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【求助】提组织RNA时，为何OD值总是小于1.8
我做了几例提取组织中RNA实验，每次测得的260/280都是小于1.8。不知是什么原因。也不知最后能否PCR出电泳条带。是不是有污染啊，还是降解了很可能是降解了，我最近也是在提RNA总是降解，有些细节还是要注意的原因是多方面的：1 有污染，从新提取，从各方面注意。2 我以前也遇到过比值很低的情况，其实是我们的仪器不太准，如果这样的话，低了也能用应该跑电泳看看。OD值小和降解与否无关。od值比较不仅与降解有关,也与RNA纯度有关,一般值比较低,说明不纯,有蛋白质污染,较高,则可能是有降解;另用DEPC水溶解也能使od值偏低;我没提取的RNA有时比值较低,但纯化后一般都能达到1.8以上,在1.9左右.1）检测RNA溶液的吸光度
280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.8-2.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是&2.2的）。当R&1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R&2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。2）RNA的电泳图谱一般的，RNA的电泳都是用变性胶进行的，但是根据我的经验，如果你仅仅是为了检测RNA的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的，用普通的琼脂糖胶就可以了。电泳的目的是在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNA smear的完整性。一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰），并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好的（见下图）。此主题相关图片如下：以上是我们常用的两种方法，但是这两种方法都无法明确的告诉我们RNA溶液中有没有残留的RNA酶。如果溶液中有非常微量的RNA酶，用以上方法我们很难察觉，但是大部分后续的酶学反应都是在37度以上并且是长时间进行的。这样，如果RNA溶液中有非常微量的RNA酶，那么在后续的实验中就会有非常适合的环境和时间发挥它们的作用了，当然这时你的实验也就完了。下面，我们介绍一个可以确认RNA溶液中有没有残留的RNA酶的方法。3）保温试验方法很简单的，按照样品浓度，从RNA溶液中吸取两份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的离心管中,并且用pH7.0的Tris缓冲液补充到10 ul的总体积，然后密闭管盖。把其中一份放入70℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。时间到了之后，取出两份样本进行电泳。电泳完成后，比较两者的电泳条带。如果两者的条带一致或者无明显差别（当然，它们的条带也要符合方法2中的条件），则说明RNA溶液中没有残留的RNA酶污染，RNA的质量很好。相反的，如果70℃保温的样本有明显的降解，则说明RNA溶液中有RNA酶污染（见下图）。此主题相关图片如下：如果你的RNA样本通过了保温实验的检测并且你在后续的实验中还是非常小心的防范RNA酶的骚扰，那么你的实验应该是很难失败了！祝实验顺利!!!把你的比色杯好好洗一下,泡在洗洁净里用棉签小心擦拭管壁,然后用双蒸水冲洗晾干,再比一次试试.可能有以下原因:1.匀浆时，样本太多，而抽提液使用量太小2.匀浆后，样本没有静置3.水相中可能有酚残留4.RNA沉淀溶解不充分5.测比值时，RNA溶解在DEPC水中，低的离子浓度和PH值增加了280nm的吸光值用TE稀释，用TE调0谢谢各位的指点。会不会是TRIZOL的问题了？我买的是韩国产的，价格很便宜。qxkillgre说: 检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。有错误吧!OD280指的是蛋白质的吸光度呀,OD260才是核酸的吸光度!小于1.8大多是蛋白污染，不大影响实验结果的分层后吸取上清液的时候不要贪心，离中间蛋白层还有段距离时就别吸了，用乙醇洗涤时多洗两遍。我也是出现这样的情况，做了一批标本，260/280都是1.1左右，电泳结果也不是太好，只吸取200ul上清液,每次乙醇洗两遍，也换了TRIZOL,沉淀在室温溶解大约有20分钟左右，我现在怀疑是不是我的样本问题。能说说你是什么材料吗？是不是多糖很多，或者开始的处理比较不得当？我选取的是大鼠的腹部脂肪组织，前几次先用液氮碾磨，再转移至冻存管加TRIZOL电动匀浆。