APPLICATION OF LUCIDE GANODERMA AND GINSENG MEDICINAL MYCOPLASM IN PREPARING DRUGS FOR TREATING LUNG CANCER
WIPO Patent Application WO/
An application of lucide ganoderma and ginseng medicinal mycoplasm in preparing drugs for treating lung cancer. The lucide ganoderma and ginseng medicinal mycoplasm takes the ginseng as a base material and the lucide ganoderma as a strain, and is obtained through bidirectional solid fermentation. It contains ginsenoside Rg1, Rb1, Re, Rg3, Rh1 and the like, further contains ingredients such as ginseng polysugar, and ganoderan, and can be used for preparing drugs for treating lung cancer.
Inventors:
QIU, Zhidong (No.1035, Boshuo Road Jingyue Distric, Changchun Jilin 7, 130117, CN)
Application Number:
Publication Date:
10/24/2013
Filing Date:
01/18/2013
Export Citation:
QIU, Zhidong (No.1035, Boshuo Road Jingyue Distric, Changchun Jilin 7, 130117, CN)
International Classes:
A61K36/258; A61K36/074; A61P35/00
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Domestic Patent References:
Foreign References:
CNACNACNACNACN1105594A
Attorney, Agent or Firm:
UNITALEN ATTORNEYS AT LAW (7th Floor, Scitech PlaceNo.22, Jian Guo Men Wai Ave., Chao Yang District, Beijing 4, 100004, CN)
权 利 要 l、 灵芝人参药性菌质在制备治疗肺癌的药物中的应用。
2、 根据权利要求 1所述的应用， 其特征在于， 所述灵芝人参药性菌质按 照以下方法进行预处理：
向灵芝人参药性菌质加入水或乙醇提取，回收水或乙醇后进行浓缩、千燥、 粉碎， 得到灵芝人参药性菌质粉。
3、 根据权利要求 2所述的应用， 其特征在于， 所述水的重量为所述灵芝 人参药性菌质重量的 6?8倍。
4、 根据权利要求 2所述的应用， 其特征在于， 所述乙醇的重量为所述灵 芝人参药性菌质重量的 10%?90%。
Description:
灵芝人参药性菌质在制备治疗肺癌的药物中的应用
本申请要求于 2012年 4月 18日提交中国专利局、申请号为 20? 2 、 发明名称为 "灵芝人参药性菌盾在制备治疗肺癌的药物中的应用"的中国专利 申请的优先权， 其全部内容通过引用结合在本申请中。
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种灵芝人参药性菌质在制备治 疗肺癌的药物中的应用。
肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤， 绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上 皮， 故亦称支气管肺癌。 近 50多年来， 世界各国特别是工业发发达国家， 肺 癌的发病率和病死率均迅速上升，死于癌症的男性病人中肺癌已居首位。因此， 对肺癌进行有效治疗是目前的研究热点之一。
