慢病毒感染sb250病毒死亡Jurkat细胞后问什么会有部分细胞死亡

我想请问一下,为什么要用慢病毒感染细胞?不好意思,我的意思是 做这个实验为了什么?目的是什么?
虎虎生威瓜葱5
是这样的:慢病毒源于反转录病毒,但又有所不同.在感染能力方面比反转录病毒还强,可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞,又很少引发基因的免疫反应.如果您的实验需要长期稳定的基因表达或沉默,而目的细胞又很难转染,那慢病毒是您的最理想选择.野生型的HIV大小约为9.8kb,故插入片段一般在4-5kb左右,这对于大部分的实验来说应该够用了.具体可以看看这个链接:-----------------------------------------------目的:其实就是以 病毒为载体,转染细胞,让外源基因表达.
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成人感染了巨细胞病毒后有什么症状?如何检查?能够治愈吗?
成人感染了巨细胞病毒后有什么症状?如何检...
李主任,您好!请问成人感染了巨细胞病毒后有什么症状?如何检查?能够治愈吗?
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本病临床表现轻重不等,全身性巨细胞包涵体病主要发生于新生儿和幼婴期,如此时见到黄疸、肝脾肿大、皮肤瘀点、小头畸形、颅内钙化等,应注意与弓形体病、败血症、先天性胆道梗阻、乳儿肝炎、全身性单纯疱疹、先天性白血病、先天性风疹综合征等鉴别。智力低下,运动障碍、脑性瘫痪等症状一般在较大婴儿才能被发现。
  儿童期出现下列情况时,要考虑获得性巨细胞包涵体病的可能性:①不能以其他病因解释的慢性肝病或迁延性间质性肺炎;②临床类似传染性单核细胞增多症,但抗EB病毒衣壳抗原的嗜异凝集试验阴性,往往发生于手术(尤其开心手术)后接受大量新鲜血者;③接受免疫抑制剂治疗的慢性消耗性疾病患儿(如白血病、恶性肿瘤)、接受器官移植的受者,如发生较严重的肺炎,往往是CMV感染所致。
  遇到上述情况时,要进行病毒学和血清学检测才能明确诊断。
  大多CMV感染是不显性的。感染后的表现多种多样。有症状者分为两个类型:
  1、先天性感染 约10%患儿在出生后有明显症状,表现为肝脾肿大、持续性黄疸、皮肤瘀点、小头畸形、脉络膜视网膜炎、智力低下和运动障碍等。上述任何一项表现都可单独存在,并可伴有生长缓慢、烦躁、有时发热,体温自微热至40℃。但因出生时仅有一小部分患儿有临床症状,故多数不能确定诊断。如生后数月至数年才出现症状者,也可表现为听力丧失,轻度神经系统症状及发育障碍,以致影响学习。先天性巨细胞包涵体病患儿,可出现各种先天畸形,可有痉挛状态、两侧瘫痪、癫痫样抽搐、视神经萎缩、耳聋(约10%患儿发生耳聋),并可对细菌感染的敏感性增加。有的无症状先天性CMV感染的患儿,虽体格发育正常,仍可有先天畸形及听力损害,但其发生率和严重程度均低于有症状的患儿。
  2、获得性感染 本病为自限性疾病,临床表现一般较轻,虽然多数婴儿为亚临床感染,但其症状的发生率仍较成人为高,表现为肝、脾和淋巴结肿大、皮疹、支气管炎或肺炎等,也可出现肝炎。与先天性感染患儿不同者为神经系统极少被侵犯。儿童期感染常通过呼吸道获得,常为不显性,但成为长期带毒者,偶可出现迁延性肝炎或间质性肺炎。多次接受新鲜血液输血的患儿,也可发生此病,其表现可酷似传染性单核细胞增多症,但EB病毒衣壳抗原的嗜异凝集反应和IgM抗体始终阴性,也可引起溶血性贫血或感染性末梢神经炎。不显性CMV感染的激活常发生于各种因素使机体免疫力降低的情况下,可使潜在的病毒感染被激活而发病。这些因素包括妊娠、器官移植,应用免疫抑制剂或抗代谢药物、外科手术、巨血病、肿瘤等,可出现肺炎、肝炎视网膜炎。间质性肺炎是骨髓移植受者CMV感染最严重的后果,其发生率达40%,病死率达90%。AIDS患儿具有较高的CMV感染率,其特点是迁延的病毒血症,病情呈进行性发展,常为最常见的死因。
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一般是没有症状的,只有在检查时可以检查到的,建议积极抗病毒促进病毒代谢治疗
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指导意见:多数人一生中都感染过巨细胞病毒,但主要为无症状的亚临床感染。成人感染和免疫功能有很大关系,当免疫功能低下,抵抗力下降时,病毒就会复发。
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指导意见:你好,根据你的情况不同的疾病可产生相同的症状,建议你去医院详细检查,然后再对症治疗,祝你健康
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指导意见:你好,健康的成年人发生巨细胞病毒感染时多无明显的临床症状,部分患者可有与传染性单核细胞增多症相似的表现,症状为低热,乏力,咽痛,淋巴结肿大,关节肌肉酸痛 。
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指导意见:一般巨细胞病毒感染无症状者无需治疗。有症状者应根据临床表现给予相应的对症治疗和抗病毒治疗
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指导意见:建议注意个人卫生情况,尤其局部的清洁,生活规律,饮食清淡,多饮水,忌辛辣刺激性食物,及时到正规的医院做外生殖器分泌物,细菌培养等相关检查明确,根据检查结果遵医嘱配合治疗.
