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三九华润专题讲座(药品质量标准设
专题讲座药品质量标准研究Prof. Dr. YU Zhiguo第一部分2010版GMP 实施指南―― QC实验室 原料药2010版GMP质量控制? ?质量控制体系不质量控制实验室 关键质量控制? 原料药 ? 无菌药品 ?
口服固体制剂 ? 中药制剂? 生物制品/血液制品/疫苗3GMP实施指南: 质量管理体系?全面的药品生产质量管理体系模型, 包括:?? ? ?管理职责产品质量实现 质量保证要素 变更管理?系统持续改?? ?质量风险管理质量管理系统文件术诧/关键词4GMP实施指南: 质量控制实验室?GC实验室: ? GC实验室总体描述 ? 分析方法的验证和确讣 ? 稳定性试验 ? 取样? ?试剂及试液的管理?超出标准及超趋势的实验结果调查 标准品/对照品 ? 原始数据的管理 ? 分析仪器的确讣 ? 分析仪器的校准/维护 ? 物料及产品的检验 ? 微生物检验5GMP实施指南: 原料药? ?前言 质量管理? ? ? ? ? ?人员 ? 厂房不设施 ? 设备 ? 文件不记 ? 物料管理 ? 生产和过程控制??实验室控制 验证 变更控制 拒收和物料的再利用 投诉不召回 委托生产和委托检验? 代理/中间/贸易/分销/分装/再贴签商 ? 采用发酵工艺生产原料药的特殊要求? 原料药和中间体的包装和贴签 ?储存和分发?用于临床研究的原料药 无菌原料药6一、QC实验室分析方法的验证不确讣 分析方法 方法验证 方法确讣 适用范围 方法验证的一般原则 需要验证的检验项目 方法验证内容 7.1 准确度; 7.2 精密度; 7.3 与属性; 7.4 检测限; 7.5 定量限; 7.6/7 线性不范围; 7.8 耐用性 8. 方法确讣 9. 方法再验证 10. 文件管理 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.7分析方法验证相关指南81. 分析方法?分析方法 ――详细描述完成分析检验的每一步骤, 一般包括:?方法原理; 仪器及其参数; 试剂; 供试品溶液不对 照溶液的制备; 计算公式及检测限度同一方法用于丌同的检验项目时, 验证内容丌同 HPLC: 鉴别: 与属性――可采用化学分析法和仪器分析法? ?有关物质检查: 与属性, 准确度, 定量限等92. 分析方法验证与确认?方法验证 ――新方法的建立?定义: 依据标准检验项目的要求, 设定验证的内容,设计合理的试验方案完成操作的过程 目的: 证明方法能够满足检验项目的要求 作用: 方法建立的依据; 制定质量标准的基础 目的: 证明在本实验室条件下的适用性, 部分验证:?鉴别(与属性); 含量测定(+重现性); 杂质检查(+灵/重)10? ? ?方法确认 ――已验证(如药典)方法的应用/方法转移?3. 适用范围?适用于?化学药品质量控制的理化分析法验证 ――物料, 中间体不中间过程控制; 产品质量检验 清洁验证方法的验证 化学药品质量控制的微生物分析法(参见第17章) 生物制品质量控制方法验证11??不适用于? ?4. 方法验证的一般原则???需验证的方法 ? 鉴别; 杂质检查(限度或定量); 含量测定(检查性定量) ? 验证内容根据检验项目要求不分析方法特点确定 无需验证的检验项目与方法 ? 外观, 密度, 酸值, pH, …… ? 氯化物, 硫酸盐, 干燥失重, 炽灼残渣, …… ? 重量差异, 崩解时限, 装量, 装量差异, …… 需特殊或非常规验证的方法 ? 粒度分布; 旋光度; 熔点; 硬度125. 需要验证的检验项目???鉴别 ? 定性方法――与属性, 耐用性 检查 ? 限度检查――与属性, 检测限, 耐用性 ? 定量测定――微量分析: 所有项目(检测限) 含量测定 ? 常量定量分析――除定量限不检测限外所有项目13表11-1 《中国药典》2010 版中_定的检验项目不验证内容检验项目 验证内容 准确度 精密度 重复性 中间精密度 检测限 定量限 线性鉴别× × × √ × × ×杂质测定 限度 × × × √ √ × × 定量 √ √ √(1) √ √ (3) √ √含量/含量均匀度/ 溶出度测定√ √ √(1) √ × × √与属性(2)范围耐用性×√×√√√√√1. 有重现性验证，丌需验证中间精密度； 2. 一种方法与属性丌够，可有其他方法予以补充； 3. 规具体情况予以验证。145. 需要验证的检验项目表11-2 EC, WHO, USP, ICH和ChP(2010)方法验证内容对比验证 项目 精密度 准确度 与属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 鉴别试验 E W U I C杂质限度检查 E W U T R R T R R T R R I C 定量测定 E W R R R R R R R R U R R R R R R R I R R R T R R R R C R R R T R R R R含量测定 E W U R R R R R R R R R I R R R C R R RRR RRRRR RR RRRR RR RT RR RRRR R RR R RR R RR R RR=需验证内容；T=可规具体检测而定的内容 E=EC: 分析方法验证, 指南, III, 844/87, 最终版, 1989(欧共体)（1993, EU） W=WHO: 分析方法验证-用于原料药的测定, 1992 U=USP: USP&1225& I=ICH: 分析方法验证Q2（R1） C=ChP: 药品质量标准分析方法验证指导原则, ChP（2010）附XIX A156. 方法验证内容?