维普资讯 第 ２卷 第 １ ４ 期　２０ ０ ５年 ２月　华中农业大学学报　Ｖｏ． ４ Ｎ
ｏ １ １２　 ．　 Ｆ ｂ ０ ５ ４ ～ ４　 ｅ ．２ ０ ． ３ ８Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨｕ ｚ ｏ ｇ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒｌＵｎｖ ｒｉｙ ｏ ｒ ａ ｏ　 ａ ｈ ｎ 　 ｒｃ ｌｕ ａ　 ｉｅ ｓｌ　 　解磷 解 钾 自生 固氮菌 的分离 筛选及 鉴定　蒋 宝贵 赵 斌 一　（ 中农 业大 学农 业微生物 国家重点 实验 室 ， 汉 ４ ０ ７ ） 华 武 ３ ０ ０　摘要从华 中农业大学农 场试验 田不 同土 壤 中分离 到一 系列解 磷 、 钾及 自生 固氮 菌 ， 比较 筛 选得到 １ 解 经 　组菌 株 Ｐ０ 、Ｏ 、 Ｚ ３Ｎ ０ ， Ｊ７Ｐ １Ｈ ０ 、 Ｙ ３ 它们分别具 有较 强的降 解难 溶态 的磷 、 分解 有 机磷 、 降解 难 溶态 的 钾和 固定 空 　 气 中游 离态 氮 的 能 力。各 菌 株 经 鉴 定 分别 属 于 或 接 近假 单 胞 菌 属 （ ｓ ｄ ｍ ｎｓ、 Ｐｅ ｏ ｏａ ） 巨大 芽 孢 杆 菌 （ ａｉｕ ｕ Ｂ ｅｌｓ ｌ 　ｆｅ ａｅｉｍ） 胶质 芽孢 杆菌 （ ａ ｉ ｕ ＩＵｉ ｇ ｎ ｓｓ 和圆褐 固氮菌 （ ｏｏａｔｒ ｈｏｏｃｍ） ｕ ｔｒｕ 、 ｇ Ｂ ｃｌ ｓｉ Ｃｌ ｉｏｕ ） ｌ ｌ ａ Ａｚｔｂ ｛ 　 ｒｃｃｕ 。统 计学 分析表 明　 ｅｃ由各菌 株组成 的复合菌 剂在玉米盆 栽试验 中可 显著增加作 物的总生物 量。 　 关键词 解 磷细菌 ； 解钾 细菌 ；自生 固氮菌 ； 选与鉴定　 筛Ｓ １４ ３　１ 　５ ． ８ 　 中图法分 类号农作物生产不仅要求高产 、 稳产 ， 而且要求品质　优 良。长期以来 ， 了确保农产品的高产丰收 ， 为 人们　十分不利于农业 的可持续发展 。微生物肥料 由于具　１ 材料 与方 法　采 自华 中农业大学农场试验 田的菜 园土 、 田 稻 　大量使用化学肥料和农药 ， 使得生态环境每况愈下 ， １１ 土 壤样 品 的 采集　 　 ． 　 有增加土壤生物多样性 、 改善农产品品质 、 能够 自我　 土 、 未耕作的红壤土 、 磷钾肥试验 田土。 　更新增殖和永续利用 的特性 ， 其发展始终 为人们 所　 １ 　 细 菌 的分 离 和筛选　 ． ２关注 。微生物肥料是指应用于植物或土壤环境 中有　 １解磷细菌的分离筛选 。在不含磷的基础培养　 ） 生物活性 ， 起肥料 效应的 、 以肥料方法施用 的， 　 基中添加一定量的难溶性 的磷酸盐作为唯一磷源的　 或 以 微生物活性生物体或其代谢产物为主要作用因子的　 选 择 性 培 养 基　 ， 试 验 选 用 的 是 Ｃ ＨＰ 　 ］本 ａ Ｏ、 　生物制剂或肥料制 品 ］ 　 。微 生物肥料种类繁 多， Ｃ 。Ｐ 　ｚ 按　 ａ（ Ｏ ） 。将不同的土壤样 品作 系列梯度稀释后　照微生物 的作用机理 可分为根瘤菌肥料 、 自生 固氮　 涂平板 ， 根据解磷圈 的大小挑取单菌落作为初筛 的 　 菌肥料 、 解磷细菌肥 料 、 钾细菌肥料 、 生菌肥料　 结果 。然后在不含磷的基础培养基５ 中添加一定量　 解 抗 ］ 和复合微生物肥料　】 。解磷细菌 由于其可以分解土　 的磷矿粉制成液体培养基 ，５　 　 ２０ｍＩ三角瓶每瓶装液　 壤 中的难溶磷矿物 ， 释放 出其 中的磷或 者是分解土　 １０ｍ 　再添加磷矿粉 ０ ５ｇ 接种初筛菌株 ，８ 　 ０　 Ｉ ， ．　 ， ２℃ 壤 中的有 机 质 ， 有 机 磷 变 为 植 物 可 以 吸 收 利 用 的　 １０ｒｍｉ 将 ８　／ ｎ培养 ７ｄ 钼锑抗 比色法　 测发 酵液 中可　 　， 无机磷 ， 从而为作物提供 有效磷素 。解钾细菌多是　 溶性磷的含量 。在卵磷脂培养基上降解有机磷的菌　 硅酸盐细菌 ， 它能分解硅 酸盐类矿 物并 释放出钾等　 株可以把卵磷脂 大分子降解为小分子， 产生脂肪 ， 形　 元素供植物利用 ， 同时它也有 固氮 、 解磷功能。固氮　 成 不透 明 的溶 脂 圈 ， 以用 含 有 新 鲜 卵 黄 的 Ｉ 所 ． Ｂ培　 菌可 以将空气中的 Ｎ 还原为可 以被作物 吸收利用　 养基作为分解有机磷细菌的选择性培养基 ， 。 根据溶　 的 ＮＨ ’ 由于共生固氮菌有宿主专一性 ， 　。 ， 例如一定　 脂圈的大小筛选有机磷分解菌。 　 的根瘤菌只能用于一定 的豆科作 物　 以使用 范围　 ， 所‘ 　２ 解钾细菌的分离筛选。选用 阿须贝培养基和　 ）较窄 ， 自生固氮菌不受这些因素的限制 ， 而 其生产和　 钾细菌选择性培养基作 为筛选 培养基， 挑取在二者　 使用都很方便　 。本研究 主要是筛选和鉴定解磷细　 平板上都能生长的产荚 膜的光滑透明油滴状 菌落 。 】 　菌、 解钾细菌和 自生 固氮菌。 　收稿 口期 ：０ ４０ ― ｌ ２ ０ ―５２　然后在不含钾的基础培养基中加人钾长石矿粉制成　＊国家 自然科学 基金项 目（０７０ １资助　 ３ ２０ ２）＊＊ 通讯作 者， － ｉ ｂ ｚ ａ＠ｍａ ． ｚ ｕ ｅｕ ｃ Ｅｍａ ： ｉ ｈ ｏ ｌ ｎ ｉ ｈａ ． ｄ ． ｎ ｌ 　 蒋宝贵 ， ，９ ９ － 华中农业大学生 命科学 技术学 院硕 上 究生 ， 男 １７　 ￣， ｑ 研 武汉 ４ ０ ７　 ３００维普资讯 华 中 农 业 大 学 学 报　第 ２ 卷　 ｛ ｌ液体培养基　２０ｍ１三角瓶装液 １Ｏｍｌ 添加钾　 是 ＰＯ 在选择性平板上形 成的较大和非常明显的　 ５　 　 Ｏ　 　 ， Ｊ７左侧菌落是解有机磷菌株 Ｐ １ ０ 形成的 　 长石矿粉 ０５ ， ．　 接种初筛菌株，８ １０ｒｍｎ培　 解磷圈。图 ２ ｇ ２ ℃、８　 　 ／ 钼锑抗 比色法测含有磷矿　 养 ７ｄ原子吸收法　测发酵液中可溶性钾的含量。 溶脂圈。培养这些 菌株 ， 　， 　从图 ３ 以看 出， 可 菌　 ３ 自生固氮菌的分离筛选　 固氮酶能将乙炔还　 粉 的发酵液 中可溶性磷 的含量 ， ） Ｊ７和 ＰＯ Ｊ６与对照相 比增加 可溶性磷 量为　 原为乙烯 ， 因此用乙炔代替氮气， 通过气相色谱技术　 株 Ｐ０检测乙烯生成量即乙烯还原法来问接测定 固氮酶的 ９．　 和 ５．　 ． 有较 强 的分 解难 溶态 的无 机　 　 ５８ ｄ１ 具 其它菌株与不接菌种的对照相比可溶性　 固氮话性” 。本试验用单位重量的发酵液在单位时　 磷的能力， ］ 间内还原乙炔 ， 生成乙烯的物质 的量（ 微摩尔数） 磷含量反而有所下降　 来　表示　 以阿须贝培养基作为选择性培养基 。挑取在　阿须贝平板上能旺盛生长并能产生棕色 、 褐色或黑　 色色素的菌落。摇瓶培养上述 自生固氮菌菌株， 　 气 相色谱法测供试菌株的固氮酶活性， 选取固氮酶活 　 性高的菌株　 １ 菌株的鉴定　 ． ３１菌落菌体形态结构观察。分别在解磷细菌选　 ） 择性培养基 、 硅酸盐细菌选择性培养基和阿须贝培　 养基上观察解磷细菌、 细菌和 自生固氮菌菌落　 解钾 形态 ＋ 草兰氏染色后显微镜下观察菌体形态 ， 分别作　 荚膜 ． 芽孢和鞭毛特殊染色观察一 。 　　 ２生理生化鉴定。参照文献［ ］ ） ７进行以下试验 ： 　 唯一碳源试验、 唯一氮源试验 、 氧化酶试验、 接触酶　试验　 　 Ｈ ｓ试验 、 吲哚试验 、 柠檬酸盐试验、 糖醇发　 酵试验及细菌运动性观察、 石蕊牛乳试验 、 硝酸盐还　 原试验　 甲基红试验、 Ｐ试验 、 Ｖ 明胶液化试验 、 淀粉　水解试验、 脂酶（ ｗ ｅ８ ） 　 ｅｎ０ 试验、 Ｆ 无氮培养基生长试　 验、 卵磷脂酶试验。 　