工具类服务
编辑部专用服务
作者专用服务
国标法测定植酸酶活性存在问题的探讨
利用国标法测定植酸酶活性过程中发现,植酸钠底物溶液pH为6.48,高于酶活性单位定义中pH 5.5.为进一步探讨植酸钠底物溶液pH对植酸酶活性的影响,本试验研究了调节与不调节植酸钠底物溶液pH对样品空白的吸光值以及植酸酶活性的影响.结果表明:将植酸钠溶液pH由6.48调至5.5对酶活测定中的样品空白无显著影响(P＞0.05),但极显著影响植酸酶活性(P＜0.01),未调节pH组植酸酶活性仅相当于调节pH组的66%,利用不同的酸调节植酸钠溶液pH,对植酸酶活性无显著影响(P＞0.05).
作者单位：
河北农业大学山区研究所,071001
中国农业科学院畜牧研究所
年，卷(期)：
机标分类号：
在线出版日期：
基金项目：
国家自然科学基金
本文读者也读过
相关检索词
万方数据知识服务平台--国家科技支撑计划资助项目（编号：2006BAH03B01）(C)北京万方数据股份有限公司
万方数据电子出版社饲用植酸酶酶活的测定_青年鸡吧_百度贴吧
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&签到排名：今日本吧第个签到，本吧因你更精彩，明天继续来努力！
本吧签到人数：0可签7级以上的吧50个
本月漏签0次！成为超级会员，赠送8张补签卡连续签到：天&&累计签到：天超级会员单次开通12个月以上，赠送连续签到卡3张
关注：1,044贴子：
饲用植酸酶酶活的测定
在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠，生成和衍生物，在酸性溶液中，用钒处理会生成黄色的[(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3]复合物，在波长415nm下进行比色测定。 2.活性单位的定义样品在植酸钠浓度为5.0mmol/l、温度37℃、pH值5.5的条件下，每分钟从植酸钠中释放1μmol无机磷，即为一个活性单位，以U表示。3.仪器和设备
4.试剂本标准所用试剂和水在无注明其它要求时，均指和GB/T6682规定的三级水。清洗试验用容器不要用含磷清洗剂。5.试剂配制5.1 缓冲液(I) ，c(CH3C00Na·3H2O)为0.25 mol/l称取20.52g无水钠于1 000 ml容量瓶中，加入900 ml水溶解，用调节pH至5.50士0.01，并用蒸馏水定容至1000 ml，室温下存放2个月有效。5.2 缓冲液(Ⅱ)，c(CH3C00Na·3 H20)为0.25 mol/I称取34.02g三水钠，0.5gTritonX-100， 0.5g牛血清蛋白(BSA)于1000ml容量瓶中，加入900ml水溶解，用调节pH至5.00 士0.01，并用蒸馏水定容至1000ml，室温下存放2个月有效。5.3 植酸钠溶液，c(C6H6O24P6Na12)为7.5 mmol/l称取0.6929g六磷酸钠(C6H6O24P6Na12)于100 ml容量瓶中，用缓冲液(5.1)溶解并定容至刻度，现用现配(实际反应液中的最终浓度为5.0mmol/l)。5.4 溶液1+2水溶液。5.5 100g/1溶液称取l0g〔(NH4)5Mo〕于100ml容量瓶中，加入l.0 ml(25%)用水溶解定容至刻度。5.6 2.35g/l溶液称取0.235g(NH4VO3)于100ml，棕色容量瓶中，加入2ml溶液(5.4)，用水溶解定容至刻度。避光条件下保存一周有效。 5.7 颜色终止液移取2份溶液(5.4)，1份溶液(5.5)，1份溶液(5.6)混合后使用，现用现配。6.试样制备取有代表性样品，用四分法将试样缩分至200g，产品不需粉碎，和添加剂预混合饲料需粉碎通过0.45mm标准筛，装入密封容器，防止试样成分变化。7.测定步骤7.1绝对法(仲裁法)7.1.1准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准(A.4.11)于100ml容量瓶中，用缓冲液(A.5.1)溶解，并定容至100m L，浓度为50.0 mmol/l。按表A1的比例稀释成不同浓度，与试样一起反应测定，以无机磷浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，列出直线回归方程(y=ax+b )表Al标准序号 稀释量/ml 浓度（mmol/l) →10.5→20.5→40.5→80.5→16 .