目前， 现有技术公开了多种用于治疗肺癌的药物， 如 B. Rosenborg等发现 的顺铂， 顺铂是癌症治疗的常用化学药物， 对肺癌、 鼻咽癌、 卵巢癌、 前列腺 癌等多种实体肿瘤均能显示疗效， 对肺癌具有较高的疗效。 但是， 顺铂是中心 以二价铂通两个氯原子和两个氨分子结合的重金属络合物，使用时会出现骨髓 抑制、 胃肠道反应、 腎脏毒性、神经毒性、过敏反应、 电解质紊乱等不良反应， 其用法及用量都存在诸多限制。
与顺铂等化学合成类药物相比， 中药具有毒性小、安全性高等优点而广泛 用于癌症的治疗中， 如黄芪、 白花蛇舌草、 茯苓、 白术、 川芎、 甘草、 红参、 女贞子、 三七、 当归、 大黄、 桃仁等均可用于治疗癌症。 其中， 参一胶囊是采 用生物酶提取转化技术提取红参中的人参皂苷 Rg3 制备的胶囊剂， 其具有培 元固本、 补益气血的功效， 可配合化疗用药， 提高基体免疫能力， 改善肿瘤患 者的气虚症状， 有助于提高原发性肺癌、 肝癌的功效。 虽然参一胶嚢的毒副作 用较小， 但是其需要采用化学水解、 酶水解、 微生物发酵等方法制备， 工艺过 程较为繁瑣， 对反应条件及产物结构不易控制， 且对环境污染较大。
申请号为 .0 的中国专利公开了一种以人参作为基质， 以灵 芝作为菌种经过较为简单的默向固体发酵得到的灵芝人参药性菌质，该灵芝人 参药性菌质不仅含有传统人参的有效成分， 而且含有灵芝的有效成分， 不仅毒 性极低， 而且有助于改善睡眠、 促进生长发育。 但是， 目前并没有任何文献公 开灵芝人参药性菌质在治疗肿瘤方面的应用， 尤其是在治疗肺癌方面的应用。 发明内客
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种灵芝人参药性菌质在 制备治疗肺癌的药物中的应用， 其疗效较高且毒副作用较小。
本发明提供了一种灵芝人参药性菌质在制备治疗肺癌的药物中的应用，所 述灵芝人参药性菌质为以人参为基质、 以灵芝为菌种， 经过双向固体发酵后得 到， 具体过程如下：
将人参粉碎后加水润湿， 灭菌后得到发酵基质， 加水的重量为人参千重的 100%? 150%， 所述润湿的时间为 61！? 12h；
将灵芝菌种活化后进行扩大培养， 得到发酵菌种；
将所述发酵菌种接种于发酵基质中， 在 24°C?28°C、 避光的条件下进行双 向固体发酵 10天? 20天。
釆用上述方法制备得到的灵芝人参药性菌质中含有人参皂苷 Rgl、 Rb Re、 Rg3、 Rlil等多种人参皂苷， 还含有人参多糖、 灵芝多糖等成分， 现有技 术公开其无毒性， 有助于改善睡眠。 发明人研究发现， 所述灵芝人参药性菌质 还可以用于制备治疗肺癌的药物， 效果与顺铂、 参一胶嚢等药物相当， 优于灵 芝、 人参和人参加灵芝。 灵芝人参药性菌质及其制备方法在申请号为 .0的中国专利文献中有详细阐述， 本发明不再赘述。
为了提高灵芝人参药性菌质对肺癌的治疔效果，本发明优选对所述灵芝人 参药性菌质按照以下方法进行预处理：
向灵芝人参药性菌质加入水或乙醇提取，回收水或乙醇后进行浓缩、千燥、 粉碎， 得到灵芝人参药性菌质粉。
本发明优选以水或乙醇为溶剂提取灵芝人参药性菌质的有效成分，本发明 对所述提取过程没有特殊限制， 本领域技术人员熟知的提取方法即可。在进行 提取时， 所述水的重量优选为所述灵芝人参药性菌质重量的 6?8倍， 更优选为 6.5~7.5倍； 所述乙醇的重量优选为所述灵芝人参药性菌质重量的 10%?90%, 更优选为 20%?80%。 本发明优选对所述灵芝人参药性菌质进行多次提取， 更 优选进行 3次以上的提取，提取完毕后将过滤得到的滤液合并，按照本领域技 术人员熟知的方法回收溶剂、 浓缩、 千燥、 粉碎， 得到灵芝人参药性菌质粉。 得到灵芝人参药性菌质粉后， 以其作为体内治疗药物对小鼠 Lewis肺癌进 行研究， 分别以 0.5g/kg、 1.0g/kg, 2.0g/kg的剂量对小鼠进行灌胃， 同时以空 白組、 模型组、 顺铂组、 参一胶囊组、 人参組、 灵芝组和人参加灵芝组作为对 照， 结果表明， 所述灵芝人参药性菌质对于肺癌的治疗效果与顺铂和参一胶嚢 等药物相当， 优于灵芝、 人参和人参加灵芝。
