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人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
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联&系&人：欧阳明 经理
企业经济性质：私营有限责任公司
所&在&地&址：上海上海
详&细&地&址：上海市闵行区庙泾路66号
上次登录时间：日
产品详细说明
Ek-Bioscience/进口品牌
人组织、血清、血浆、及相关液体样本
定量/定性检测
检测方法：
酶联免疫吸附法（ELISA)
【产品名称】：
人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
【适用物种】：Human(人）
【检测样本】：人组织、血清、血浆、及相关液体样本
【检测方 法】：酶联免疫吸附法（ELISA)
【品 牌】 : Ek-Bioscience/
【规格】 : 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
【价格】 ：800-2680元（以询价为准）
【产 地】 ：China/USA
【基本原理】：
人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
ELISA检测的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
【实验准备】：
人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
试剂盒及待测样本
2. 酶标仪(450nm波长滤光片)
3. 高精度移液器，EP管及一次性吸头
4. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
【标本要求】：
人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（转/
分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（转/
分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
用无菌管收集。离心20分钟左右（转/
分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（转/
分）。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml
左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（转/
分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4
），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（转/
分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
【试剂盒组成】：
人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
96T/Kit (8*12 strips)
30倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶
酶标包被板 12孔× 8 条
酶标试剂 6ml× 1 瓶
样品稀释液 6ml× 1 瓶
显色剂A 液 6ml× 1 瓶
显色剂B 液 6ml× 1/ 瓶
终止液 6ml
标准品 0.5ml
标准品稀释液 1.5ml× 1 瓶
说明书 1份
封板膜 2片（96 ）
密封袋 1个
48T/Kit (8*6 strips)
20倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶
酶标包被板 12孔×4条
酶标试剂 3ml×1 瓶
样品稀释液 3ml×1 瓶
显色剂A 液 3ml×1 瓶
显色剂B 液 3ml×1/ 瓶
终止液 3ml
标准品 0.5ml
标准品稀释液 1.5ml× 1 瓶
说明书 1份
封板膜 2片（48）
密封袋 1个
【操作步骤】：
人血浆抗凝蛋白S(PS) ELISA 试剂盒
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产品详细介绍
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猪饥饿激素(GHRL) ELISA试剂盒
本试剂盒仅供研究使用
&检测范围：欢迎QQ或电话或邮箱索取原版说明书
最低检测限：欢迎QQ或电话或邮箱索取原版说明书
特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
1．试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频繁使用时)。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.&&&&&&&& 酶联板(Assay plate )：一块(96孔)。
2.&&&&&&&& 标准品(Standard)：2瓶(冻干品)。
3.&&&&&&&& 样品稀释液(Sample Diluent)：1&20ml/瓶。
4.&&&&&&&& 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent)：1&10ml/瓶。
5.&&&&&&&& 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent)：1&10ml/瓶。
6.&&&&&&&& 生物素标记抗体(Biotin-antibody)：1&120&l/瓶(1：100)
7.&&&&&&&& 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin)：1&120&l/瓶(1：100)
8.&&&&&&&& 底物溶液(TMB Substrate)：1&10ml/瓶。
9.&&&&&&&& 浓洗涤液(Wash Buffer)：1&20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.&&&& 终止液(Stop Solution)：1&10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
1.&&&&&&&& 标准规格酶标仪
2.&&&&&&&& 高速离心机
3.&&&&&&&& 电热恒温培养箱
4.&&&&&&&& 干净的试管和Eppendof管
5.&&&&&&&& 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6.&&& 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1.&&&&&&&& 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.&&&&&&&& 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8& C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.&&&&&&&& 细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了&N&倍，标本的浓度应再乘以&N&。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为300 pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/ml，临用前15分钟内配制。
如配制150 pg/ml标准品：取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100&l)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10&l生物素标记抗体加990&l生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100&l)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10&l辣根过氧化物酶标记亲和素加990&l辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.&&&&&&&& 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100&l，余孔分别加标准品或待测样品100&l，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.&&&&&&&& 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100&l(取1&l生物素标记抗体加99&l生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)，37℃,60分钟。
3.&&&&&&&& 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350&l/每孔，甩干。
4.&&&&&&&& 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100&l，37℃，60分钟。
5.&&&&&&&& 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次
，每次浸泡1-2分钟，350&l/每孔，甩干。
6.&&&&&&&&&依序每孔加底物溶液90&l，37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。
7.&&&&&&&&&依序每孔加终止溶液50&l，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.&&&&&&&&&用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。&在加终止液后15分钟以内进行检测。
1.&用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.&每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N&H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
3.&为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.&未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.&建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
1.&当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.&洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.&一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.&请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5.&如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6.&在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.&底物请避光保存。
8.&不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
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