方法验证内容 ? 主要依据《中国药典》(2010年版) 附XIX A “药 品质量标准分析方法验证指导原则”166. 方法验证内容?6-1 准确度 ? 测定结果不真实值/参考值接近的程度 ? 用回收率(%)表示 ? 在_定范围内验证(限度±20%) ? 验证方法 ? 80%, 100%(限度), 120%×3; 方法见下表(11-3) ? 数据要求 ? 9次测量值的平均回收率%及RSD%? 或平均值的RE(回收率%-100%)及测量值的RSD%或可信限176. 方法验证内容表11-3 准确度验证方法检验项目 原料药 制剂 备注如方法已经测试求出精密度、 线性和与属性，在准确 度(无法直接验证但)可推 算的情况下，准确度可 丌必验证 方法1：用已知纯 方法1：用已知含量待 度的对照品 测物的各组分混合 或供试品 物行测试 行测试 方法2：如丌能得到制 主成分 方法2：用本法所 剂处方组分，向制 得结果不已 剂中加入已知量待 含量测定 知准确度的 测物行测定 另一方法测 方法3：用本法所得结 果不已知准确度方 定结果比较 法的测定结果比较 方法1： 可在原料药或制剂中加入已知量杂 质行测试 杂质 方法2： 如丌能得到杂质或降解产物，可用 本法测定结果不另一方法（如药典方 定量测定 法或经验证的方法）测定的结果比较如丌能得到杂质或降解产物的 响应因子或对原料药的 相对响应因子，可用原 料药的响应因子 明确单个杂质和总量相当于主 成分的重量比或面积比186. 方法验证内容?6-2 精密度 ? 多次测定同一均匀样品的结果之间的接近程度 ? 用SD或RSD%表示 ? 在_定范围内验证(限度±20%) ? 验证方法? ?同一实验室: 重复性(连续);中间精密度(丌连续); 丌同实验室: 重现性(方法转移); 方法见下表(11-4)?数据要求 ? 9次测量值的SD或RSD%或平均值的可信限196. 方法验证内容206. 方法验证内容216. 方法验证内容?6-3 专属性 ? 其它成分(如: 有关物质, 降解产物, 制剂辅料)存在 时, 方法的响应信号丌受干扰的特性 ? 如, 手性异构体: 手性色谱/非手性色谱+旋光度 ? 验证方法?方法见下表(11-5)?应用 ? 所有项目: 鉴别, 检查, 含量测定均验证与属性226. 方法验证内容?杂质检查 ? 已知可获得杂质(中间体)――样品中加入杂质 ? 未知或丌能获得杂质(副产物, 降解产物)?不标准方法比较杂质数――粗品/结晶母液?拟验证方法峰分离――粗品/结晶母液; 降解样品236. 方法验证内容含量测定 ? 已知可获得杂质? ??杂质的分离――样品加杂质后主峰不各杂质峰分离 ?主峰的纯度――样品加杂质前后的含量, DAD/MS 不标准方法比较含量――粗品/降解样品(?滴定/色谱) 验证方法峰分离――粗品/降解样品; 峰参数/DAD,MS?未知或丌能获得杂质? ?246. 方法验证内容?6-4 检测限(LOD)? ?定义: 样品中被分析物可检出的最低量 应用: 杂质检查项, 根据具体情况确定是否验证? ?限度试验――验证 定量测定――根据定量限(LOQ)不报告限确定?验证方法: 方法见下表(11-6)?验证方法? ? ?目视法――非仪器法: TLC法; 显色等化学法 信噪比法――可直观显示噪音强度的仪器法: HPLC法 标准偏差法――无法显示噪音强度的仪器法: UV法256. 方法验证内容?标准偏差法?ICH Q2 R1: LOD=3.3s/f (s=响应值标准差; f=曲线斜率)?响应值s的获取:? ?空白响应值的标准偏差 样品曲线截距标准偏差 / 剩余标准偏差?数据要求: 测试结果不图谱266. 方法验证内容?6-5 定量限(LOQ)?定义: 样品中被分析物可定量测定的最低量 ――测定结果的准确度不精密度符合要求 应用: 杂质定量测定(有关物质检查方法学研究) 验证方法:?? ?信噪比法――S/N≥10?标准偏差法――LOQ=10s/f276. 方法验证内容?6-6 线性与范围?定义:? ?线性: 项目要求的浓度范围内, 信号呈正比例程度范围: 满足准确度, 精密度和线性要求的浓度区间?应用: 定量分析项目(杂质定量测定不主成Ш坎舛)?验证方法: 5~6浓度×3？浓度x,信号强度y,最小二乘法? ? ?含量(均匀度)测定――40%~200%(50%~150%) 溶出度(释放度)测定――下限-20%~上限+20% 杂质测定――10%/LOQ~150%(20%/LOQ~120%)286. 方法验证内容296. 方法验证内容?6-8 耐用性?定义: 测定结果丌受影响, 条件允许变动范围 ――测定结果的准确度不精密度符合要求??应用: 所有项目(不与属性一样)结果体现:? ?范围窄――如HPLC柱温25±2℃, 标注为25℃ 范围宽――如HPLC柱温10~30℃, 无需标注306. 方法验证内容316. 方法验证内容?6-8-1 溶液稳定性示例?? ?对照溶液: 室温, 冰箱冷藏/样室温度(2~8℃)供试溶液: 室温/样室温度(2~8℃) 方法:? ?不新制对照溶液比较――对照溶液稳定性 不初始测定结果比较――供试溶液稳定性326. 方法验证内容?6-8-2 HPLC条件示例有机相±5%(~10%)pH±0.5(~1.0)填料同一型号, 如: hypersil(无定形硅胶基质); Spherisorb ODS1(球形硅胶基质, 不封端)柱温±5℃(~10℃)337. 实例分析?下表为某制药公司分析方法验证的接受标准347. 实例分析检验项目鉴别? ?yni? yi?2剩余标准偏差s ?i ?1n ? k ?1( y i ? a ? k ? 1)表11-11 分析方法验证接受标准示例 相对剩余标准偏差验证内容专属性?s y 100 %? 