具体实施方式
将长春中医药大学药用真菌研究所保存的灵芝菌株接种在 PDA斜面培养 基上、 27°C±1 °C时进行培养， 培养 7天得到菌丝体备用；
制作含 2wt°/0葡萄糖、 0.5 %蛋白胨、 0.1wt%酵母粉、 0.15wt%KH2PO4 和 0.1wt%M:gSO4的菌种培养液。取 lOOmL菌种培养液装入 250mL三角瓶中， O.lMPa, 121 °C灭菌 30min。 在无菌室内切取 4块 0.5cmx0.5cm的菌丝体接入 三角瓶的菌种培养液中， 28°C、 150r/min的条件下振荡培养 5天后， 得到含有 菌丝球的种子液；
取 50g无虫蛀、 无霉变的生晒人参粉碎过 60目筛，加 50g水润湿 12h后， 将得到的人参装入 500mL三角瓶中， O.lMPa灭菌 60mm后， 接入 50mL种子 液， 28?时黑暗培养 10天， 得到灵芝人参药性菌质；
向所述灵芝人参药性菌质中加入 8倍重量的水提取 3次，合并滤液， 回收 水， 浓缩、 千燥、 粉碎后得到灵芝人参药性菌质粉。
灵芝人参药性菌质体内对小鼠 Lewis肺癌的抑制作用
2.1实验材料
2.1.1实验动物及分组
雌性 C57BL/6 小鼠， 购于中国科学院上海分院史莱克动物中心， 按体重 随机分为 ?组：
A为空白组、 B为.模型组、 C为阳性药顺铂组、 D为参一胶囊组、 E为灵 芝人参药性菌质低剂量组（ 0.5g/kg ), F为灵芝人参药性菌质中剂量组（ lg/kg ) G为灵芝人参药性菌质高剂量组（2g/kg ), H为人参组（2g kg )， I为灵芝组 ( 2g/kg ), J为人参加灵芝组（2g/kg );
每组' 12只， 每组分为 2笼， 每笼 6只。
2,1 ,2实验试剂
2,1 ,2.1参一胶囊
吉林亚泰制药股份有限公司， 国药准字 Z。 每粒含人参皂苷 Rg3 10mg, 按体表面积折算为小鼠剂量为 8mg/kg， 以蒸馏水配为 0.4mg/mL， 给药 体积 20mL/kg。 小鼠灌胃 400 L/20g体重， 每日一次。
2,1 ,2.2顺铂：
按体表面积一次 20mg/m2， 每只鼠 0.2mg/20g体重， 腹腔注射， 连续 14 天。
取顺铂 16mg/mL， 以无菌水稀释到 lmg/mL , 腹腔注射 0.2mlL 即为 0.2mg/20g体重。
2.1.2.3灵芝人参药性菌盾低剂量组
取 5g实施例 1制备的灵芝人参药性菌质粉溶于 l OOmL无菌水，倍比稀释 到瞧 5g/mL， 小鼠灌胃 40(^L /20g体重， 即为 0,5g/
2.1.2.4灵芝人参药性菌盾中剂量组
取 5g 实施例 1 制备的灵芝人参药性菌质粉溶于 lOOmL 无菌水， 即为 0.05g/mL, 小鼠灌胃 400μ /2( 体重， 即为 l .Og/
2.1.2.5灵芝人参药性菌质高剂量组
取 5g 实施例 1 制备的灵芝人参药性菌质粉溶于 lOOmL 无菌水， 即为 0.05g/mL, 小鼠灌胃 40(^L /20g体重， 上下午各灌胃一次即为 2g/
2丄 2.6人参组
取 5g人参细粉溶于 lOOmL无菌水， 即为 0.05g/mL， 小鼠灌胃 400μ /2( 3/4
体重， 上下午各灌胃一次即为 2g/
2丄 2,7灵芝组
取 5g灵芝细粉溶于 lOOmL无菌水， 即为 0,05g/mL， 小鼠灌胃 400μ?2(% 体重， 上下午各灌胃一次即为 2g/
2丄 2,8人参加灵芝组
取 2.5g 灵芝细粉和 2,5g 人参细粉混合后溶于 lOOmL 无菌水， 即为 0.05g/mL, 小鼠灌胃 40(^L/20g体重， 上下午各灌胃一次即为 2g/kg。 2.1 .3实验设备及材料
电子天平： 德国赛昂纳斯；
灌胃管： 厦门大学实验动物中心提供；
无菌一次性注射器： 购自厦门大学医学院仓库；
普通饲料： 由厦门大学医学院动物中心提供；
无菌手术刀： 厦门大学医学院实验动物中心提供；
流式细胞仪： 分选型流式细胞仪， 厦门大学医学院中心实验室提供； Elispot试剂盒： 深圳达科为公司预包被板；
CD4抗体： 购自 eBiokgend公司， FITC标记；
CD8抗体： 购自 eBioscience公司， PE标记。
2.2实验方案
2.2.1荷瘤动物模型的建立
