on
DMSO本身对细胞有毒害作用，细菌一般不会生长，可以说是无菌的。所以用1640稀释母液，不必另外除菌，一般没问题，我一直在做。
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那PH 7.4 浓度为0.01mol/L的PBS缓冲液配方是什么？一定要用这种指标的PBS缓冲液吗？
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我明白了，谢谢goldenphoenix。
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DMSO、乙醇、丙酮、Tween80都有人用过，这个没问题。问题的关键是：1. 助溶剂的选择：依据不同的药物自行选择助溶剂，一般没有特殊要求，不过最为常用的还是DMSO、乙醇。2. 药物溶液中的浓度比：在保证对细胞无损伤的情况下，尽量的大，但具体是多少，需要实验来摸，这个问题可通过设置助溶剂组的对照来解决。另外，MTT的量的多少，是10还是20，要根据种板的细胞数量来定，适当调整。
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配好的药过滤时，由于分子量大，有效成分都被损失了怎么办？能不能不过滤，送到高压蒸汽锅里消毒？我的药是天然化合物，分子量有336左右，多高温度消比较合适？请指教，多谢
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出现沉淀是因为你溶解在DMSO内的药物碰到培养液又析出来了，可以换一个溶解剂如乙醇，我以前用的药物有乙醇也有DMSO，只要不超过千分之五就应该没有问题。最重要的是你配的药物原液浓度不能太高，最好在0.0004mol/L以上，如果超过这个浓度加入到培养液中很容易出现沉淀的。
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既然有资料显示：DMSO不生长细菌，考虑到难以过滤，而且用DMSO溶解的药物高温消毒有限制，所以呢我们直接用没有过滤的DMSO溶解药物，直接加到培养液中，做下一步实验！目前的实验数据来看，没有出现污染，数据相对比较稳定！经验之谈，谨供参考！
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丁香园荣誉版主
我现在也面临同样的问题.
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我也是同样的问题，快烦死了，用乙醇溶解应该会浓度不对吧？？因为会挥发啊。。。药物稀释之后不溶解，过滤之后的浓度不也就不准确了吗？？？
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goldenphoenix 我现在做的就是药物必须用DMSO或者乙醇溶解，我选择的是DMSO。刚开始也出现你说的情况，后来在老师指点下，用DMSO溶解药物配成较大浓度的母液（如0.1M，称取0.1mmol药物溶于1ml DMSO中），-20度保存。用时用1640稀释（例如需要药物浓度为100 uM，就是稀释母液1000倍），然后立即吹打混匀。在稀释那么多倍情况下是不会出现沉淀的！！！MTT做的也很好。当然对照组也要用含DMSO的1640。MTT配法：一般MTT加到96孔板上终浓度为0.5mg/ml。如果加180 ul培养液，那就加20 ul MTT（5mg/ml）。如果配成10mg/ml MTT那就按加10 ul和190 ul 1640。您好，我的药就是用DMSO溶的非常好，但只要加入1640或者无菌水都会出现絮状浑浊，我尝试过将溶好药的DMSO缓慢加入1640，但是也还是会浑浊，看了您的方法感觉可行，但是有点没算懂，我前期算的药物母液浓度是0.6mg/ml（药物溶于DMSO后用1640稀释，DMSO终浓度不超过千分之五），那么按您的说法我应该配多少药溶在多少DMSO中备用呢？希望您能帮忙解答一下，非常感谢
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