7.1.2试样溶液的制备按照表A2中建议的称样量称取试样两份，精确至0.0001g，置于100ml容量瓶中，加入约70 ml缓冲液(A.5.2)，一个磁力棒，在磁力搅拌器上高速搅拌30 min，用乙酸缓冲液(A.5.2)定容至刻度(减去磁力棒的体积)。摇匀，在离心机上以4000 r/min离心10 min。分取不同体积的上清液用乙酸缓冲液(A.5.2)稀释，使样液浓度保持在0.4 U/ml左右，待反应。注：根据样品活性的不同，建议称样量见表A2。表A2
建议称样量活性/（U/g） 称样量/g ～1 ～1 500 1～2 300 1～2 1～0.5 5～10 建议在测定样品时附加一个已知活性的参考样，便于检验整个操作过程是否有偏差。7.1.3反应取10ml试管按下面的反应顺序进行操作，在反应过程中，从加入底物(A.5.3)开始，向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致，37℃水解30min。反应步骤及试剂、溶液用量见表A3表A3
反应步骤及试剂、溶液用量反应顺序 样品、标准 样品空白
(标准空白) 1.加缓冲液(A.5.1)
1.8ml 1.8ml
6ml 2.加人待反应液 0.2ml 0.2ml - 3.混合 √ √ - 4.37℃预热5min
√ — - 5 依次加人底物(A.5.3) 4ml 4ml（第二步） - 6.混合 √ √ - 7.37℃水解30min √ — - 8.依次加人终止液(A.5.7)
4ml 4ml（第一步） 4 9.混合 √ √ √ 总体积 10ml 10ml 10ml 7.1.4样品测定反应后的试样在室温下静置10imn，如出现混浊需在离心机上以4000r/min离心10min，上清液以的空白调零，在分光光度计415nm波长处测定样品空白(A。)和样品溶液(A)的吸光值，A一A。为实测吸光值。用直线回归方程计算的活性。7.2相对法7.2.1准确称取一定量的标准(4.10)，精确至0.0001g，于50ml容量瓶中，用0.25mol/l缓冲液(5.1)溶解并定容至刻度。做两次稀释使植酸酶活性大约在0.05U/mL左右，当日配制。将上述标准液再按表A4比例用缓冲液(5.1)进行稀释，需要准确计算植酸酶的浓度。然后与样品一起进行反应测定。以植酸酶浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，列出直线回归方程(y=ax＋b)。
表A4标准序号 最终稀释量/ml 大约酶活力(U/ml) →5.01.0→5.01.5→5.02.0→5.02.5→5.03.0→5.03.5→5.0 00.00.5 7.2.2样品溶液的制备以下操作步骤按7.2.1进行，使样液浓度保持在0.02U/ml左右。待反应注 :添加剂预混合饲料样品需采用缓冲液(5.2)。7.2.3反应取10ml试管按下面的反应顺序进行操作，在反应过程中，从加入底物(5.3)开始，向每支试管加入试剂的时间间隔要绝对一致，37℃水解30min.反应步骤及试剂、溶液用量见表A5。表A5反应顺序 样液 样液空白 标准1) 1.加人待反应液 2 ml 2ml 2ml 2. 37℃ 预热5min √ √ √ 3.依次加人底(A.5.3) 4 ml 4 ml(第2步) 4 ml 4.混合 √ √ √ 5. 37℃水解30 min √ √ √ 6.依次加人终止液(A.5.7) 4 ml 4 ml(第1步) 4ml 7.混合 √ √ √ 总体积 10ml 10 ml 10 m1 1) 标准空白加2ml缓冲液(A.5.1) 7.2.4样品测定反应后的试样在室温下静置10min，如出现混浊需在离心机上以4000r/min离心10min，上清液以的空白调零，在分光光度计415nm波长处测定样品空白(A。)和样品溶液(A)的吸光值，A-A。为实测吸光值。用直线回归方程计算的活性。8结果计算和表示8.1活性U按式(1)和式(2)计算8.1.1绝对法
U= C/(m×30)×F
…………………………(1)式中:U一试样中的活性，U/g；C一根据实际样液的吸光值由直线回归方程计算出的酶活性，U；F一试样溶液反应前的总稀释倍数；m一试样质量，g；30--反应时间，min.8.1.2相对法
…………………………(2)式中:U—试样中的活性，U/g；C—根据实际样液的吸光值由直线回归方程计算出的酶活性，U；F一试样溶液反应前的总稀释倍数；m一试样质量，g。8.2结果表示两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留整数。8..3 重复性同一样品两个平行测定值的相对偏差，产品不大于8%。添加植酸酶的各种饲料样品不大于10%。
谁卖天然酵素酶？
容易出现假阴？！6周和...