取传代后 14天的 Lewis肺癌瘤源小鼠， 脱颈处死， 固定于鼠板上， 常规 消毒，于超净工作台中，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜和坏死组织， 在无菌平皿中剪碎， 置组织研磨器中加 4°C生理盐水轻轻研磨， 过滤， 制成瘤 细 I包悬液， 调整细胞浓度为 1 X 107/mL。
将上述动物分组并给予相应药物 5天后， 除 A组外， 其他各组小鼠均于 右腋部皮下注射上述瘤细胞悬液 0.2mL以建立荷 Lewis肺癌动物模型。接种瘤 细胞次日开始继续灌胃给予相应药物， C组腹腔注射给药， 每天一次， 连续 14天， 每天观察小鼠饮食及肿瘤生长情况。 末次灌胃给药后 24h， 小鼠称重， 处死， 评价各组药物的抗肿瘤活性。
2.2.2观察指标
观察胂瘤重量变化，评价灵芝人参药性菌质体内对胂瘤生长的影响，确定 其体内的抗肿瘤活性， 同时通过观察动物一般表现、体重变化及用药后动物的 胸腺和脾脏 肝脏重量的改变，初步评价药物的潜在的一般毒性及其对动物免 疫功能的影响， 肿瘤生长抑制率和脏器指数分别按照以下公式计算：
模型组瘤重 给药组瘤重 ι ηΛ
肿瘤生长抑制率 （％) = 模型组瘤重 脏器 3/4 量（mg) ι η
τττ : ^x lO
脏器指数 （mg/lOg体重） = 体重（g)
检测脾脏的 CD4、 CD8细胞的比值， 以初步判断对免疫细胞的影响； 检测脾脏 CTL (杀伤性 T细胞的数量） 的产生情况。
2.2.3实验步骤：
第 1天至第 5天： A组与 B组灌胃蒸馏水 400 L/20g; D组灌胃 0.4mg/mL、 40(^L/20g; G组灌胃 0.05g/mL， 上 T午各 40(^L/20g; F组灌胃 0.05g/mL、 400μΙ/2( 3/4 ; E组灌胃 0.025g/mL、 400 L/20g， H:组、 ?组、 J组灌胃 0.05g/mL， 上下午各 40(^L/20g。
第 6天： 给除 A组以外的小鼠接种肿瘤。
第 ?天至第 25天： A组与 B组继续灌以蒸馏水 400 :L/20g， C组腹腔注 射 0.1mg/mL， 200μ /20g; D组灌胃 0.4mg/mL, 400μ /20g; G组灌胃 0.05g/mL, 上下午各 400μ /20g; F组灌胃 0.05g/mL、 400μΕ/20 ; Ε组灌胃 0.025g/mL、 40(^L/20g; H组 I组、 J组灌胃 0.05g/mL、 上下午各 400μ?2( 3/4 。
第 26天： 处死小鼠， 取肿瘤、 胸腺、 脾脏、 肝脏， 并分别称重， 检测脾 脏 CD4 CD8细胞的比值， 检测脾脏 CTL的产生情况。
2.3实验结果
2.3.1肿瘤抑制生长率结杲
末次灌胃给药后 24h， 小鼠称重， 处死， 取各组小鼠的肿瘤、 肝脏、 脾脏、 胸腺并分别称重，并按照上文所述的公式计算各组小鼠的肿瘤抑制生长率和脏 器指数， 结杲参见表' 1.， 表 1为小鼠脏器指数及肿瘤抑制生长率结杲。 01
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C990.0/CT0ZN3/X3d S88SSl/CT0Z OAV 表 2脾脏 CD4、 CD8细胞数量及比值结果
组别 CD4细包比例 （％) CD8细包比例 （％) CD4/ CD8
A 20.60±2,07 13.36±1.61 1.54±0.06 B 11.79土 0.65s 6.28土 0.53 1.88±0.0958 C 21.40±1.75Δ 13.87±0,40Δ 1.54士 0.132Δ D 19.59±0,54Δ 10.97±0.93κΔ L79±0.179s E 19.04土 0.52Δ 10.64±0.80κΔ 1.79±0.083s F 17.13±0.46 3/4 Δ 11.64±0.77*Δ 1.48±0.084Δ G 22.57±0.89 3/4 Δ 15.22±0.87 3/4 Δ 1.48±0.056Δ H 16.98±0.35 3/4 Δ 11.03±0.69*Δ 1.54±0.057Δ I 17.02±0.43 3/4 Δ 10.77±0.72 3/4 Δ 1.58±0.077Δ J 17.56±0.54 3/4 Δ 11.55±0.80*Δ 1.52±0.062Δ 表 2中， *表示与空白组比较 Ρ & 0,05， Δ表示与模型组比较 Ρ & 0.05。