１ 菌剂的盆栽试验　 ． ４选取有机质较为丰富的菜园土作为供试土壤 ， 　将解磷细菌 Ｐ １Ｐ０ ， ０ 、Ｊ７解钾细菌 Ｈ ０ 和 自生固氮　 Ｚ３ 菌 Ｎ ０． Ｙ ３经摇瓶培养和固体发酵制成固体复合菌　 荆， 以市场上畅销的 ３ 种微生物肥做参照， 进行盆栽　 试验。设置 ５ 个处理． 处理 Ｉ 为加等量灭菌剂作为　圈 ２ 菌株 Ｐ Ｉ ０ 形成溶脂圈　Ｆｇ ２ Ｏｉｍｓ ｌｎ 　ｉ ｌ ｏｍ ｄ ｓａｎＰ １ ｉ 　 ｌ ｏｖ ｇｃｒｅｆ ｅ 　 ｔ ｉ Ｏ　 　 ｉ ｃ ｒ ｒ 　几对照 ， ２ 处理 为河北省某公司生产的微生物复合肥　 料， 处理 ３ 为本试验的复合微生物菌剂 ， 处理 ４ 为上　海某公司的微生物肥料 ， 处理 ５ 为北京某公司的微　 生物肥料。选用直径 １　ｍ 的 自皮花盆每盆装 土　 ４ｃ１ ｇ 每盆施用 １ ｇ固体菌剂， 　 ， ｋ ０ 　 均为与细土拌匀后　覆在土层上部 ， 种植玉 米， 每盆定植 ２ 生长期　 棵， ５　 ， ０ｄ烘干后测生物量（ 总重、 根重） 。 　２ ｉ 　 果与分析　２ 　解磷细菌的筛选结果　 ． １ 从不同土壤样 品中分离得到 １ 株菌株。圈 １ １ 　圈３解 细 分 磷 粉 的 溶 磷 量 磷 菌 解 矿 后 可 性 含　ｇ。 　 由　ｐ ｐ 　。　 。　 ｈ 。 。 ｐ ｎ。　 ｈ 。ｕ 　ｐ 　 Ｓ ｐ ｏ 　 ‘ ｅ　 　一山 ＿　 惦ｉ 。 ｄｙ 　 。 　 ｂ 。 嗍 　　 。维普资讯 第１ 期　蒋宝贵等： 解磷解钾 自 生固氮菌的分离筛选及鉴定 　２２ 解钾细菌筛选结果　 ． 在阿须贝培养基和解钾细菌选择性培养基上解　钾 细菌可 形成 透 明 的光滑 的 油滴 状 的 菌 落 ， 而且 随　ｇ＝ 　∞着培养时间的推移 ． 菌落颜色始终 不变， 这与许多文　 献和研究中描述的硅酸盐 细菌的特征一致 ， 采用此　方 法共得 到 ６株 菌株 。图 ４ ＨＺ ３在阿须 贝培 养　 是 ０基上形成的菌落。将这 ６ 株疑似具有解钾功能的细　菌接种在钾长石矿粉液体 培养基发酵 】 原子吸　 周，收法测得发酵液中可溶性钾含量（ ５为 Ｈ Ｏ 最　 图 ） Ｚ３ 高， 达到 ５．　ｇ＇ｇ ５９ｔ ／ 浓度 ， ￣ｍ 比对照（ １４ｉ ／ ｇ 多　 ２．　ｇ ｍ ） ￣ １１ ， 它 菌 株 与 对 照 相 比解 钾 能 力 也 多 出 ６ 　 其 　 ３．　 到 ９．　 不等， ４６ ３８ 经统计学分析表明差异具　有 显 著性 （ Ｐ＜００ ）　 ．５。 ２ ３ 自生 固氮 菌的 筛选结 果　 ． 在 阿须贝 培养 基上 自生 固氮 菌形 成 光滑半透 明　圈 ６ 菌株 Ｎ Ｏ 形成产 褐色色素的茸落　 Ｙ３Ｆｇ ６ ＢｒｗｎＣ ｎ ｏ＇ ｉ　 　 ｏ ． ｙｆｃ ￣ｏ ｍ￣ ｂ 　 ｔ ｉ　 Ｙ ３ ｙ Ｓ ｒ ｎＮ ０ 　 ａ粘稠并产生褐色色素的菌落， 初筛得到一系列这样　５ 【 ｇ　 ｕ 　 的菌株． ６ Ｎ ０ 形成 的菌落 。本 试验得到 ２ 图 是 Ｙ３ 　 ¨ 　 株固氮酶活很高的菌株 ， 它们是 ＮＹ ３ ＮＹ ２分　 ０和 ０， 别达到 ０ ４ ０ ３　 ｍ ｌ ｇ? 。这相 当于固氮酶　 ． ３、． ９Ｆ ｏ ／ ｈ 活性较高　。 　蝗苗罐匪 　害 ＾芍ｔ　 Ｉ棣 Ｓｒｉ 　ａ 　 Ｊｎｎ 　圈　　 固氟酶活的气相色谱测定结果　 ７ 几 　Ｆ ｇ ７ Ｒｅ Ｊｔｏ　＊ ． ａ ａｙ ｉ　ｆｎｔ ｇ ｎ ￣ 　 ｉ ＇　 ￣ Ｉ ｆ １Ｃ　ｎ ｌｓｓｏ　ｉｏ ｏ ａ 　 ｒ几 ＝＝ ＝　１　 ２ Ｔｏａ ｗｅ　ｈ　 ｔｌ ｛ 《 　 Ｒ ｏ ｅｇ ｌ ｏｔ　 １ｈ　 ｒ口 －　誊 　ｌ 　 　６黜 几　２ 　 ３ 　 ４ 　 ５ 　ｇ 　２ 　￡０ 　址．　 