考马斯亮蓝法 -
也称蓝染色法（coomassie&blue&staining）又称Bradford法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。考马斯-250（Coomassie&brilliant&blue&G-250）测定含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1&000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。原理蛋白质是生命活动的基础物质,是构成人体新生、维持人体健康的重要成分,它具有许多生物学功能;蛋白质作为人体最重要的营养素之一,它的分离与定性、定量分析是食品、药学和生命科学研究中经常涉及的重要内容,也是生物化学和其他生物学科、食品检验、生物药物分离提纯和质量检验中最重要的工作。目前食品中蛋白质含量的测量方法有紫外吸收法、全法、比色法、考马斯亮蓝法等。其中是测定粗蛋白质的经典方法,但由于样品中非蛋白质含氮化合物的干扰,使得测定结果不能完全反映被测样品中真实蛋白质的含量。考马斯亮蓝比色法是1976年由Bradford等人建立的一种测定微量蛋白质的方法,考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成的蓝色蛋白质染料复合物,在595nm处有最大吸光度,在一定的蛋白质浓度范围内,蛋白质染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝（Coomassie&Brilliant&Blue）法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰（）的位置，由465nm变为&595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对条带染色。
考马斯亮蓝法 -
实验材料2份生鲜牛乳，纯牛奶2份，、酸酸乳、优酸乳；考马斯亮蓝G-250，牛血清白蛋白；紫外可见分光光度计，电子分析天平。
标准蛋白溶液的配制:精确称取牛血清白蛋白100&mg,用定容至100mL,配成1.0mg/mol的标准溶液。考马斯亮蓝G-250溶液的配制:精确称取考马斯亮蓝G-250100mg,溶于50mL95%的乙醇,再加入120mL85%的磷酸,稀释定容至1000mL备用。实验流程该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1&95%乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。3．将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30rain。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．标准曲线6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。注意：考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合，反应快速，并且稳定，无法用普通试剂洗掉。待一两周左右，皮屑细胞自然衰落即可无碍。 未知样品蛋白质浓度测定测定方法同上，取合适的未知样品体积，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度（mg/mL）。
注意事项：在试剂加入后的5－20min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。测定中，蛋白－染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。 &实验结果结果计算公式样品蛋白质含量（mg/g鲜重）=式中C－查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg）；
V－提取液总体积（ml）；
a－测定所取提取液体积（ml）；
W－取样量（g）。&注意细节常见问题
（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
（3）干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。&缺点（1）由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。
（2）仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、&Triton&X-100、十二烷基硫酸钠（SDS）等。
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RT，避光100克 1公斤 公司其它产品：三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体，&Anti-ABCG2/BCRP/BXP-21（breast cancer resistance protein）&0.1ml抗ABC膜转运蛋白抗体，&Anti-ABCG4（ATP binding cassette, subfamily G member 4）&0.1mlABL1抗体，&Anti-ABL1（v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 1）&0.1mlABL2抗体，&Anti-ABL2/ARG（v-abl Abelson murine leukemia viral oncogene homolog 2）&0.1mlABI1/SSH3BP1蛋白抗体，&Anti-ABI1/SSH3BP1（Abelson interactor 1）&0.1ml雄激素结合蛋白抗体，&Anti-ABP（Androgen Binding Protein）&0.1ml血管紧张素转换酶抗体，&Anti-ACE1（ ACE, testis-specific isoform precursor）&0.1ml血管紧张素转换酶2抗体，&Anti-ACE2（Angiotensin converting enzyme 2）&0.1ml血管紧张素1转换酶抑制剂抗体，&Anti-ACEI （Angiotensin I Converting Enzyme Inhibitor ）&0.1ml肾上腺皮质发育异常蛋白抗体，&Anti-ACD/PTOP（Adrenocortical dysplasia protein）&0.1ml腺泡Acinus抗体，&Anti-Acinus （Apoptotic chromatin condensation Inducer in the nucleus）&0.1mlAck1抗体，&Anti-Ack1&0.1ml促肾上腺皮质激素（1-39）抗体，&Anti-ACTH （Adrenorticotrophin hormons 1-39）&0.1ml促肾上腺皮质激素（18-39）抗体，&Anti-ACTH （Adrenorticotrophin hormons 18-39）&0.1ml促肾上腺皮质激素（7-23）抗体，&Anti-ACTH （Adrenorticotrophin hormons 7-23）&0.1ml肌动蛋白&抗体，&Anti-Actin & /&-SMA （Actin alpha , smooth muscle aorta）&0.1ml&-辅肌动蛋白4抗体，&Anti-&-ACTN4（&-Actinin 4）&0.1mlF-肌动蛋白抗体，&Anti-F-Actin（filament actin）&0.1ml神经丝蛋白抗体，&Anti-AD7C-NTP/NTP/AF （Neurual thread protein）&0.1ml欢迎购买。温馨提示：另公司金牌代理国内外生化试剂，价格公道。我们对于顾客一年累计购买超万元的，将进行奖励客户活动，详情请咨询我们。公司主营：进口ELISA试剂盒、原装ELISA试剂盒、生化试剂、标准品、对照品、抗体、细胞、培养基等科研产品。&上海酶联检测技术有限公司
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考马斯亮蓝R250
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