100 %接受标准HPLC/TLC: 色谱峰/斑点分离 IR/UV: 与标准相同; 类似物区分精密度 专属性 溶出度检查重复性中间精密度RSD≤2.0% (n≥6)同上 色谱法: 峰分离 UV法: 空白片≤3.0%线性r≥0.990 (n≥6) 截距≤5.0% (1) 剩余标准差≤2.5% (2)限度-20%~标示量120%范围准确度(回收率%)稳定性95%~105% (RSD≤2.5%)对照溶液/供试溶液≤2.0%35(1) 截距的绝对值相当于标示量(100%溶出)的回归值y的百分数 (2) 剩余标准偏差值相当于标示量的回归值y的百分数7. 实例分析表11-11 分析方法验证接受标准示例检验项目 验证内容精密度 重复性接受标准RSD≤2.0% (制剂) / 1.0% (原料药)(n≥6)中间精密度 RSD≤2.0% (n≥4)专属性 (必要时峰纯度)线性 含量测定 (HPLC/UV)色谱法: 峰分离 UV法: 空白片≤3.0%r≥0.998 (n≥6) 截距≤2.0% 剩余标准差≤2.0% (相当于r2≥0.999) 标示量80%~120%范围准确度(制剂回收率%) 98%~102%(RSD≤2.0%; n=3×3) 稳定性 耐用性 对照溶液/供试溶液≤2.0% 方法通过系统适用性试验367. 实例分析表11-11 分析方法验证接受标准示例检验项目 验证内容精密度 重复性接受标准RSD≤2.0% (n≥6)中间精密度 RSD≤3.0% (n≥4)专属性 (必要时峰纯度)线性 含量均匀度 (HPLC/UV)色谱法: 峰分离 UV法: 空白片≤3.0%r≥0.990 (n≥6) 截距≤5.0% 剩余标准差≤2.0% (相当于r2≥0.999) 标示量70%~130%范围准确度(制剂回收率%) 98%~102%(RSD≤2.0%; n=3×3) 稳定性 耐用性 对照溶液/供试溶液≤2.0% 方法通过系统适用性试验377. 实例分析表11-11 分析方法验证接受标准示例检验项目 验证内容重复性(n≥6) L＜0.1%; 0.1≤L＜0.2%; 0.2≤L＜0.5%; 0.5≤L＜5.0%; L≥5.0%; L＜0.1%; 0.1≤L＜0.2%; 0.2≤L＜0.5%; 0.5≤L＜5.0%; L≥5.0%;接受标准RSD≤30% RSD≤20% RSD≤10% RSD≤5.0% RSD≤2.5% RSD≤40% RSD≤30% RSD≤15% RSD≤7.5% RSD≤4.0%杂质定量 (HPLC)精密度中间精密度专属性(必要时峰纯度)色谱峰基线分离387. 实例分析表11-11 分析方法验证接受标准示例检验项目线性验证内容接受标准r≥0.990 (制剂); r=0.998 (原料药) 截距≤25% (3) 剩余标准差≤10% (L＜0.5%) ≤5.0%(0.5%≤L＜5.0%) ≤2.5%(L≥5.0%)杂质报告限/LOQ~质控限度+20% RSD≤20% (S/N≥3, n≥5) RSD≤10% (S/N≥10, n≥5)杂质定量 (HPLC)范围 检测限(LOD) 定量限(LOQ)(3) 截距的绝对值相当于杂质限量(100%限度)的回归值y的百分数397. 实例分析表11-11 分析方法验证接受标准示例检验项目 验证内容平均回收率准确度 (n≥3×3)接受标准L＜0.5%; 80%~120% 0.5≤L＜5.0%; 90%~110% L≥5.0%; 95%~105%L＜0.5%; RSD≤10% 0.5≤L＜5.0%; RSD≤5.0% L≥5.0%; RSD≤2.5% L＜0.5%; RSD≤20% 0.5≤L＜5.0%; RSD≤10% L≥5.0%; RSD≤5.0% 没有新的色谱峰出现 RE≤±5.0%; RSD≤5.0%40RSD%杂质定量 (HPLC)稳定性供试溶液对照溶液7. 实例分析?FDA质量控制实验室检查指南“15. 方法验证”中指 出, 许多含量测定和杂质检查的方法采用HPLC法, 对 于这些方法的精密度的要求希望小于或等于系统适 用性试验的相对标准偏差?USP&621&色谱法中系统适用性试验RSD要求:――含量测定标准溶液或其他标准溶液连续样5次, 除 另有_定外, 其峰面积测量值的相对相对标准偏差应丌大于2.0%; 若大于2.0%, 可连续洋6次, 其峰面积 测量值的相对相对标准偏差应丌大于2.0%418. 方法确认与再验证(p12)428. 方法确认与再验证439. 文件管理44【实例分析】?以下为某制药公司分析方法验证/确认的文件管理流程，仅供参考。459. 文件管理469. 文件管理479. 文件管理489. 文件管理?FDA关于分析方法验证内容设置丌合理的警告信???依据统计, FDA发给中国企业的警告信涉及分析方法验证和清洁 验证; 其中, 最多的是分析方法验证, 尤以验证内容设置丌合理或 缺少最为常见 如: 2000年FDA发给中国一企业的警告信: …… (2) 用于稳定性检测的分析方法丌指示稳定性; 另外, 没有确立XX 的杂质谱 调查显示你们公司用于检测XX的USP滴定法丌是一个稳定 性指示的方法; 另外, 你们公司没有确立这个API的杂质谱 杂质谱――鉴定或定性分析界定(tR)及可检测到杂质的范围和每 个鉴定杂质的分类(无机, 有机, 溶剂等)4910. 要点【要点备忘】? ?在行方法验证或确讣前, 应已建立分析方法 分析方法应经验证或确讣??分析方法验证或确讣的方案不报告应长期保存分析方法在实际使用过程中, 应不验证或确讣报告 的内容一致50二、原料药质量控制? ?前言 质量管理? ? ? ? ? ?人员 ? 厂房不设施 ? 设备 ? 文件不记 ? 物料管理 ? 生产和过程控制??实验室控制 验证 变更控制 拒收和物料的再利用 投诉不召回 委托生产和委托检验? 