ｒ￣ －　 ０　ｒ－ｌ ｎ １ ，ｔ Ｉ １ 　圈 ８ 复 合菌剂的玉米盆 栽试验效果　 圈 ４ 解钾菌 Ｈ Ｇ　 成特有 的油滴状菌落　 Ｅ３Ｆｇ ４ Ｕ ｉｕ ｌ　 ｉｄｏ ｌ ｅｅ ｏ ｙ ｆｍ ｄｂ 　 ｉ　 　 ｎｑ ｅｙｏｌ ｒ ￣ ｉ 　ｏ ｎ 　 　 　ｙ ― ｋ ｆ ａ Ｐ ｌｓ ｉｎ ｒｄ ｃｉｇｂ ｃｅ ｉｍ　 ｏａ ｓＬ ｎ ｅ ｕ ｎ 　ａ ｌｒ ａ　 ｕ Ｆｇ ８ Ｐ ｔｐａ ｔｔｓ　ｆ０ 口ｅ ｉ ｏ ｌ ｔ ｉ　 　 ｏ　 ｌｎ ｅ ｔ 　　 Ｉ× ｎ ｕｏ 　 ｏ ｃ ｎ ｉ ｎ ｎｓ ｃｌ ｏ 　。ｌ ｎ ｏ －ｔ ｉｚ ｄ ９ ｉ 　 ｅ ｉ 　２ ４ 菌株的鉴定结果　 ．将具有较强功能的无机磷降解菌株 Ｐ２Ｐ０、 ０、Ｊ２　 Ｐ０ 和有机磷降解菌株 Ｐ １ Ｊ７ ０ 以及较强的钾矿粉降　 解菌株 Ｋ Ａ 、 Ｚ ３ 白生固氮菌 Ｎ ０ Ｃ ＣＨ ０和 Ｙ ３进行形　 态和生理生化鉴定 。表 １ 是各菌株 的革兰氏染色 、 　菌落和菌体形态特征 ， ２ 表 至表 ５ 菌株的生理生　 是 化特征　结果显示 ， 菌株 Ｎ ０ Ｙ ３细胞卵圆型， 直径　２ 　ｍ或更大， 但随着时间和生长条件的改变， 细胞　 形态会发生剧烈 的变化， 能短 到类 似球状 ， 细胞单　图 ５ 解钾细菌分解磷矿粉 后的可溶性钾含量　Ｆ ５ Ｓ ｌ ｂ 　ｏａｓ ｍ ｃ ｎ ｎ ｏ　Ｉ ｓｈ ｒｕ　 ｒ 　 咱 ＿ 　 ｏ ａ ｌ ｐ ｔ ｉ 　ｏ ｔ ｌ ｆ １ 口。０ｓｍｉ ｖ ｅ ｓｕ ｏ 　 ｐｏ ｅｐ ｗｄ ｒｄｓ ｏ￣ ｌ ｙＰ ｒ ： ｃｎ 　ａ ｔｒ 　 ｏ ｅ 　／ｓ 　￣：ｂ 　 －ｏ ｔ ／ ｂ ｃｅ ｉ Ｐ 　 Ｊ ｇ ａＣＫ　 ＫＣＡＣ　ｌＺＯＩ － ｈ 　Ｈ２ 　 ＨＺ０ 　 Ｈｚ０ 　 ： ０２ ３ ４ｌ Ｓｒｉ 　摊 ｔ ｎ ａ　个， 成对或不规则的堆状 ， 不形成芽孢， 但形成孢囊 ， 　 产生夹膜黏液， 革兰氏染色阴性 ， 一些菌株常产生水　溶性色素， 能利用硝态氮和氨态氯 ， 接触酶阳性。这　维普资讯 ４　 ６华 中 农 业 大 学 学 报　第２ ４卷　些特征与固氮菌属 （ ｚｔ ａｔｒ） Ａ ｏｏ ｃ ） 特征吻合 。从表　 和巨大芽孢 杆菌 （ 　ｉ ｕ　 ｅａｅｉｍ） 于 同一　 ｂ ｅ Ｂ ｌ ｓ ｇｔ ｕ 属 ｌ ｍ ｒ 菌株 Ｋ Ａ Ｈ ０ 与 Ｂ ｃ ｌｓ ｃ ａ － Ｃ Ｃ、 Ｚ ３ ａｉ ｕ　 ｉ ｇ　 ｌ ｍｕ ｌ ２看 出， Ｙ ３与 该 属 内 的模 式 菌 株 Ａｚｔ ａｔ 　 种 。同理 ， Ｎ ０ ｏ ｂｃ ｒ ｏ ｅｃ ｖｃｃｕ２ 圆褐 固 氮菌 ） 常 接 近ｌ ， 以菌 株　ｉｏｕ 属于 同 一种　 ， 表 ４ ｈｏｏｃ ｒ（ ｌ 非 ８所 ］ ｎｓｓ 见 。结 果 还 显示 ， 菌株　 Ｐ ２ Ｐ ０ 、 Ｊ７细 胞 单 个排 列 ， 的杆 菌， 小　 ０ 、 Ｊ２ Ｐ ０ 直 大 Ｎ ０ 可能与 Ａ ｏ ｂｃ ｒ ｈ ｏｏｃｍ 同种 。 Ｙ３ ｚ ｔ ａｔ 　 ｒｃｃｕ ｏ ｅｃ 　 菌株 Ｐ １和 Ｋ Ａ 、 Ｚ ３细 胞 呈 直 杆 状 ， （． ～１ ｆ ０ Ｃ Ｃ Ｈ ０ 　 ０５ ） ｍＸ（． ～４ ｆ 单 鞭毛或多鞭毛， １ ５ ）ｆ ｍ， 革　 （． ～２ ０ ｆ １０ ． ） ｍ×（ ～ １ ） ｍ， 以成对或链 状排　 兰氏阴性 ， ５ ０ ｆ 常 有机化能异养 ， 呼吸代谢 ， 不发酵， 接触酶　列 ， 圆端 ， 兰氏阳性 ， 具 革 有鞭 毛， 芽孢 椭 圆或 卵圆　 阳性这些特征与假单胞 菌属 （ ｓ ｄ ｍ ｎ ｓ的特征　 Ｐ ｅ ｏ ｏａ） ｕ 形， 好氧的化能异养菌 ， 触酶 阳性 ， 接 这些 特征与芽　 吻合 ， 假单胞菌属是个变化较大的菌属 ， 在分类上相　孢杆菌属 （ ａ ｉ ｕ） Ｂ ｃ ｌｓ 的特征 吻合 ， 以它 们都属 于　 距很 远 ， 有 的特 征不多 。