这几次是液氮处理后没碾磨直接加TRIZOL电动匀浆的。结果都是一样。不知搂主使用的是TE缓冲液测OD吗，一般来讲如果使用DEPC处理水会使数值偏小的。如果使用TE缓冲液效果没有改善，有可能是有蛋白的污染。是不是因为大鼠的腹部脂肪组织富含甘油三脂和其他脂类，所以会存在干扰？而且脂肪组织的RNA更容易降解。液氮研磨的时候要舍得加液氮，转圈研磨的彻底一些，取样时尽量新鲜，要保存在液氮里。再就是脂类会比较轻，加入trizol震荡分层后，会不会有油样的东西票在上面阿？把这层去掉。用酒精洗涤的时候多洗两遍。如果跑电泳能看到条带，说明RNA提出量还比较多的话，可以减少处理的组织量。我使用的是人体的宫颈组织，匀浆器无法完全研磨成匀浆，我就用剪刀剪。这些都是在冰块上操作。不知这个步骤会不会影响OD值。应该不是DEPC水和检测仪器的问题，因为其他人用的也是这个，测出的OD值都不低。应该是研磨过程中降解了吧，为什么不用液氮呢？买液氮可以租个小液氮罐嘛，甚至可以免费使用，我们这里液氮才15元/L。用液氮的话，组织就会变得很脆，用研钵就可以研磨完全了，不过记得剪刀，研钵什么都要用锡箔纸包起来180度烘4小时以上以去除rnase。我们这边实验室里都是用的冰块，测出的OD值也不低呀。sorry,很糊涂我的概念搞错了。od值主要用来反映纯度，跑电泳用来反映rna的完整性。你的od值小，应该是RNA不纯，不知道OD260/230怎么样。你看看上面qxkillgre的回答吧组织能否完全研磨成匀浆是否也与比值有关？我的组织较硬，研杵研不碎，剪刀也不能完全剪成匀浆，所以每次总有一些微小的块状物。这是否会影响所提取RNA的质量了？当然会有影响了，没有完全研磨成粉末状，与trizol反应时怎么能接触完全呢？必然导致块状物里的RNAse起作用。还是用液氮吧，我以前做的是海参的肌腱，不光硬而且还很韧，但是用液氮一冻就变得特别脆，用研钵可以完全研磨成粉末状了，趁液氮还没挥发完毕就转移到trizol里取得了很好的质量。把异丙醇加大用量，再用乙醇多洗几次再看看。组织中RNA的量是多但是杂质也多。你可以试试！我们试过了很管用。请问一下，用乙醇多洗几次，每次洗完都要离心吗？请问fx1981 ：异丙醇加大到多少量？乙醇洗几次比较好了？
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&&相对定量-pcr，RNA，260/280大于2，是否可以继续做？
相对定量-pcr，RNA，260/280大于2，是否可以继续做？
如题，提出的RNA260/280在2-2.6之间是否可以用？
如果也有扩增曲线，是什么呢？
谢谢你！！那结果可以用吗！？我也能跑出来
不是说不能做，只是说有污染，RNA纯度不高而已，你不做阴性对照吗？就是拿未反转录的RNA做个PCR试试，如果跑出来说明有DNA，如果跑不出来，应该问题不大。你的结果看，还行埃
我跑了阴性对照！没有扩增曲线！
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请各位有经验的师兄师姐前来莅临指导，这是我跑的RNA电泳条带，不是说应该有三条带吗？我怎么只有两条呢？RNA质量怎么样啊？能用于反转录吗？我用博迈德植物EASYspin盒提的，后来用eppendorf photometer plus 测的浓度稀释两百倍后是1微克每毫升，但OD值不太正常，OD260/280&5，不应该是左右吗？什么原因造成的呢，我反转录后，第一次没P出来，第二次P出的条带很浅，而且好像不止一条条带，又有可能是什么原因呢？我做RT-PCR体系时，为了把模板浓度混匀，加之前用枪吹吸了几次，会不会把cDNA弄断了？反转录用的天根的FastQuant RT Kit，cDNA加了微升。还有这个到底怎么用的啊？RNA是不是要稀释，否则怎么够测的量啊？
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测RNA浓度的仪器
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RNA反转录后PCR电泳没有条带啊，做三次了，第二次有很淡几乎看不清的条带，到底是反转录成功没有啊？反转录成功容易吗？
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PCR P不出条带可能原因：1.引物设计不是好的，2.PCR反应体系（退火温度，PCR酶等），此外还取决于你要扩增的产物长度
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又P了2次，全都没有条带，是什么原因呢？急死了，求各位师兄师姐多多指导啊！~~[img][/img]
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PCR P不出条带可能原因：1.引物设计不是好的，2.PCR反应体系（退火温度，PCR酶等），此外还取决于你要扩增 ...