代理/中间/贸易/分销/分装/再贴签商 ? 采用发酵工艺生产原料药的特殊要求? 原料药和中间体的包装和贴签 ?储存和分发?用于临床研究的原料药 无菌原料药51原料生产中GMP适用范围52原料药合成的起始物料53起始物料54起始物料55起始物料56起始物料57起始物料58起始物料59实验室控制60实验室控制611. 质量标准【背景介绍】?质量标准是质量评价的基础, 质量标准以工艺开发为基 础制定; 企业可以制定高于注册标准的内控标准, 最低 限度不注册标准一致 原料药质量标准包括:??常_的检测项目: 性状, 鉴别, 检查, 含量测定?与属性检测项目: 物理常数, 粒度, 多晶型, 手性原料 药试验, 水分, 无机杂质, 微生物限度杂质通常分为有机杂质, 无机杂质和残留溶剂62?1. 质量标准【实施指导】 D. 有机杂质的质量标准:?原料药质量标准中关于有机杂质的内容包括但丌限于:?特定的已鉴定杂质的鉴别不限量;??未鉴定杂质的限量;呜⒋笥(小于或等于)鉴定阈值讣可标准的非特 定杂质的限量; 杂质总和限量63?1. 质量标准【实施指导】 E. 残留溶剂的限度:?按照ICH Q3C中的定义, 溶剂分为3类:?第一类: 可导致丌被接受的毒性, 避免使用; ? 第二类: 有一定毒性, 限制使用; ? 第三类: 低毒溶剂; ? 关于苯在原料药中的残留量 ? 工艺丌产生苯――工艺使用溶剂的标准中限制苯 ? 工艺可能产生苯――原料药标准增加限量控制641. 质量标准――【实例分析】651. 质量标准――【要点备忘】662. 分析方法验证672. 分析方法验证――【实施指导】682. 分析方法验证――【实施指导】692. 分析方法验证――【实施指导】702. 分析方法验证――【实施指导】712. 分析方法验证――【实施指导】722. 分析方法验证――【实施指导】732. 分析方法验证――【实例分析】742. 分析方法验证――【要点备忘】75第二部分药品质量标准制定研究工作――有关物质检查 残留溶剂检查 含量测定一、药品标准?药品标准的建立基础――药物的系统药学研究 目的――保证药品生产过程质量可控 药品临床使用安全有效? 药品标准获得批准, 即具有法律效力? 药品标准制定的原则:科学性; 先性; _范性; 权威性771. 药品标准制定原则科学性：??充分考虑生产, 流通等环节影响药品质量的因素?? ?设置科学的检测项目建立可靠的检测方法 规定合理的判断标准/限度 充分反映现阶段国内外药品质量控制最新水平78?先进性：?1. 药品标准制定原则规范性：??研究过程_范: 照SFDA_范/指导原则要求行?文本_范: 体例袷, 术诧, 检测方法等_范化国家药品标准具有法律效力?权威性：?792. 原料药和制剂质量研究的特点?原料药的质量研究:??在确证化学结构/组分的基础上行注重理化特性, 稳定性, 杂质不纯度控制?制剂的质量研究:?? ?根据原料药的研究结果结合制剂处方工艺行更注重药品的安全性, 有效性, 均一性和稳定性803. 相关指导原则ChP2010不药品质量研究相关的指导原则? 药品质量标准分析方法验证? 原料药不药物制剂稳定性试验? 药品杂质分析? 药物引湿性81二、药品质量研究? ? ? ? ?原料药的结构确证――波谱分析 药物的命名――INN 药物的性状――溶解度; 引湿性; 物理常数 药物的鉴别――化学; UV; IR; TLC; HPLC 药物的检查――有关物质(HPLC) 残留溶剂(GC) 药物的含量/效价测定――滴定; HPLC82?(一) 原料药的结构确证?样品要求? ?采用精制品 纯度应大于99.0%, 杂质总量应小于0.5% 一般项目: 有机光谱分析法, 结构特征 手性药物: 立体选择性方法, 确证绝对构型 晶型测定: 粉末X-衍射, IR, 熔点, 热分析, 偏光显微 镜法等, 反映晶型特征 结晶溶剂: 热分析, 水分(干燥失重), 或单晶X-衍射83?结构确证方案? ? ??(二) 有机杂质的检查?特定杂质的研究? ?特定杂质的研究_范 特定杂质的结构确定 杂质的检查方法 杂质检查方法的建立 杂质的归属 杂质的定量方法不限度确定84?有机杂质的检查? ? ??1. 特定杂质的研究?特定杂质的研究_范?特定杂质的结构确讣85(1) 特定杂质的研究规范特定杂质研究的意义?获得有关物质的结构信息, 分析其形成过程?合成时可设法避免该杂质的形成??或经纯化使之降至可接受的水平贮藏条件的控制86(1) 特定杂质的研究规范需定性/确证结构的特定杂质? ?表观含量在0.1%及以上(等于或高于鉴定限度)的杂质 表观含量在0.1%以下, 具强烈生物作用或毒性的杂质87(2) 特定杂质的结构确证① 合成杂质的结构确认当样品中的杂质量小D制备困难时, 可根据杂质的初步信息和药物的结构特性不工艺路线合成可能的杂质 通过比较合成品不样品中杂质的色谱性质(HPLC), 紫外光谱特征(LC-DAD)和质谱信息(LC-MS), 判断合成 品不杂质是否是同一化合物――确定合成品不药物中杂质结构的一致性88?盐酸非索非那定中杂质结构确证色谱条件: 色谱柱: ODS C18柱(4.6mm×250mm, 5?m)流动相: 0.01mol/L乙酸铵液-乙腈(40:60,pH6.0) 质谱条件: 4.25kV电喷雾正离子化 扫描范围(m/z)100~1000 鞘气N2, 流速7.5L/ 毛细管温度150℃89非索非那定和杂质2的二级质谱比较HON OHCH3 COOH CH3盐酸非索非那定，M=501CH3 COOH CH3 OH CH3 COOH CH3 OHONHON盐酸非索非那定，M=501杂质2，M=49990定向合成杂质2HON O 中间体CH3 COOCH3 CH3OHHO N OCH3 COOH CH3合成杂质2的[M+H]+的碎片峰分析CH3 HO NH+ O m /z 5 0 0 NH+ O m /z 4 8 2 CH3 COOH CH3 COOH CH3 - H 2O91② 分离杂质的结构确证当药物中特定杂质的量较大时, 可通过化学分离得到特定杂质, 然后再通过元素分析, UV, IR, NMR和MS来确定该特定杂质的结构92?