从表 ４可 以看出 ， ｌ 所 共 菌株　 芽孢 杆 菌 属 （ ａｉｌｓ 。更 进 一 步 ， 菌 株 Ｐ １的　 Ｐ ２Ｐ ０ 、Ｊ ７ Ｂ ｃｌ ） ｕ 将 ０ ０ 、Ｊ ２Ｐ ０ 与假 单胞菌属 的特征最为接近　 ， ］ 　 特征与巨大芽孢杆菌（ ａｉ ｕ　 ｇ ｔ ｉｍ） Ｂ ｃ ｌｓ ａｅ ｕ 的描述　 对照检索表 ， 以断定菌株 Ｐ ２ Ｐ ０ 、Ｊ ７ ｌ ｍｅ ｒ 可 ｏ 、Ｊ２ Ｐ ０ 属于假　 相对照 ， 从菌落特征和革兰 氏染色及菌体形 态特征　 单胞菌属（ ｓｕ ｏ ｏａ ） Ｐ ｅｄ ｍ ｎ ｓ 。但是鉴定到种还有待进　 分析 ， 二者极为吻合 ， 从生理 生化特 征分析 ， 二者 也　 非常接近 ， 见表 ３ 。对照检索表 ， 以断定菌株 Ｐ １ 可 ０　一步 的 试验 。 　表 １ 格 兰 氏染色 、 　 菌落和菌体 形态特征　Ｔａ ｌ　　 Ｐｒ ｆｌ　 ｆｃ ｌｎ 　ｈ ｐ ｂｅ１ ｏ ｉ ｏ 　ｏｏ ｙ ｓ ａ ｅ．ｃｌ ｓ ｐ 　 ｎ Ｇｒ ｍ　ｍｉ ｎ 　 ｅ ｅｌ ｈ ｅ ａ ｄ 　ａ ａ ｓ ｍ ｇ菌株 Ｓｒｉ ｔ ｎ ａ　～ 、　特征 Ｃ ａａｔ ｓ ｈｒ ｅ 　 ｃｒ菌落 直径 ２ 　 ｍ， ～４ｍ 湿润 。 扁平 ， 缘不整齐 ， ｌ 边 ｆ色菌落 。Ｇ 细胞 里Ａ牛状 。．～２０ｆ 　， ｒ １Ｏ ．　ｍ×５ Ｏｆ 　 』 ～１　ｍ， 』 成对或链状 排列 ， 两端钝圆 ， 有芽孢 ， 芽他椭　 。 　Ｐ ２ 菌落直径 ｌ 　　 湿润 ， ０　 ～２ ｍ， ｎ 突起 ， 边缘 整齐 ， 黄色 菌落 。Ｇ ， 细胞里 短小 的杆状 ，．　＋ 　 『 　 个 、 ０５Ｊ ｌ』 ｌ ｍＸ ｍ， 成对或成堆排列 ， 芽孢 。 　 　 Ｐ０ 菌落直径 ｌ 　 Ｊ２ ～２ ｍｍ， 湿润 ， 突起 ， 边缘 整齐 ， 黄色菌落 。Ｇ 细胞 望短小 的杆状 ，．　ｍＸ１ＯＩ 单个 、 　， ０５ ｐ 　 　ｍ， ． ＊ 成对或成堆排列 ， 无芽孢 。 　 Ｐ０ Ｊ７菌落直径 ｌ 　 ｌ， 润 ， ～２ Ｔ　 ｍｌ 突起 ， 边缘 整齐 ， 黄色 菌落 。Ｇ一细胞里短小 的ｆ状 ，．　ｍＸｌ０ ， Ｊ ０５ ： ｆ 　＿　ｍ， 单个 、 成对或成堆排列 ， 无芽孢 。 　， 、 　 ，、菌落直径 ２ ５ｍｍ， －　 无色透 明， 边缘 整齐 ， 润 ， ｉ 娃 隆起 ， 枯稠 似汕滴 。Ｇ ， 细胞里　 ｆ状 ，． 』 　 『 『 １Ｏ『 ５』 ｍｘ ｍ左右 ， 单个或链状排列 ， 　产生很 大的英膜 ，－ １ 』 　 －２　ｍ， ５ Ｏ『 ｌ ０ ｍｘ ０ 行芽抱 。 　，　。菌落直径 ２ ５ｒＴ 无色透 明， 整齐 ， ， ， 似油滴 。Ｇ一， － 　 ｌ， ｎｉ 边缘 湿润 隆起 粘稠 细胞呈 Ａ　 状 ，．　ｍＸ５ ｍ左右 ， ｒ １ＯＩ 　 ｆ Ｌ 　 单个或链状排列 ， 　 产生很 大的英膜 ，～ １ 』 ５ ０『 ｍ×１－２　ｍ， ０ ０ 有芽孢 。 　……　菌落直径 ｌ 　 ｌ， ～２ Ｔ 半透明 ， ｍｌ 光滑粘 稠， 边缘 整齐 ， 后期产棕褐色色索 。Ｇ ， 大的椭倒细胞 ， 直径 １５ 　ｍ， ．～２ 　从杆 状到类球状 的多形态 ， 单个 、 成对或不规则的堆状 ， 胞囊 ， 　 不彤成 芽孢。 　