由表 2可知， 给药各组小鼠脾脏的 CD4和 CD8阳性细胞数比模型组明显 增多， 灵芝人参药性菌质高剂量组增加量最多， 灵芝人参药性菌质低剂量组与 参一胶囊组、 人参组、 灵芝组及人参加灵芝组增加量相当。
2.3.3脾脏 CTL结果
用 ELISPOT检测脾脏 CTL， 即杀伤性 T细胞的产生情况， 结杲参见表 2， 表 3为脾脏 CTL检测结果。
表 3 脾脏 CTL检测结杲
组别 CTL细胞数量
B 3.75土 0.5
C 24,5±5.92*
D 8.0土 2.0s
E 9±0.82a
F 15.5±3.32sA
G 23.5±3.87'Δ
H 10.8±3.2ΓΔ
I 11.6±2.58 3/4 Δ
J 12.3±3.03'Δ
表 3中， *表示与空白组比较 Ρ & 0,05， Δ表示与模型组比较 Ρ & 0.05。 由表 3可知， 给药各组小鼠脾脏的 CTL细胞产生增多， 其中灵芝人参药 性菌质高剂量组 CTL细胞产生增量与顺铂组相当， 高于其他组； 灵芝人参药 性菌质低剂量組与参一胶嚢组、 人参组、 灵芝组及人参加灵芝组增加量相当。
由上述实施例可知， 灵芝人参药性菌质在体内有抗小鼠成瘤的作用， 可调 节 CD4、 CD8、 CTL 细胞产生， 且不会产生肝脏、 驹腺、 脾脏毒性， 其效杲 与顺铂、 参一胶囊等药物效果相当， 优于灵芝、 人参和人参加灵芝。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指 出， 对于本技术领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还 可以对本发明进行若千改进和修饰 ,这些改进和修饰也落入本发明权利要求的 保护范围内。
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肝癌晚期可以吃红参吗？
健康咨询描述：
肝癌晚期，动手术的地方肿起来了，疼痛，呕吐不想吃东西
曾经的治疗情况和效果：
曾今手术，几天做了两次陀螺刀放射治疗，效果不佳病情严重现已结束治疗回家了
想得到怎样的帮助：减轻痛苦，延缓生命
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擅长: 普胸疾病的诊断及外科治疗，如气胸、肺大泡、肺癌、食
微信扫描关注直接与我沟通已扫8530次
&&&&&&病情分析：&&&&&&1,您好！根据描述，主要问题是晚期肝癌的治疗问题，诊断应该是明确的，&&&&&&指导意见：&&&&&&主要是治疗的问题，建议：1，保持心情舒畅，2，可以考虑服用肝福乐胶囊、大黄蛰虫丸、配合营养支持治疗、有一定效果，有疼痛严重的按照阶梯止痛药物应用方法用药，可以有效地减轻疼痛症状，3，也可以考虑服用中医药治疗，效果较好，
我不知道配合什么样的营养，都说有营养的东西癌细胞长得更快，现在想用中药，却又不知道该从哪里下手。他能吃红参吗？
微信扫描关注直接与我沟通已扫8499次
&&&&&&你好，像患者这种情况建议可采用生物免疫治疗，和传统的手术、放疗、化疗相比，生物免疫治疗能够全身识别锁定癌细胞，更加精确地做到“围追堵截”，而不是“杀敌一千，自损八百”的老套路。同时能够有效抑制体内处于静止期的隐匿癌细胞继续生长，阻止肿瘤的扩散转移，从而整体上明显降低肿瘤的复发转移率。此外，接受生物免疫治疗后，患者常可出现全身疼痛减轻；肿瘤症状缓解；多项肿瘤指标下降，恢复到正常水平；自身免疫功能得到明显提升，受损的生理机能得到修复；食欲、睡眠、体重等生存质量得到改善；病情稳定，逐渐康复，形成瘤与人“和平共处”的情况。
疾病百科| 肝癌
挂号科室：肝胆外科、肿瘤科
温馨提示：肝癌的病人要注重生活护理和心理护理，端正心态，正确客观对待。注意饮食，给予易消化、要给低脂肪的食物，提高病人的生命质量。
肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五...
好发人群：中老年男性
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