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指导意见:巨细胞具有传染性 一般是通过吸乳.接吻.性接触.输血等方式传染. 因此 仅仅是日常的玩耍 被传染的几率是很小的。
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指导意见:多数人一生中都感染过巨细胞病毒,但主要为无症状的亚临床感染。成人感染和免疫功能有很大关系,当免疫功能低下,抵抗力下降时,病毒就会复发。
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指导意见:您好;可以服用中药调理的,建议到具体看看中医大夫,中医治疗要由医生辩证进行,各人体质不同,用药也会有加减的。
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问成年人感染巨细胞病毒会有什么症状和...
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专长:糖尿病,女性体毛多症,甲状腺功能亢进症
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问题分析:你好,巨细胞病毒感染具体的症状主要表现为发热和疲乏。在发热1-2周后,血液中淋巴细胞绝对值增多,会有淋巴结的炎症等症状。意见建议:巨细胞病毒感染的治疗,可应用干扰素及转移因子等。可考虑用些清热解毒的中药制剂配合治疗,平时注意增强身体的抵抗能力,每天坚持适量的有氧运动。
问婚前体检时检查出来女方巨细胞病毒LGG阳性,巨细胞病毒LGG抗体阳性
职称:主治医师
专长:月经不调,排卵期出血,霉菌性阴道炎
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病情分析:您好,根据您的描述,出现巨细胞病毒LGG阳性,应该考虑是与以前流产有关,应该考虑是以前感染了巨细胞病毒,现在已经治愈,出现抗体,对以后怀孕应该影响不大,如果想怀孕,应该进行复查,进行巨细胞病毒LGM检查,如果是阴性,就可以考虑怀孕,以免引起流产的出现意见建议:及时进行检查,保持良好的心态,多吃营养丰富的食物,加强营养,养成良好的生活习惯,注意生理卫生,避免不洁性行为
问巨细胞病毒IgM抗体阳性是不是很可怕,是不是不冶之病。...
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专长:高血压、糖尿病、心血管疾病
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病情分析: 你好,巨细胞病毒(CMV)在人群中感染非常广泛,中国成人感染率达95%以上,通常呈隐性感染,多数感染者无临床症状,巨细胞抗体IgM代表近四个月感染巨细胞病毒。可通过吸乳、接吻、性接触、输血等感染、通常为亚临床型。妊娠母体CMV感染可通过胎盘侵袭胎儿引起先天性感染,少数造成早产、流产、死产或生后死亡。由于CMV感染患者大多处于潜伏感染状态;即使CMV在体内复制活动,也多为无症状性感染。目前又无有效、安全的抗CMV药物,故对CMV感染的治疗,仍限于症状性感染时的对症处理;意见建议:提高机体免疫机能及抗病能力,特别是育龄期妇女,以减少巨细胞病毒对胎儿的严重危害。
问什么是风疹病毒?什么是巨细胞病毒?
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专长:对不孕不育科的多发病、常见病、疑难病的诊断和治疗有丰富的临床经验。
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您好:巨细胞病毒是一种疱疹病毒组DNA病毒。风疹病毒属节肢介体病毒中的披盖病毒群,为风疹的病原病毒,这两项属于优生五项,感染了风疹病毒 巨细胞病毒等容易引起流产 胎儿发育畸形,临床上主要是以抗病毒治疗,建议您在医生指导下针对性治疗 祝您健康!G
问巨细胞病毒是什么?对宝宝有害吗?