表 ２ 菌株 Ｎ ０ Ｙ ３与 Ａ ｏｏ ａ ｔ 　ｈｏ ｏ￣ｍ 比较　 ｚ ｔ ｃｅ ｃ ｒｃｃ ｂ ｒ ｍＴ ｂｅ ２ Ｃｏ ａ ｉｏ 　 ｅｗｅ ｎｓｒ ｉ　 ａ ｌ　 　 ｍｐ ｒｓ ｎ ｂ ｔ ｅ 　ｔａｎ ＮＹ０ 　ｎ 　 ３ａｄ表 ３ 菌株 Ｐ １ Ｂ． ｇ ｌｒ ｒ 　 ０与 ｍｅ ａｅｉ ｎ的生理 生化特征比较　 ｕＴａｂ 　　 Ｐｈ ｓｏｏ ｉａ　 ｒ ｆｌ　 ｆｓｒ ｉ　 Ｏ１ａ ｄ Ｅ　 ｇ ｔｒｕｍ　 ｌ ３ ｅ ｙｉｌｇｃ ｌｐ ｏ ｉ ｏ 　ｔａｎ Ｐ 　 ｎ 　 ｍｅ ａ ｅｉ ｅＡｚ ｔｂ ｃｅ ｈｒ￣ ￣ ／ｔ ｏ ｏ ａ ｔ ｒｃ ｏ ｏ ｃｕｌ 　特 征 Ｃ ａｔ ｓ ｈｃ ｒ ｅ　Ｐ Ｉ Ｂ ｍ ｇｔ ｉ 　 Ｏ　 ． ｅ ａｅ ｕ ｒｍ细胞形态 Ｃ ｌｓａ ｅ ｅ　 ｈｐ　 ｌ杆 到卵圆到类球　 短机轩到 卵圆 　细菌直径 Ｃ ｌｄ ｍ ｔ ／ ｍ ｅ　ｉ ｅ ｒｌ 　 ｌａ ｅ ｚ老菌落 产色素 　Ｃ　 ｌｒｏｆｃ ｌｎｅ 　 ｏｒｏ　 　ｏｏ ｉｓ１５ ２０ ． － ．　棕黑　～ …’ 　≥ ｌ５ ．　 ＿ ～２０黑色‘ 　 …利用淀粉 ， 醇 ， 甘露 有机酸　Ｕｓ ｆＣａ ｂ ｈｙ ｒ ｔｓ ｅ。　 ｒ ｏ ｄ ａｃ 　＋　＋　运动 Ｍｏｉｎ ｔ 　 ｏ 形成孢囊 Ｃｙ ｔ ｒｄ ｃｉｎ ｓ　 ｏ ｕ ｔ 　 ｐ ｏ＋　 ＋　十 　＋　 ＋　十 　产 生 荚 膜 Ｃ ｐｕｅｐｏｕ一 ａｓｌ ｒ ｃ 　 ｄ 　接 触酶 Ｃ ｔｌ ｅ ａａ ｓ ａ　 ＋　 ＋ 　维普资讯 第 ｌ 期　蒋宝贵等： 解磷解钾自 生固氪菌的分离筛选及鉴定　表 　 菌株 Ｐ ２Ｐｑ 、Ｊ７ Ｏ 、Ｊ３Ｐ０ 与假单胞菌属的特征的比较　Ｉ ‘ ｔａｌ Ｉ 曝 Ｐ ２ 叫｝ 　 ｒｉ 附 ｓ＿ ０　表 ４ 菌株 Ｋ Ａ 、Ｚ ３ 日 ｎ ｃｅ／ ｓｓ Ｃ ＯＨ ０ 与 ＇ ｉｇ，ｕ 的　 ￣／ ｃ ｏ 生理生化 特征 比较　Ｔａ ｌ　 （ ｂｅ４ 　ｍ∞ 　 ｅ＂ ｈ ｓｏ￣ ｉ ｌ ｈ ｅｙ ｅａ 　 ｌｐ ｙ ｉｌ ｅ 　 ￣ｌｔｐ 　 ｍＯ ｐ ｆｇ ｎ ｆ 　 Ⅲ　 ｄ ＫＣ ＡＣ．Ｈｚ ３ ａｌ　 　 ０ 　 Ｉ Ｂ． ｄｌ Ｊ ｅ５ Ｃｏ ａ ｉｏ 　 ｒｐ　 ＇ｆ 　　 ￣ｌ ｍｐ ｒｓｎ ０ Ｉ蹦 、． ０ ２　 ７∞ ｄ “ｄ ｍ ∞　 　 Ｄ＂图 ９ 玉米盆栽试验结果　Ｆｇ ９ Ｐ ｔ ｌｎ ｅ ｔｏ ｎ 　 ａＩ ｍａｚ 　 ｉ　 　 ｏ　 ａ ｔｔｓ　ｆｉＯ ｐ １ 帕 ｉ ￣从左至右依次为处理 ５（ 京集擞　 物趟刺’处理 ３（ 北 ＝ 　 率试验　州） ｊ ｔ 对鼎； 　Ｂ 盛裁 整体生妊情况 ， 从左至矗依 趺为处理 ５（ 北京Ｉ微 生物 菌 ）处理　 ｆ． 微生物曲剂） ！ ｉ Ｉ 　 　 　 海　 ｊ 　 处理 ３（ 奉试验 复合毒　 物黹刑）处理 ２（ 菠 、 河北保定艇 扛 物落刺 ） 和处删 Ｉ对照） （ 　２ ５ 盆栽试 验结 果　 ．经统计学分析后的结果显示 （ 见表 ６ ， 有率　 ）加 试验复合菌剂的处理和北京的某微生物肥料的作物　 的生物总量与对照相 比， 分别增 加 １ 多和 ８　 ， 倍 ４ 　 其差异是极为显著的（ ＜００ ）见图 ８ ， Ｐ ． ５（ ）另外 ２ 个　 处理与对照相 比差异 不显著 （ ＞０ Ｏ ）本试验复　 Ｐ ．５ ，３ 讨论　在细菌分解磷矿粉能力试验中， 只有 ２ 比对　 株 照有显著的增加 ， 大部分接种 的发酵液的可溶性磷　含量与对照相比有所下降， 这个结果与前人的结果　 类似， 但这不能否定细菌的解磷能力， 这可从微生物　的解磷机制上进行解释， 微生物解磷机制一般认为 　 合菌剂与北京产微生物肥料相 比差异不显著， 　 与微生物分泌有机酸有关 。在培养过程中一开始由 说明 　本试验的复合菌剂与市场上畅销的产品相比要强于　 于微生物产酸导致磷古量有所增 加， 然后微生物细　 或至少已相当于市场上最好 的产品。 　