gst pulldown结果分析 down 目的蛋白结合不上是怎么一回事

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-12-29 01:53 标签： gst

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标准的pulldown结果分析-down分析需要带有重組亲和标签的纯化蛋白该标签具有“诱饵”的功能，并固定在标签特异性亲和配体上然后将另一种蛋白质或“猎物”蛋白质与“诱饵”蛋白质一起孵育。当这两种蛋白质发生物理相互作用时“猎物”蛋白质将被“诱饵”蛋白质捕获。之后取决于亲和配体，可以使用洗脱缓冲液洗脱相互作用的“猎物”蛋白最后，“猎物”和“诱饵”蛋白都可以通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离然後对凝胶染色通过蛋白质印迹法进行检测。

GST pulldown结果分析-down融合蛋白沉降技术利用基因重组将带有GST标签的载体插入到目标蛋白A上，谷胱甘肽包裹的磁珠与目标融合蛋白结合加入细胞裂解液后，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附加入过量的谷胱甘肽进行洗脱，洗脱后的样品通过质谱分析法对样品进行分析鉴定GST pulldown结果分析-down融合蛋白沉降技术蛋白相互作用分析主要是研究体外强烈或者稳定的蛋白质间相互作用；鈳以鉴定两种已知的感兴趣蛋白质可能存在的直接相互作用；寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知蛋白。

除了确认蛋白质之间的楿互作用外GST pulldown结果分析-down融合蛋白沉降技术蛋白互作分析法还可用于表征蛋白相互作用的条件。例如使用蛋白质结构域截短法进行pulldown结果分析-down法可以对蛋白质相互作用至关重要的功能区域进行确定。此外GST pulldown结果分析-down融合蛋白沉降技术蛋白相互作用分析法还可用于探索目的蛋白質相互作用的伴侣，将“诱饵”蛋白与混合蛋白溶液或细胞/组织提取物一起孵育洗涤步骤后，可以通过高通量方法洗脱并对结合的蛋白質进行质谱鉴定

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