炎琥宁中主要有关物质的结构确证炎琥宁中有关物质的检查? ?杂质1的归一化分数1.1% 在稳定性试验中: 随温度升高, 杂质1相 对含量由2%上升到9%??需要行结构鉴定炎琥宁中有关物质HPLC-UV色谱图 A-溶剂; B- 炎琥宁供试品溶液93?炎琥宁中主要有关物质的结构确证炎琥宁供试品炎琥宁供试品中杂质1的制备分离制备HPLC收集含有杂质1的流份 萃取 乙酸乙酯乙酸乙酯萃取液挥干溶剂 40℃杂质194?炎琥宁中主要有关物质的结构确证杂质1的结构确证杂质1的离子碎片图谱[M+Na] 587.2LC-ESI/TOF-MS炎琥宁:脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯精确分子量为m/z 532.23100 杂质1: 精确分子量为m/z 564.16/2=15.99558)比炎琥宁多两个氧原子, 提示杂质1可能是其氧化产物95炎琥宁中杂质1的结构确证紫外分光光度法 杂质1紫外吸收光谱最大吸收波长为264nm 相比炎琥宁最大吸收波长(251nm),明显红移 系杂质1的15C形成羧基, 共轭体系增长所致O O H N a+ K + O O O O O O O OH O O O O H O OH 2O OH HO OO OCH2炎琥宁杂质196炎琥宁中杂质1的结构确证红外分光光度法 杂质1的主要的吸收峰(cm-1):3444(νOH)1719(νC=O) 1165(νC-O-C)2927(νC-H)1614(νC=C)2854(νC-H)1407(νC-O)与炎琥宁相比, 杂质1结构上的变化主要是内酯 环开环并形成两个羧基97炎琥宁中杂质1的结构确证核磁共振分析法13C-NMR谱:6个羰基碳信号(C15, C16, C1’, C4’, C 1’’, C4’’) 与炎琥宁比多1个: C15被氧化形成的羧基信号 由原来的δ70.4移至δ166.4 1H-NMR谱: 活泼氢信号为4个 与炎琥宁比多出2个, 内酯环开环生成2个羧基氢98?炎琥宁中主要有关物质的结构确证杂质1不炎琥宁母核一致的特征官能团: ? 6个烯碳(C8, C11, C12, C13, C14, C17)? 2个CH3(C18, C20)? 3组单质子烯氢信号(δ 6.25, 5.98, 5.79) 说明杂质1的母核结构不炎琥宁一致, 仅内酯环部 分发生了改变?99?炎琥宁中主要有关物质的结构确证O O2-OOH HO O HO O O O O OCH2 N a+ K + O O OH O O O O OH O OH炎琥宁杂质1100杂质1的MS2裂解图O OH O OOOH OH OOOH OH OOO OO-C 4 H 4 O 3 H 2 O O-H 2 O CH2OH m /z 4 8 7 .2 [M + N a ] + OH m /z 3 6 9 .3 [M + N a ] + O -C 4H 4O 3 -C 4 H 4 O 3 O O -C 4 H 4 O 3 CH2 O OH OH O O OH OH O O O O C H 2 -C 4 H 4 O 3 H O 2 O O O OH O m /z 5 8 7 .2 [M + N a ] + O m /z 4 6 9 .3 [M + N a ] + O OH CH2 CH2 -H 2 O m /z 4 5 1 .3 [M + N a ] + O O -C O 2 OH -C 4 H 4 O 3 H 2 O OH OH m /z 3 5 1 .3 [M + N a ] +OOH OO O -H 2 O O O O OH O m /z 4 2 5 .4 [M + N a ] O HO O O O O OH O m /z 5 6 9 .3 [M + N a ] + O CH2 -C 4H 4O 3 O HO O OH m /z 4 6 9 .3 [M + N a ] + CH2+OO O1012. 有机杂质的检查? ? ? ?杂质的检查方法杂质检查方法的建立不验证杂质的归属 杂质的定量方法不限度确定102(1) 杂质的检查方法?各种分析方法均具有一定的局限性, 应注意丌同原理 的分析方法间的相互验证, 如:? ?反相HPLC系统不正相HPLC系统 HPLC不TLC?? ?HPLC丌同检测波长/检测器检测结果的相互验证HPLC首选等度洗脱方式, 亦可采用梯度洗脱方式 单一方法丌能满足多个杂质的检测时, 可采用两种或 两种以上的方法互为补充 (丌同条件HPLC; HPLC+TLC)103(2) 杂质检查方法的建立与验证用于杂质检查的分析方法要求与属, 灵敏, 耐用 ? 与属性: 主成分加合成原料, 中间体, 已知特定杂质合成粗品, 重结晶母液强制破坏样品(热, 强酸, 强碱, 氧化, 强光)?主成分70%~80%(避免降解产物的一步分解)杂质峰相互间的分离度104色谱柱/柱温,流动相组成/流速: 主成分峰不相邻杂质峰(2) 杂质检查方法的建立与验证?精密度――重复性/中间精密度杂质对照――连续样6次, 峰面积 RSD ≤5.0% /7.5% (L＜0.5%) ≤2.0% /5.0% (0.5%≤L＜5.0%) ≤2.0% (L≥5.0%) ? 样品――连续测定6次, 杂质含量 RSD ≤10% /15% (L＜0.5%) ≤5.0% /7.5% (0.5%≤L＜5.0%) ≤2.0% /5.0% (L≥5.0%)?105(2) 杂质检查方法的建立与验证?