胞可能改变他们的代谢机制 ， 释放有机代谢物于基　维普资讯 ４　 ８华 中 农 业 大 学 学 报　第 ２ 卷　 ４ｍｌ ｇ? ， 质中， 如乳酸 、 琥珀酸等 ， 可能形成有机磷化合物而　 ￣ ｏ／ ｈ 已经是相 当高的 了。由于共生 固氮菌　 降低溶液中的磷含量。在细菌的生长繁殖过程 中， 有宿主专一性 ， 　 例如一定的根瘤菌只能用于一定的　 有些细菌利用大量所溶解的磷 ， 将其转化为有机磷 ， 豆科作物 ， 　 所以使用范围较窄， 而自生固氮菌不受这　 另一些细菌则发生对分解出来的无机磷酸盐的奢侈　 些因素的限制 ， 其生产和使用都很方便 。 　 吸收， 在细胞内储藏大量 的无机磷酸盐 ， 以， 能 所 不 　 因为发 酵液 中磷含 量 低 于 不接 种 的对 照 ， 推 断此　 就 参　 考 文　 献　 菌株没有解磷能力［ 。有人认为解磷菌为了保证 自 ９ ］ 　 身的生长而大量的利用磷， 其结果是造成可溶性磷　 ｌ 葛 城． 　 微生物肥料的生产应ｊ及发展． Ｈ 北京 ： 中国农业科技出版　 含量的减少 ， 但大部分人还是认为磷浓度的增 加是　 社 ， ９ ６ １ ９　２ 由于细胞生长和裂解的不断循环累积起来的。 　 对于硅酸盐细菌分解钾长石矿粉的能力 ， 学术　 ３ 陈华癸． 土壤微生物学． 　 　 海科学技术出版社 ，９ ｌ ｝ 海： １８　陈廷伟． 微生物肥料生 产应用及发展． 京 ： Ｉ 业科技 出版　 北 ｌ国农 ｝社 ， ９６ １９　界一直存在不同的见解， 近年来很 多研究表明硅酸　 ４ 盐细菌能够分解象钾长石 、 云母等硅酸盐类的矿物， 　赵 斌， 何绍江． 微生物学实验． 北京 ： 科学出版社 ，０ ２ ２ ０　可以使难溶 于水的钾转化 为植物 吸收利用的有效　 ｌ９８６ 　 钾， 同时还能分解土壤中的无效磷成为有效磷 ， 并且　 ６ 中国土壤学会编． 　 土壤农业化学分析方法． 北京 ： 中国农业科技 出 　 有微弱的固氮能力【 。 ｌ。李阜棣认为硅酸盐细菌不　 版社 ，９ ９ 。 １９　 具有分解钾长石矿粉的能力｜ 。李风 汀等认为硅　 ７ 东秀珠． １ 州 常见细菌系统鉴定 手册． 北京 ： 科学出版社 ，０ ｌ ２０ 　 ８ 赵小蓉 ， 林启美． 细菌解磷能力测 定方法的研究． 生物学通报 ， 微 　 酸盐细菌有解钾能力 ， 并对农作物表现很好 的增产　 ０ ， ８（ ） ｌ 　 效果［ ， １ 最近盛下放 、 ¨ 黄为一等通过大量 的试验和　 ２ ０１ ２ １ ： ～ ４盆栽证明硅酸盐细菌破坏钾长石并释放出可利用的　 钾的能力是显著的ｌ 。本试验的结果是乐观的。 】 　 　９ 中国科学院微　 物研究所新们杰 氏细菌鉴定 手册翻译组泽． 伯杰　氏细菌鉴定＝ （ ８ ）北京 ： 于 第 版 ． ＝ 栅 科学 出版社 ，９ ４ １８　 ｌ 李阜棣． Ｏ 土壤微生物　 ． 北京 ： 】 － 喇农 业出版社 ，９６ ｛ １ ９　５ 许光辉 ， 郑洪光． 土壤微生物 分析方 法手册． 北京 ： 农业 出版 社， 　固氮是耗能的还原过 程， 通常每消耗 ｌ 　 ｇ碳水　 ｌ ｌ李风汀 ， 　 ， 则瑗等． 郝Ⅱ然 杨 硅酸盐细菌 ＨＭ８４ 泡株解钾作 用 ８ｌ 　的研究． 微生物　通报 ，９ ７ ２ （ ） ７～８　 ｌ９ ，， １ ：９ ｌ １化合物非共生地 固定大气中的氮气至少 １　 ｇ ０ｍ 。一　般来说 ， 生固氮菌的固氮能力不及共生固氮， 自 但对　 １ 盛下放 ， ２ 黄为一 ， 殷水购． 硅酸盐 菌剂 的应 用效果及解钾作用 的 　 南永 ２０ ，３ １：３ ６ 于 Ｎ Ｏ 和 Ｎ Ｏ， 别 达 到 ０ ３ 和 ０ ９ Ｙ３ Ｙ２ 分 ．４ ．