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【求助】蛋白晶体做X射线衍射为什么总是没有衍射点
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这个帖子发布于4年零89天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近做一个蛋白酶的结晶，几个条件长了晶体，可是做X射线衍射是总是没有衍射点，有什么因素会造成这种情况呢?请大家帮忙，谢谢~~
不知道邀请谁？试试他们
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laforet 晶形是什么样的？X射线源是什么？检测设备？之前的晶形是挺规则的长方形，最近长得不太规则，没有固定形状，但是都没有点。X射线源和设备名称我还真不太清楚，大家都用的，X射线源和检测设备会有很大不同吗？
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demontjh 首先确定不是盐晶，盐晶只有低分辨率的点，蛋白晶体不衍射也比较正常，由于晶体本身的质量不高导致，尝试下不同的生长条件和温度，还可以尝试把flexible的region去掉试了挺多条件，在室温下生长了近一个月，不算快了吧？谢谢~~标签是不是也会有影响？我这个是切了GST标签的，如果不切或者加His标签会有改善吗？~~
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laforet 知道的话方便提出一些具体建议，不过盐晶一般是出很强的衍射点，所以你得到的应该是蛋白晶体没错。如果晶体生长不规则的话可能还要优化条件，此外Hampton的那个Additive Screen里面有很多值得尝试的辅助成分，如果能得到一种不同晶形的晶体也许衍射会有改善。目前估计我只有先优化条件了~~谢谢啦~~我在实验室找到了additive screen的kit，我去试试好了~~
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irememberu 好像没有看到楼主确定是不是盐晶。盐晶是不是应该有些点？我这个真是一点儿点都没有~~
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木木苗 敢问楼主问题解决了吗？我遇到了与你同样的问题。。。不过你可以试试蛋白结晶脱水，再试衍射还木有解决，目前还在优化中，请问如何让蛋白结晶脱水，这个有效果吗？~~
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laforet 脱水就是把晶体放在比结晶环境更高渗的条件下泡1-3min然后再测，如果你的保护液是直接在结晶环境里加甘油或者乙二醇的话等于已经脱水了。还有一种类似的低温退火法则是把晶体快速冷却到液氮温度后回升到室温1-3min后再冷却。这两个方法能用的前提是晶体有一定的衍射(5A-10A)，但是明显存在高镶嵌度/多重结构，通过脱水或者退火之类的处理让内部结构更接近于单晶。长知识了~~不过我那个确实是没有衍射，所以还一直再尝试继续优化~~
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laforet 不知道你的蛋白所以没办法分析你的序列是否合适,不过某些蛋白的全长序列是很难得到晶体的.有没有尝试过修饰赖氨酸或者原位酶切?我做的这个蛋白其实已经有结晶了，我是有几个小分子想作为底物制共晶，文献中的条件我都试过了，都不长晶体，所以才自己筛条件，由于文献中都是用全长做的，所以我没考虑修饰赖氨酸~~您做的蛋白是之前没有人做过的是吧？~~
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laforet 我的经验是蛋白质和底物结合后因为吉布斯自由能发生改变，溶解度增加导致结晶比Apo蛋白慢或者更少。可以考虑适当增加蛋白浓度或者在结晶条件里加入少量的离液剂如硫氰酸钠，尿素，盐酸胍等可以促进结晶长知识了~~我试试~~谢谢啦~~
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标题: 蛋白晶体做X射线衍射为何总是没有衍射点
摘要: [蛋白晶体做X射线衍射为何总是没有衍射点] 最近做一个蛋白酶的结晶，几个条件长了晶体，可是做X射线衍射是总是没有衍射点，有什么因素会造成这种情况呢?请大家帮忙，谢谢~~ 关键词:[晶体 衍射 结晶 射线衍射 脱水 序列 赖氨酸 底物]……
最近做一个蛋白酶的结晶，几个条件长了晶体，可是做X射线衍射是总是没有衍射点，有什么因素会造成这种情况呢?请大家帮忙，谢谢~~回复
晶形是什么样的？X射线源是什么？检测设备？
首先确定不是盐晶，盐晶只有低分辨率的点，蛋白晶体不衍射也比较正常，由于晶体本身的质量不高导致，尝试下不同的生长条件和温度，还可以尝试把flexible的region去掉
晶形是什么样的？X射线源是什么？检测设备？ 之前的晶形是挺规则的长方形，最近长得不太规则，没有固定形状，但是都没有点。X射线源和设备名称我还真不太清楚，大家都用的，X射线源和检测设备会有很大不同吗？
首先确定不是盐晶，盐晶只有低分辨率的点，蛋白晶体不衍射也比较正常，由于晶体本身的质量不高导致，尝试下不同的生长条件和温度，还可以尝试把flexible的region去掉 ...