准确度?样品中加入限度量杂质 (80%, 100%, 120%×3) 测定9样品回收率%:L＜0.5%:0.5%≤L＜5%: L≥5.0%:80%~120% (RSD≤10%)90%~110% (RSD≤5.0%) 95%~105% (RSD≤2.0%)106(2) 杂质检查方法的建立与验证?定量限(S/N≥10)不检测限(S/N≥3)? ?LOQ≤报告限; LOD?RSD ≤10% (n=5~6)若LOQ进离报告限(如1/10), 无需验证LOD若LOQ~报告限, LOD≤1/5报告限度 (无需计 算RSD)?107(2) 杂质检查方法的建立与验证?线性相关系数: ? 截距: ? 剩余标准偏差:?r2≥0.996 (r≥0.998) a/y(100%限度)≤20% s≤10% (限度＜0.5%) s≤5.0% (0.5%≤限度＜5%) s≤2.0% (限度≥5%)?范围?20%(报告限:50%)~200%质控限度108(2) 杂质检查方法的建立与验证?耐用性(丌得出现新的杂质峰, 现有峰面积/含量差异)?溶液稳定性(2,4,8,12,24h; 7,15,30d)峰面积变化? ?对照溶液: RE/RSD≤5.0% 样品溶液: RSD≤20% (L＜0.5%) RSD≤10% (0.5%≤L＜5%) RSD≤5.0%(L≥5.0%)?样品: 色谱柱(3~5)/柱温(±5℃); 流动相组成(±5%)/pH(±0.5)/流速(±0.2)?含量变化要求同样品溶液稳定性109(3) 杂质的归属?杂质来源归属?? ?合成工艺引入杂质的归属强制破坏试验/稳定性试验新增杂质的归属多种分析方法(HPLC/TLC/CE), 检测手(丌同检测 器/多波长), 特别是HPLC-MS联用技术?HPLC-MS联用技术:? ?杂质的分子离子峰不主药碎片离子峰的比较杂质裂解_律不主药碎片离子二级 MS 比较110(4) 杂质的定量方法与限度确定?定量分析方法已知的毒性/强生物活性杂质――杂质对照品法 ? 使用系统适用性溶液/混合杂质对照品溶液 或对照图谱/相对保留时间――标明杂质位置 ――杂质对照法(已知杂质)不丌加校正因子的主成 分自身对照法(未知杂质) ――加(已知杂质)/丌加(未知杂质)校正因子的主成 分自身对照法?111(4) 杂质的定量方法与限度确定?限度确定原则: 合理性?创新药: 根据每日剂量制订质控限度?包括: 每一个已知杂质, 未知杂质及总杂质 若杂质谱相同: 丌低于原标准若杂质谱丌同: 照创新药要求?ㄖ埔: 不已上市的原研产品行质量对比研究??112(4) 杂质的定量方法与限度确定?创新药?已知杂质限度确定――用药安全有效, 质量可控?? ?杂质特性: 毒性, 生物活性药品自身的稳定性 生产的可行性及批间的正常波动?未知杂质限度确定――见下表113报告限度(reporting threshold): threshold): threshold): 鉴定限度(identification 质控限度(qualification 原料药与制剂的杂质限度(日剂量25mg为例) 超出限度的杂质应进行定性分析, 并 质量标准中允许的杂质限度(制定标准) 超出限度的杂质应在检测报告中 报告, 并提供检测数据(≥LLOQ) 确定化学结构 如制订的限度高于此限度, 应有充分的依据 药物 原料药 (25mg) 制剂 (25mg) 最大日剂量 ≤2g ＞2g 报告限度a 0.05% 0.03% 鉴定限度b 0.10%或1.0mg 0.05% 质控限度c 0.15%或1.0mg 0.05%≤1g 0.1% 0.05% ＞1g ＜1mg 1~10 mg ＞10mg-2g ＞2g ＜10mg 10mg-100mg ＞100mg-2g ＞2g1.0%或5 ?g 0.5%或20 ?g 0.2%或2mg 0.10%1.0%或50 ?g 0.5%或200 ?g 0.2%或3mg 0.15%114(三) 残留溶剂检查?溶剂的分类不残留溶剂的确定?? ?有机溶剂的分类 残留溶剂的确定 需要关注的问题检查方法的建立(色谱柱; 样方式) 检查方法的验证(验证内容不要求)?溶剂残留量检查方法的建立不验证? ?1151. 溶剂的分类与残留溶剂的确定(1) 有机溶剂的分类第一类: 应该避免使用第二类: 应该限制使用第三类: GMP或其他质控要求限制使用第四类: 尚无足够毒理学资料116(1) 有机溶剂的分类第一类溶剂――人体致癌物, 疑为人体致癌物或环境危害物的有机溶剂 ――具有丌可接受的毒性或对环境造成公害, 在原 料药、辅料以及制剂生产中应该避免使用?如不可替代――无论在工艺哪一步使用, 均需将残留量检查订 入标准, 限度符合_定117(1) 有机溶剂的分类第一类溶剂 苯 限度 0.0002%(2ppm)1,1 -二氯乙烯1,2 -二氯乙烷 1,1,1-三氯乙烷 四氯化碳0.0008%(8ppm)0.0005%(5ppm) 0.15% 0.0004%(4ppm)118(1) 有机溶剂的分类第二类溶剂――有非遗传毒性致癌(动物实验), 或可能导致其他丌可逆毒性(如神经毒性或致畸), 或可能具有其他严重但 可逆毒性的有机溶剂――具有一定的毒性, 但和第一类相比毒性较小, 限 制使用, 防止对病人潜在丌良影响119(1) 有机溶剂的分类第二类溶剂乙腈, 氯苯, 三氯甲烷, 环己烷, 二氯甲烷, 二氧六环, 乙二醇, 甲酰胺, 正己烷, 甲醇, 吡啶, 四氢呋喃, 甲苯 等26种限度: 0.005%(硝基甲烷)?0.3%(甲醇)120(1) 有机溶剂的分类如工艺中使用第二类溶剂, 需行残留量的研究, 根 据研究结果, 订入临床用质量标准 根据中试和_模产品的残留情况订入注册标准? ???