1.引物用过很多次，没问题；2.做10微升验证，55度，用的2*taq plus mastermix，产物片段1400bp左右。
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1.引物用过很多次，没问题；2.做10微升验证，55度，用的2*taq plus mastermix，产物片段1400bp左右。
如果引物没问题，用的酶也没问题的话（具有扩出1400bp条带的能力），结合你的RNA电泳图（只有5S降解），应该能反转出cDNA，但可能不完全，也要考虑你要扩增的gene在你收取的样本里是否高表达，也会影响你PCR的结果
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重提RNA看下啦
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重提RNA看下啦
重提了2次， 还是P不出来啊，是反转录有问题吗？还是什么原因呢？
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是不是会出现，你的目的片段正好被降解成多段这种可能？“第一次没P出来，第二次P出的条带很浅，而且好像不止一条条带”
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逛了这许久，何不进去瞧瞧？有人能详细帮我解释一下RNA的OD260/280和OD230/260的意思吗 - PCR实验 - 生物秀
标题: 有人能详细帮我解释一下RNA的OD260/280和OD230/260的意思吗
摘要: [有人能详细帮我解释一下RNA的OD260 280和OD230 260的意思吗] 有人能详细帮我解释一下RNA的OD260 280和OD230 260的意思吗！ 关键词:[]……
有人能详细帮我解释一下RNA的OD260/280和OD230/260的意思吗！
回复试这回答一下：抽提总RNA，紫外检测260nm和280nm下的光密度值(OD)，若OD260／OD280＞2，说明所提取RNA无蛋白质和DNA污染，0.7％糖凝胶电泳鉴定，可见清晰的18S和28S两条带型，说明RNA未降解。如果要获得高质量的RNA样品。有必要对RNA的质量进行严格的控制，建议既检测RNA的吸光度也进行RNA电泳检测。RNA样品的OD260/280的比例以大于1.8为宜；高质量RNA的电泳将有2条清晰的条带，分别代表28S与18SrRNA，同时28SrRNA的亮度应是18SrRNA的2倍左右至于：RNA，OD230/260没有听说过[回复试回答一下：230nm是RNA的吸收峰值260nm是的吸收峰值280nm是蛋白质的吸收峰值所以你可知道为什么有上述的比值了。回复A230 测定其它碳源物质，如酚，糖类等，A260 是核酸的吸收峰测 RNA 和 ，引物等的浓度用的， A280 是蛋白质的吸收峰。 A260/A280是检测核酸中有没有蛋白质污染，A230/A260 是检测核酸中有没有把酚去除干净，另外用TRIZOL 抽提 RNA时不能把糖类去除干净的，所以有时候也有必要测一下A230/A260 的比值。Nucleic Acid DeterminationThe absorption of 1 OD (A) is equivalent to, approximately: 50 ug/ml dsDNA, 37 ug/ml ssDNA, 40 ug/ml RNA or 30 ug/ml for oligonucleotides. The ratio A260/A280 is used to estimate the purity of nucleic acid, since proteins absorb at 280 nm. Pure DNA should have a ratio of approximately 1.8; pure RNA 2.0. Absorption at 230 nm reflects contamination of the sample by substances such as peptides, phenols, aromatic compounds or carbohydrates. In pure samples the ratio of A260/A230 should be approximately 2.2.回复2004年的，现在还是有这个问题，毫无进步啊。。。230的峰怎样去掉？回复尽量去除有机溶剂残留，我们会用纯乙醇洗一遍。回复尽量去除有机溶剂残留，我们会用纯乙醇洗一遍。
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电话：021-OD260与OD280比值的问题_百度文库
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OD260与OD280比值的问题
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