一年比一年高呀我肝也没...
阴 请问能排除多少 看了...
9年，一直吃阿德福韦酯...
Hello,这里是小酶，新人...
吃药第三十天。今天体检...
贴吧热议榜
使用签名档&&
保存至快速回贴何为空白溶液,为什么在制作标准曲线时空白溶液和测定样品时的空白溶液不完全一样
为您推荐：
其他类似问题
空白溶液是为了排出溶液本身 引起的误差!故为空白!实际结果为测试样减空白样 样品线减空白溶液的线
扫描下载二维码饲用植酸酶酶活的测定_养殖技术吧_百度贴吧
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&签到排名：今日本吧第个签到，本吧因你更精彩，明天继续来努力！
本吧签到人数：0可签7级以上的吧50个
本月漏签0次！成为超级会员，赠送8张补签卡连续签到：天&&累计签到：天超级会员单次开通12个月以上，赠送连续签到卡3张
关注：4,380贴子：
饲用植酸酶酶活的测定
在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠，生成和衍生物，在酸性溶液中，用钒处理会生成黄色的[(NH4)3PO4NH4VO3·16MoO3]复合物，在波长415nm下进行比色测定。 2.活性单位的定义样品在植酸钠浓度为5.0mmol/l、温度37℃、pH值5.5的条件下，每分钟从植酸钠中释放1μmol无机磷，即为一个活性单位，以U表示。3.仪器和设备
4.试剂本标准所用试剂和水在无注明其它要求时，均指和GB/T6682规定的三级水。清洗试验用容器不要用含磷清洗剂。5.试剂配制5.1 缓冲液(I) ，c(CH3C00Na·3H2O)为0.25 mol/l称取20.52g无水钠于1 000 ml容量瓶中，加入900 ml水溶解，用调节pH至5.50士0.01，并用蒸馏水定容至1000 ml，室温下存放2个月有效。5.2 缓冲液(Ⅱ)，c(CH3C00Na·3 H20)为0.25 mol/I称取34.02g三水钠，0.5gTritonX-100， 0.5g牛血清蛋白(BSA)于1000ml容量瓶中，加入900ml水溶解，用调节pH至5.00 士0.01，并用蒸馏水定容至1000ml，室温下存放2个月有效。5.3 植酸钠溶液，c(C6H6O24P6Na12)为7.5 mmol/l称取0.6929g六磷酸钠(C6H6O24P6Na12)于100 ml容量瓶中，用缓冲液(5.1)溶解并定容至刻度，现用现配(实际反应液中的最终浓度为5.0mmol/l)。5.4 溶液1+2水溶液。5.5 100g/1溶液称取l0g〔(NH4)5Mo〕于100ml容量瓶中，加入l.0 ml(25%)用水溶解定容至刻度。5.6 2.35g/l溶液称取0.235g(NH4VO3)于100ml，棕色容量瓶中，加入2ml溶液(5.4)，用水溶解定容至刻度。避光条件下保存一周有效。 5.7 颜色终止液移取2份溶液(5.4)，1份溶液(5.5)，1份溶液(5.6)混合后使用，现用现配。6.试样制备取有代表性样品，用四分法将试样缩分至200g，产品不需粉碎，和添加剂预混合饲料需粉碎通过0.45mm标准筛，装入密封容器，防止试样成分变化。7.测定步骤7.1绝对法(仲裁法)7.1.1准确称取0.6804g在105℃烘至恒重的基准(A.4.11)于100ml容量瓶中，用缓冲液(A.5.1)溶解，并定容至100m L，浓度为50.0 mmol/l。按表A1的比例稀释成不同浓度，与试样一起反应测定，以无机磷浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，列出直线回归方程(y=ax+b )表Al标准序号 稀释量/ml 浓度（mmol/l) →10.5→20.5→40.5→80.5→16 .