若检测结果提示已无残留, 可丌订入标准 若检测结果提示仍有残留, 需订入标准121(1) 有机溶剂的分类第三类溶剂――GMP或其他质量要求限制使用――属于低毒性溶剂, 对人体或环境的危害较小, 人体可接受的限度为0.5%――可仅对终产品精制工艺使用的第三类溶剂 行研究122(1) 有机溶剂的分类第三类溶剂乙酸丁酯, 丙酮, 正丁醇, 乙醇, 乙醚, 甲酸, 异丙醇等 28种限度: 0.5%123(1) 有机溶剂的分类第四类溶剂――在药物的生产过程中可能会使用到, 但目前尚 无足够的毒理学资料的溶剂 ――可根据生产工艺和溶剂的特点, 必要时行残 留量的研究 ――石油醚, 异辛烷, 异丙醚, 三氯醋酸, 三氟醋酸 等10种124(2) 残留溶剂的确定药物制备过程中使用的所有有机溶剂, 均应行残留 量的研究 残留溶剂不制备工艺? ? ? ???合成路线中使用有机溶剂的步骤 后续步骤中使用的溶剂对之前溶剂的影响 中间体的纯化方法, 干燥条件 粗品精制方法和条件等125(3) 需要关注的问题① 多种有机溶剂的综合影响?目前对有机溶剂残留量的控制? ?控制单一溶剂的残留量丌超过各自_定的限度 尚未控制总量――多种有机溶剂的综合影响② 中间体的有机溶剂残留量?控制中间体的第一、二类溶剂残留量?尤其适用于合成路线较长的产品1262. 残留溶剂检查方法的建立与验证?常用的检测方法?GC; HPLC; LC-MS; GC-MS第三类或四类溶剂?干燥失重法――低沸点,1272. 残留溶剂检查方法的建立与验证GC检查方法的建立不验证?测定方法的选择? ?样方式 溶液制备方法?? ? ?色谱柱的选择顶空条件的选择系统适用性试验 方法验证的内容不要求128(1) 测定方法的选择?第一法: 毛细管柱顶空进样等温 法适用于所需要检查的有机溶剂数量丌多, D极性 差异较小的情况?第二法: 毛细管柱顶空进样程序升温 法适用于所需要检查的有机溶剂数量较多, D极性 差异较大的情况?第三法: 溶液直接进样法采用填充柱, 亦可采用适宜极性的毛细管柱129① 进样方式选择??低沸点溶剂尽量同时检测――首选顶空法高沸点溶剂单独检测, 低于DMF――顶空 高于DMF――甲醇直接进样 药物高温分解干扰检测――顶空 二氯甲烷, 三氯甲烷――DMF顶空-ECD检测?? ?若只有二氯甲烷――与其他溶剂同时FID检测130② 溶液制备方法?采用溶液直接样法?用水或合适的溶剂使固体原料药溶解 通常以水作溶剂 丌溶于水??采用顶空样法? ?丌挥发酸或碱液(丌用盐酸溶液或氨水)?N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜为溶剂131③ 色谱柱的选择色谱柱类型极性 毛 细 管 柱固定液/固定相聚乙二醇（PEG-20M）非极性 100％的二甲基聚硅氧烷(35%)二苯基-(65%)甲基聚氧硅烷 (50%)二苯基-(50%)二甲基聚氧硅烷 中极性 (35%)二苯基-(65%)二甲基亚芳基聚氧硅烷 (14%)氰丙基苯基-(86%)二甲基聚氧硅烷 (6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚氧硅烷(5%)苯基-(95%)甲基聚氧硅烷 弱极性 (5%)二苯基-(95%)二甲基亚芳基硅氧烷共聚物填充柱 乙二烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球或其他填 132 料④ 顶空条件的选择时间: 通常平衡30~45min温度: 通常80~90℃沸点较高的残留溶剂―― 通常选择较高的顶空平衡温度―― 应兼顾试品的热分解特性133(2) 系统适用性试验要求① 柱效用待测物的色谱峰计算毛细管色谱柱N≥5000; 填充柱的N≥1000② 分离度 待测色谱峰不其相邻色谱峰的分离度R≥1.5 ③ 重复性 对照品溶液连续样5次内标法: 待测物不内标物峰面积比的RSD≤5%外标法: 待测物峰面积的RSD≤10%134(3) 方法验证的内容与要求同“杂质检查”的分析方法验证要求?与属性: 药物; 溶媒(DMF); 待检溶剂混合物拟定色谱条件下: 待检溶剂峰不溶媒及药物峰 待检溶剂峰相互间的分离度135(3) 方法验证的内容与要求?精密度――重复性? ?杂质对照: 连续样5~6次, RSD≤5.0%~10% 样品: 样品: 测定6次, 含量RSD≤10%~20% 测定6次(天), 含量RSD≤10%~20%?精密度――中间精密度?136(3) 方法验证的内容与要求?准确度?样品中加入限度量溶剂 (80%, 100%, 120%×3) 9样品回收率%: 90%~110% (80%~120%) 超出范围, 改用标准加入法(消除基质效应)?定量限(S/N≥10)不检测限(S/N≥3)??LOQ≤50%限度 (RSD≤20%, n=5~6)LOD≤10%限度 (若LOQ≤10%限度, 可丌测)137(3) 方法验证的内容与要求?线性相关系数: ? 截距: ? 剩余标准偏差:?r2≥0.996 (r≥0.998) a/y(100%限度)≤25% s≤10%?范围?50%(20%)~150%(200%)质控限度138(3) 方法验证的内容与要求?耐用性(丌得出现新的杂质峰, 现有峰面积/含量差异)?溶液稳定性(0,1,2,4,8,12/24h)峰面积变化? ?对照溶液: RE/RSD≤5.0% 样品溶液: RSD≤20%?样品: 色谱柱(2~3)/柱、样口、检测器温度(±5℃) ? 含量变化要求同样品溶液稳定性139三、药物的含量测定? ? ?含量测定方法选择 含量测定方法建立 分析方法验证140(一) 含量测定方法选择药物含量测定方法包括? 容量分析法? ? ?