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指导意见:您好:IGg阳性说明之前有过巨细胞病毒的感染,现在已经具有可字体免疫力,对现在的宝宝一般没有什么影响。
问巨细胞病毒会传染吗
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你好!可能传染的,主要是性接触传染,生活接触不会传染,需要及时治疗可以 得到控制的。
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评价成功!慢病毒介导WWOX基因过表达对Jurkat及K562白血病细胞生物学特性影响的实验研究--《福建医科大学》2012年硕士论文
慢病毒介导WWOX基因过表达对Jurkat及K562白血病细胞生物学特性影响的实验研究
【摘要】:目的:1.构建WWOX基因过表达慢病毒重组质粒载体并完成相关鉴定;2.研究上调WWOX基因对人Jurkat及K562白血病细胞生物学特性的影响;3.初步探讨其生物学特性改变的相关分子机制。
方法:1.通过PCR扩增获得目的基因WWOX全长cDNA片段,纯化后经Age I酶切消化。同时用Age I酶对载体质粒进行酶切、回收得到线性化载体片段。经T4噬菌体DNA连接酶作用将WWOX连接至线性化载体,连接产物经转化、涂板、挑取克隆、扩增培养后,用质粒小量抽提试剂盒提取质粒,酶切后PCR凝胶电泳鉴定连接产物,并行序列测定。将构建好的融合基因表达载体进行病毒颗粒包装,得到WWOX过表达慢病毒重组质粒载体系统(pGC-FU-WWOX-GFP和pGC-FU-GFP)。采用qPCR、Western blot等方法对重组载体进行鉴定。2.采用CCK-8比色、集落形成实验、DAPI染色、DNA片段电泳、Annexin V PE/7-AAD双荧光标记、Western blot等方法,研究上调WWOX对Jurkat和K562细胞生物学特性的影响。3.间接免疫荧光检测凋亡相关蛋白p53、p73、NF-κBp65及细胞色素C(Cytochrome C,Cyto C)等的表达及定位。qPCR、Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyto C、Caspase-9、Caspase-3、p53、p73及NF-κB p65等凋亡相关蛋白的表达变化。免疫共沉淀、Western blot检测WWOX与p73、p53之间的相互作用。
结果:1.测序鉴定结果与目标序列完全一致,包装后的慢病毒经qPCR测定滴度约为2×108TU/ml。2. WWOX重组慢病毒质粒感染Jurkat及K562细胞48h后,观察到GFP稳定表达。qPCR显示pGC-FU-WWOX组细胞WWOX在mRNA水平表达增加。Western blot检测到约72kD的融合蛋白(WWOX融合GFP)表达,随时间延长,融合蛋白表达呈增加趋势。CCK-8比色实验显示,Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组的细胞生长较两对照组明显受抑制(P<0.05)。集落形成实验表明,Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞集落形成率较两对照组显著降低(P=0.000)。DAPI染色显示,Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞核呈现Ⅱb晚期凋亡形态。DNA片段电泳显示,Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组出现明显的梯状降解条带,并随时间延长梯状条带生成更加明显。Annexin V PE/7-AAD双荧光染FCM检测显示,Jurkat和K562pGC-FU-WWOX组细胞48h、72h、96h的凋亡率明显高于其他两对照组(P<0.001),主要为凋亡中、晚期细胞。3.间接免疫荧光染色可见,Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组细胞Cyto C在胞质中呈弥散或粗块状分布,而p53、p73及NF-κB p65均定位于胞质,较对照组表达差异不明显。qPCR及Western blot显示,Jurkat和K562细胞中pGC-FU-WWOX组较其他两对照组Bcl-2表达呈下降趋势,Cyto C表达增加,同时两细胞均有Caspase-9和Caspase-3的剪接激活,而p53表达变化不明显。K562细胞中Bax表达呈上升趋势。免疫共沉淀后SDS-PAGE电泳染色显示,Jurkat和K562细胞pGC-FU-WWOX组均于约73~74kD处出现浓染的蛋白条带,而其他两对照组蛋白条带染色为阴性。蛋白印迹在两种细胞的pGC-FU-WWOX组均检测到p73及WWOX的表达,而未检测到p53蛋白的表达。
结论:1.成功构建WWOX基因慢病毒重组载体。2. WWOX过表达可明显抑制Jurkat和K562细胞增殖,诱导细胞凋亡。3. WWOX过表达均可使Jurkat和K562白血病细胞中Bcl-2表达下调,Cyto C表达增多,同时均可激活Caspase-9和Caspase-3的表达剪接,推测通过激活内源性线粒体途径可能是WWOX抑癌机制之一。4. Jurkat和K562白血病细胞中,上调的WWOX可直接与p73结合,参与诱导细胞凋亡的过程。
【关键词】:
【学位授予单位】:福建医科大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2012【分类号】:R733.7【目录】:
中文摘要4-6英文摘要6-9前言9-11第一部分 WWOX 基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定11-26 材料与方法11-19 实验结果19-24 讨论24-25 结论25-26第二部分 慢病毒介导的 WWOX 过表达对 Jurkat 及 K562 白血病细胞生物学特性的影响26-50 材料与方法26-32 实验结果32-46 讨论46-49 结论49-50第三部分 WWOX 基因过表达诱导 Jurkat 及 K562 细胞凋亡的分子机制研究50-67 材料与方法50-56 实验结果56-63 讨论63-66 结论66-67参考文献67-72综述72-81 参考文献77-81致谢81
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京公网安备75号我做慢病毒感染细胞,感染完成后,后期还需要做什么实验?_百度知道
我做慢病毒感染细胞,感染完成后,后期还需要做什么实验?
提问者采纳
数据都是实实在在做出来的我们医院很多人都知道威斯腾生物,安全可靠,专门代做实验
采纳率100%
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表达嵌合抗原受体Jurkat细胞株的筛选及功能研究
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