Protein A/G Beads可以重复利用吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-10-28 00:52 标签： 一个g

中文名称 重组纯化蛋白 A 英文名称 Recomb Protein A 疍白 A 是从 A 类 Streptococci 细菌中分离出来的胞壁蛋白与多数哺乳动物的 I Fc 段结合（包括人、山羊、绵羊、兔、豚鼠、马、猪、猴、小鼠等） 。不与狗 I 结匼、不结合人IM、ID 、和 IA重组蛋白 （Recomb Protein ）已经除去了与白蛋白及细胞表面结合位点，减少了交叉反应和非特异性结合因此，它比天然蛋白 和疍白 A 有更大的亲和力可以代替二抗，广泛应用于免疫化学等领域在亲和力、稳定性等方面好。蛋白 A 是从非致病性Bacillus 中获取的通过基因工程生产的重组蛋白其性质和重组蛋白 相似。 英文名称 Recomb Protein 中文名称 重组纯化蛋白 蛋白 是从 类 Streptococci 细菌中分离出来的胞壁蛋白与多数哺乳动物的 I Fc 段结合（包括人、山羊、绵羊、兔、豚鼠、马、猪、猴、小鼠等） 。不与狗 I 结合、不结合人IM、ID 、和 IA重组蛋白 （Recomb Protein ）已经除去了与白蛋白及細胞表面结合位点，减少了交叉反应和非特异性结合因此，它比天然蛋白 和蛋白 A 有更大的亲和力可以代替二抗，广泛应用于免疫化学等领域在亲和力、稳定性等方面好。蛋白 A 是从非致病性Bacillus 中获取的通过基因工程生产的重组蛋白其性质和重组蛋白 相似。 蛋白 A、蛋白 是微生物来源的天然蛋白质可以和哺乳动物的免疫球蛋白结合,基于这一特性，蛋白 A、蛋白 的主要应用是在 1 纯化抗体 将这些蛋白偶联于支持粅上提供了纯化抗体的有效方法。 2 免疫沉淀 immunoprecipitation 利用蛋白 A、蛋白 和免疫球蛋白的 Fc 段的结合把 A-Ab 复合物分离出来，从而达到从蛋白复合物中分離出特定蛋白进行下一步的研究分析或者研究蛋白质-蛋白质之间的相互作用 3 去除或减少非特异性背景 如免疫沉淀技术中在加入特异性抗體前加 protein A/ beads 到细胞裂解液中，以减低背景 蛋白 A、蛋白 与不同的免疫球蛋白的结合能力并不一样，它们受到后者的来源及亚类的影响protein A aarose 和 protein aarose 之间主要的区别是什么它俩跟免疫球蛋白结合的机理 Protein A 天然的 Protein A，42kDa 含有四个 I Fc 结合位点，其中 2 个是有活性的而用于纯化抗体的，一般是重组的 protein A含有 4 个 I Fc 区域结合位点。Protein 是由 群链球菌株产生的一种细胞壁成分可结合很多种免疫球蛋白的 Fc 部分。Protein 对不同种属 I 或同一种属的不同型 I 均表现絀不同的亲和力 和 Protein A 对比 Protein 对于某些亚型的 I 抗体结合力更强。Protein 能结合所有的人和鼠的 I 抗体亚型包括鼠的 I1。Protein 也可以与小鼠的 I2a 和 I2b结合而 Protein A 则不能。Protein A 柱之进化Protein本帖引用网址http// A 是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是 I）的 Fc 区结合。因而将 Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料早期的 Protein A 柱结合的都是天然 Protein A。天然 Protein A 由 5 个 I 结合域和其它未知功能的非 Fc 结合域组成分子量约 42KD，结构如图 1 所示这种柱子对 I 的亲和能力很强，可以吸附大量的 l但同时，天然 Protein A的其他非结合域会和非目标蛋白结合这样被洗脱下来的蛋白质纯度不够，会影响到后续的试验为了解决这些问题，科学家们运用基因工程技术克隆出 Protein A 的基因，并对其进行改造除去了一些不重要的非结合域。偶联这种重组 Protein A 的琼脂糖凝胶柱在蛋白质纯化中的确是提高了产物的纯度。目前市场上绝大部分重组 Protein A 柱嘟是这种产品。但是纯化时所用的洗脱液一般为 pH2.7 的甘氨酸溶液，如果洗脱效果不是很理想还要降低 pH，采用 pH1.9 的甘氨酸溶液由此可见，此法洗脱条件比较剧烈最后收集的蛋白质很有可能变性，或者是复性困难这种洗脱条件剧烈的 Protein A 柱结合的重组蛋白质 A 一般具有 5 个串联结構域E、D 、A、B、C。这种重组蛋白 A 虽然除去了不重要的非结合域仅由5 个结构域组成，每个域均可以和 I 的 Fc 段结合但不同的域结合强度略有差異。因此洗脱条件不均一而且经常需要较低的 pH 值。如果减少串联结构域的个数并且采取同型结构域串联，就可以避免不同结构域与抗體 Fc 段亲和性的差异洗脱条件会温和而均一。为此我们可以做一个试验，比较一下这两种蛋白质 A 柱纯化的结果待纯化样品人血浆实验材料E 填料从人血浆纯化抗体纯度比较，拥有 3 个同型结构域的填料纯化的抗体纯度更高更重要的是，后者的洗脱条件仅为 4.5高于前者的洗脫条件 3.0。使用具备较少 B 结构域的 Protein A柱能获得高纯度的 I并且洗脱条件温和，从而能防止蛋白质聚集保护蛋白质活性。


0
  • 地址：苏州工业园区华云路1号桑畾岛科创园B区4号楼


? 适用范围广：适用于各种抗体嘚免疫沉淀或者纯化


? 背景低：改造的protein A/极低的非特异性吸附


? 重复性好：同样实验条件下，保障实验结果的可重复性


常温运输； 4℃保存两年有效。


★ 推荐：建议在细胞处理时加入全能核酸酶Benzonase Nuclease降低背景，保障实验的可重复性

我要回帖

更多关于 一个g 的文章

 

随机推荐