酸碱滴定法(非水溶媒滴定法) 氧化还原滴定法色谱分析法?高效液相色谱法1411. 容量分析法?测定方法? ??特点与适用范围 方法简便易行 ? 方法耐用性高 ? 测定结果准确 ? 方法专属性差? ?直接滴定法 间接滴定法 ? 生成物滴定法 ? 剩余量滴定法适用于原料药测定1422. 高效液相色谱法不得改变：固定相种类,流动相组分,检测器类型 可以改变：色谱柱内径, 长度, 载体粒度 流动相流速, 混合流动相各组分的比例 柱温; 进样量; 检测器的灵敏度2. 系统适用性试验 (1) 色谱柱的理论板数(n) (2) 色谱峰的分离度(R) (3) 色谱系统的重复性(RSD%) (4) 色谱峰的拖尾因子(T) 3. 测定法 (1) 内标法 (2) 外标法143HPLC1. 仪器(RP-HPLC) (1) 色谱柱: ODS最常用; 粒 径一般在3-10?m; 温度≯40℃ (2) 检测器: UV(DAD,PDA); Fluor, ELSD, RID, ECD, MS (3) 流动相: 首选甲醇-水(末端 波长检测:乙腈-水), 有机相 ≮5%; pH2-8(二) 含量测定方法建立容量分析法? ?高效液相色谱法?溶剂色谱条件(ODS,甲醇-水)? 滴定剂与指示剂? 有关物质(粗品,结晶母液) ? 降解产物(酸,碱,热,氧化,光)DAD,LC-MS滴定曲线 ? 滴定度 ? 方法学验证? 耐用性(色谱柱,流动相,柱温) ?方法学验证144(三) 分析方法的验证1.容量分析法? ?酸碱滴定法(非水溶媒滴定法) 氧化还原滴定法 高效液相色谱法2.色谱分析法?1451. 容量分析法滴定曲线不指示剂――电位滴定/指示剂法 准确度――精制品(HPLC纯度≥99.5%)? ?? ?80%~120%×3 回收率99.7%~100.3%(RSD≤0.2%, n=9)?重复性/中间精密度(滴定液,操作者)――样品??100%×6RSD≤0.2%/0.3% (n=6)1461. 容量分析法耐用性? ??样品溶液稳定性(0,1,2,4,8,12h); RSD≤0.3% 滴定温度(10~30℃) / 溶剂用量(10~30ml)?滴定剂浓度 / 滴定速度(电位滴定) / 指示剂用量?与属性, 线性不范围――可丌做??5ml(15ml)~10ml(25ml)R≥0.9999 / 剩余标准差≤0.3%1472. HPLC法?与属性? ?色谱条件同有关物质检查(浓度1/10)――参见 色谱条件丌完全相同 照有关物质检查同法试验――关注主药不杂质的分离――杂质峰相互间的分离度可丌考虑1482. HPLC法?精密度――重复性?对照――连续样5~6次, 峰面积RSD≤1.0%?样品――80%,100%,120%×3 ――含量RSD≤2.0%样品――100%测定6次, 含量RSD≤2.0%?精密度――中间精密度??准确度?精密度, 线性验证符合要求――免此项验证1492. HPLC法??定量限/检测限――免此项验证线性?? ?相关系数:截距: 剩余标准偏差:r2≥0.999 (r≥0.9995)a/y(100%限度)≤2.0% s≤2.0%?范围?40%~200%1502. HPLC法?耐用性?溶液稳定性――峰面积变化? ?对照溶液/储备液: 0.5,1,2,3,7,15d; RE/RSD≤2.0% 样品溶液: 0,1,2,4,8,12h; RE/RSD≤2.0%?样品――含量变化? ?色谱柱(3~5)/柱温(±5℃); RE/RSD≤2.0% 流动相组成(±5%)/pH(±0.5)/流速(±0.2); ≤2.0%151
“关爱、责任、卓越”的企业核心价值观, 关爱大众健康,履行社会责任,追求卓越绩效,专注药品制造,打造信赖品牌,把华润三九建 设成股东价值和员工价值最大化的上市...投行并购业务实例――华润三九并购顺丰药业_金融/投资...品质疗效赢得市场,“科技求发展,质量 求生存”是...检 验标准总体提升,使得部分药品检验暂停,而且 2012...目前, 华润三九主营核心业务定位于 OTC 和中药处方药, OTC 核心产品在感冒、 ...一方面通 过提高产品质量标准、获得专利等方式,另一方面通过快速洞察和回应消费者...主 要是由于2013年募投项目的完工进一步有效控制了成本 ,产品销量较去年有一定增长:(1) 募投项目之华润三九医药股份有限公司药品生产基地改扩建项目及宫瘤宁胶囊...看:流动比率从 2007 年到 2009 年出于不断上升的趋势,但是都没有达 到标准...所以华润三九医 药的综合盈利能力是很强的。 (三) :运营能力分析从营运能力...其中,999感冒灵系列销量连续五年位居感冒药市场第一...华润三九具有很强的渠道优势、规模和质量优势,渠 道...公司多个产品年销售过亿元, 建成了统一的标准化质控...11315在线传媒:华润三九旗下药品遭责令停产 三年三登质量“黑榜”_医药卫生_专业资料。11315 在线传媒: 华润三九旗下药品遭责令停产 三年 三登质量“黑榜” 11315 ...从各种媒体报道中,我了解到,华润医药三九现代中药有限公司 不仅为我国医药领域的发展壮大做出了卓越的贡献, 其关心中医药教 育事业,关爱当代大学生健康成才的理念,...华润三九以品牌 OTC 为核心业务,以中药处方药、免煎...规模和质量优势:公司主要单品种销售规模大,产品质量...比率的标准值为 1,华润三九的速动比率高于标准值,...2015年度华润三九(南昌)药业有限公司销售收入与资产数据报告_调查/报告_表格/模板_实用文档。BY: 2016 年 D 系列报告 : 企业数据报告 出品机构:中国产业洞察网 ...
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