３　 初步研究　 农业 大学学报 ，００ ２（）４￣４　Ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ａ ｄ Ｉ ｅ ｔｆ ａ ｉｎ ｏ 　ｈ 　 ｃ ｅ ｉｍ　 ｈ ｃ 　 ｖ 　 ｇ 　 ｆｃｅ ｃ 　 ｃ ｅ ｎ ｎ 　 ｎ 　 ｄ ｎ ｉ ｃ ｔｏ 　 ｆｔ ｅＢａ ｔｒｕ Ｗ ｉｈ Ｈａ ｅ Ｈｉｈ Ｅｆ ｉｎ ｙ ｉ ｉ ｏ 　 ｓ ｌｉ ｇ Ｐ ｏ ｐ ｏ ｕ 　 ｎ 　 ｏ ａ ｓ　 　 ｎ 　ｎ Ｎｉｒ ｇ ｎ Ｆ ｘ ｔｏ 　 ｎ Ｒｅ ｏ ｖｎ 　 ｈ ｓ ｈ ｒ ｓａ ｄ Ｐ ｔ ｓ ｉ ｍ ｕ ａ ｄ ｉ 　 ｔｏ ｅ 　 ｉ ａ ｉ ｎＪ ｎ 　 ａ ｇ ｉ Ｚ ａ　 ｉ ｉ ｇ Ｂ ｏ ｕ　 ｈ ｏＢｎ ａ 　（ ｔ ｎ ｌ ｙ Ｌ ｂ ｒｔｒ　ｆＡｇ ｉ ｌ ｒ ｌ ｃｏｉｌ ｙ， Ｎａ ｉ ａ　 　 ａ ｏａｏｙｏ 　 　 ｃ ｔ ａ　 ｒｂｏｏ 　 ｏ Ｋｅ ｒ ｕ ｕ Ｍｉ ｇＨ ｕ ｚ ｏ ｇ Ａｇｒｃ ｌ ｒ ｌＵｎｖ ｒ ｉ ａ ｈｎ　 ｉｕ ｔ ａ 　 ｉ ｅｓｔ ｕ ｙ，Ｗ ｕ ａ 　 ３ ０ ０ Ｃｈ ｎ ） ｈ ｎ ４ ０ ７ ， ｉａ 　Ａｂ ｔａ ｔ Ａ　ｅ ｉｓｏ　 ａ ｔ ｒｕ ｗｅ ｅｉｏａｅ 　 ｔ　ｈ 　ｕ ｃｉｎｏ 　ｅ ｏｖｎ 　 ｈ ｓ ｈ ｒ ｓａ ｄｐ ｔｓ ｉ ｓｒ ｃ　 ｓ ｒｅ　 ｆｂ ｃｅ ｉｍ　 ｒ　 ｌｔ ｄｗｉｈｔ ｅｆ ｎ ｔｏ 　 ｆ ｓ ｌｉｇｐ ｏ ｐ ｏ ｕ 　 ｎ 　ｏ ａ ｓ― ｓ ｒ 　ｕ ａ ｄ ｏ　 ｉｉｇ ｎ ｔｏ ｅ 　ｒ ｍ　 ｉｆｒ ｎ　 ｏ ｔ　 ｆｓ ｉ Ｃ ｍｐ ｒｎ 　ｈ ｉ ｆ ｎ ｔ ｎ ｆｏ ｅ ｃ 　 ｔ ｅ ，ｔ ｅ ｍ　 ｎ 　 ｆｆｘｎ 　 ｉｒｇ ｎ ｆｏ ｄ ｆｅｅ ｔｓ ｒｓ ｏ　 ｏｌ ｏ ａ ｉｇ ｔ ｅｒ ｕ ｃ ｉ 　 ｒ ｍ　 ａ ｈ ｏ ｈ ｒ ｈ 　 ． 　 ｏｓｒｉ　Ｊ ７ Ｐ １ ＨＺ ３ａ ｄＮＹ ３ｂ ａ　ｈ　 ｉｈ ｓ ｃｐ ｂｌ ｙｉ　ｉ ｏｖｎ 　ｈ ｓ ｈ ｒ ｅｐ ｗ ｅ，ｂｅｋｎ 　 ｔ ｎＰ ０ ， ０ ， ０　ｎ 　 ０　 ｅ ｒ ｅｈｇ ｅｔ ａ ａ ｉｔ　 ｄｓ ｌｉｇｐ ｏｐ ｏ ｉ 　ｏ ｄ ｒ ｒａ ｉｇ ａ ｔ 　 ｉ ｎ ｓ ｔｄ ｗｎ ｏ ｇ ｎｃ ｈ ｓ ｈ ｒ ｓ ｉｓ ｌ ｉｇ ｏ ａ ｓｕ ｏ 　 ｒａ ｉ 　ｐ ｏ ｐ ｏ ｕ ，ｄｓ ｏｖｎ 　ｐ ｔ ｓ ｉｍ　ｆｌ ｓ ｅ　ｐ ｗｄ ｒ ｎ 　ｎｔｏ ｅ 　ｆ ａ ｉｎ ｅｄ ｐ ｒ ｏ ｅ　ａ ｄ ｉ ｇ ｎ ｉ ｔ ｒ ｘ ｏ．Ｅａ ｈ ｃ 　ｗａ 　 ｑ ，ｉｅ ｔｆ ｄ ａ ｄ ｂ ｌｎ ｅ 　ｏｏ 　ａ ｉａ 　ｏ Ｐｓｕ ａ ｎ ｓ Ｂａ ｉｌ ｓ ｍｅ ａ ｅ ｉ ｍ ，Ｂａ ｉｌ ｓ ｍ ｕ ｉａ ｎ Ｓ Ｓ ｒ ｄ ｎ ｉ ｅ 　 ｎ 　 ｅｏ ｇ ｄｔ 　 ｒｆｍ ｌ ｒｔ 　 ｅ ｄ ｍｏ ａ ， ｃｌｕ ｌ ｉ ｇ ｔｒｕ ｃｌｕ ． ｃｌｇｉＯ Ｕ 　 　 ｏ．Ａｚ ｔｂ ｃｅ 　ｈ ｏ ｏ ｃ ｍ ． ｏｏ ａ ｔｒｃ ｒ ｃ ｃ ｕ 　Ｋｅ 　 ｒ ｓ ｂ ｃｅ ｉｍ　 ｆ ｉｓ ｌｉｇ ｐ ｏ ｐ ｏ ｉ ；ｂ ｃｅ ｉｍ　 ｆ ｉｓ ｌ ｉｇ ｐ ｔｓ ｉｍ　ｅｄ ｐ ｒ ａ ｔ ― ｙｗｏ ｄ 　 ａ ｔｒｕ ｏ 　 ｓ ｏ ｖｎ 　 ｈ ｓ ｈ ｒ ｅ ａ ｔｒｕ ｏ　 ｓ ｏｖｎ 　 ｏ ａ ｓｕ ｆｌｓ ｅ ；ｂ ｃｅ　 ｄ ｔ ｄｒｕ ０　 ｉ ｏ ｅ 　 ｉａｉｎ：ｓｒ ｅ ｉｇ ａ ｄ ｉｅ ｔｆ ａ ｉｎ ｉｍ　 ｆｎｔ ｇ ｎ ｆ ｔ ｒ ｘ ｏ ｃｅ ｎｎ 　 ｎ 　 ｎ ｉ ｃ ｔ 　 ｄ ｉ ｏ（ 责任编辑： 张志钰） 　
解磷解钾自生固氮菌的分离筛选及鉴定―是一个在线免费学习平台、通过收集整理大量专业知识，职业资料、考试资料,考试复习指导,试题资料等给大家分享;同时提供学习互动交流;更好的帮助大家学习。