7.1.2试样溶液的制备按照表A2中建议的称样量称取试样两份，精确至0.0001g，置于100ml容量瓶中，加入约70 ml缓冲液(A.5.2)，一个磁力棒，在磁力搅拌器上高速搅拌30 min，用乙酸缓冲液(A.5.2)定容至刻度(减去磁力棒的体积)。摇匀，在离心机上以4000 r/min离心10 min。分取不同体积的上清液用乙酸缓冲液(A.5.2)稀释，使样液浓度保持在0.4 U/ml左右，待反应。注：根据样品活性的不同，建议称样量见表A2。表A2
建议称样量活性/（U/g） 称样量/g ～1 ～1 500 1～2 300 1～2 1～0.5 5～10 建议在测定样品时附加一个已知活性的参考样，便于检验整个操作过程是否有偏差。7.1.3反应取10ml试管按下面的反应顺序进行操作，在反应过程中，从加入底物(A.5.3)开始，向每支试管中加入试剂的时间间隔要绝对一致，37℃水解30min。反应步骤及试剂、溶液用量见表A3表A3
反应步骤及试剂、溶液用量反应顺序 样品、标准 样品空白
(标准空白) 1.加缓冲液(A.5.1)
1.8ml 1.8ml
6ml 2.加人待反应液 0.2ml 0.2ml - 3.混合 √ √ - 4.37℃预热5min
√ — - 5 依次加人底物(A.5.3) 4ml 4ml（第二步） - 6.混合 √ √ - 7.37℃水解30min √ — - 8.依次加人终止液(A.5.7)
4ml 4ml（第一步） 4 9.混合 √ √ √ 总体积 10ml 10ml 10ml 7.1.4样品测定反应后的试样在室温下静置10imn，如出现混浊需在离心机上以4000r/min离心10min，上清液以的空白调零，在分光光度计415nm波长处测定样品空白(A。)和样品溶液(A)的吸光值，A一A。为实测吸光值。用直线回归方程计算的活性。7.2相对法7.2.1准确称取一定量的标准(4.10)，精确至0.0001g，于50ml容量瓶中，用0.25mol/l缓冲液(5.1)溶解并定容至刻度。做两次稀释使植酸酶活性大约在0.05U/mL左右，当日配制。将上述标准液再按表A4比例用缓冲液(5.1)进行稀释，需要准确计算植酸酶的浓度。然后与样品一起进行反应测定。以植酸酶浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，列出直线回归方程(y=ax＋b)。
表A4标准序号 最终稀释量/ml 大约酶活力(U/ml) →5.01.0→5.01.5→5.02.0→5.02.5→5.03.0→5.03.5→5.0 00.00.5 7.2.2样品溶液的制备以下操作步骤按7.2.1进行，使样液浓度保持在0.02U/ml左右。待反应注 :添加剂预混合饲料样品需采用缓冲液(5.2)。7.2.3反应取10ml试管按下面的反应顺序进行操作，在反应过程中，从加入底物(5.3)开始，向每支试管加入试剂的时间间隔要绝对一致，37℃水解30min.反应步骤及试剂、溶液用量见表A5。表A5反应顺序 样液 样液空白 标准1) 1.加人待反应液 2 ml 2ml 2ml 2. 37℃ 预热5min √ √ √ 3.依次加人底(A.5.3) 4 ml 4 ml(第2步) 4 ml 4.混合 √ √ √ 5. 37℃水解30 min √ √ √ 6.依次加人终止液(A.5.7) 4 ml 4 ml(第1步) 4ml 7.混合 √ √ √ 总体积 10ml 10 ml 10 m1 1) 标准空白加2ml缓冲液(A.5.1) 7.2.4样品测定反应后的试样在室温下静置10min，如出现混浊需在离心机上以4000r/min离心10min，上清液以的空白调零，在分光光度计415nm波长处测定样品空白(A。)和样品溶液(A)的吸光值，A-A。为实测吸光值。用直线回归方程计算的活性。8结果计算和表示8.1活性U按式(1)和式(2)计算8.1.1绝对法
U= C/(m×30)×F
…………………………(1)式中:U一试样中的活性，U/g；C一根据实际样液的吸光值由直线回归方程计算出的酶活性，U；F一试样溶液反应前的总稀释倍数；m一试样质量，g；30--反应时间，min.8.1.2相对法
…………………………(2)式中:U—试样中的活性，U/g；C—根据实际样液的吸光值由直线回归方程计算出的酶活性，U；F一试样溶液反应前的总稀释倍数；m一试样质量，g。8.2结果表示两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留整数。8..3 重复性同一样品两个平行测定值的相对偏差，产品不大于8%。添加植酸酶的各种饲料样品不大于10%。
谁卖天然酵素酶？
容易出现假阴？！6周和...
一年比一年高呀我肝也没...
阴 请问能排除多少 看了...
9年，一直吃阿德福韦酯...
Hello,这里是小酶，新人...
吃药第三十天。今天体检...
贴吧热议榜
使用签名档&&
保存至快速回贴