试了挺多条件，在室温下生长了近一个月，不算快了吧？谢谢~~标签是不是也会有影响？我这个是切了GST标签的，如果不切或者加His标签会有改善吗？~~
之前的晶形是挺规则的长方形，最近长得不太规则，没有固定形状，但是都没有点。X射线源和设备名称我还真不太清楚，大家都用的，X射线源和检测设备会有很大不同吗？
知道的话方便提出一些具体建议，不过盐晶一般是出很强的衍射点，所以你得到的应该是蛋白晶体没错。
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如果晶体生长不规则的话可能还要优化条件，此外Hampton的那个Additive Screen里面有很多值得尝试的辅助成分，如果能得到一种不同晶形的晶体也许衍射会有改善。
知道的话方便提出一些具体建议，不过盐晶一般是出很强的衍射点，所以你得到的应该是蛋白晶体没错。
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如果晶体生长不规则的话可能还要优化条件，此外Hampton的那个Additive Screen里面有很多值得尝试的辅助成分，如果能得到一种不同晶形的晶体也许衍射会有改善。
目前估计我只有先优化条件了~~谢谢啦~~我在实验室找到了additive screen的kit，我去试试好了~~
好像没有看到楼主确定是不是盐晶。
好像没有看到楼主确定是不是盐晶。
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盐晶是不是应该有些点？我这个真是一点儿点都没有~~
敢问楼主问题解决了吗？我遇到了与你同样的问题。。。不过你可以试试蛋白结晶脱水，再试衍射
敢问楼主问题解决了吗？我遇到了与你同样的问题。。。不过你可以试试蛋白结晶脱水，再试衍射
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还木有解决，目前还在优化中，请问如何让蛋白结晶脱水，这个有效果吗？~~
还木有解决，目前还在优化中，请问如何让蛋白结晶脱水，这个有效果吗？~~
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脱水就是把晶体放在比结晶环境更高渗的条件下泡1-3min然后再测，如果你的保护液是直接在结晶环境里加甘油或者乙二醇的话等于已经脱水了。还有一种类似的低温退火法则是把晶体快速冷却到液氮温度后回升到室温1-3min后再冷却。
这两个方法能用的前提是晶体有一定的衍射(5A-10A)，但是明显存在高镶嵌度/多重结构，通过脱水或者退火之类的处理让内部结构更接近于单晶。
脱水就是把晶体放在比结晶环境更高渗的条件下泡1-3min然后再测，如果你的保护液是直接在结晶环境里加甘油或者乙二醇的话等于已经脱水了。还有一种类似的低温退火法则是把晶体快速冷却到液氮温度后回升到室温1-3min后再冷却。
这两个方法能用的前提是晶体有一定的衍射(5A-10A)，但是明显存在高镶嵌度/多重结构，通过脱水或者退火之类的处理让内部结构更接近于单晶。
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长知识了~~不过我那个确实是没有衍射，所以还一直再尝试继续优化~~
不知道你的蛋白所以没办法分析你的序列是否合适,不过某些蛋白的全长序列是很难得到晶体的.
有没有尝试过修饰赖氨酸或者原位酶切?
不知道你的蛋白所以没办法分析你的序列是否合适,不过某些蛋白的全长序列是很难得到晶体的.
有没有尝试过修饰赖氨酸或者原位酶切?
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我做的这个蛋白其实已经有结晶了，我是有几个小分子想作为底物制共晶，文献中的条件我都试过了，都不长晶体，所以才自己筛条件，由于文献中都是用全长做的，所以我没考虑修饰赖氨酸~~您做的蛋白是之前没有人做过的是吧？~~
我做的这个蛋白其实已经有结晶了，我是有几个小分子想作为底物制共晶，文献中的条件我都试过了，都不长晶体，所以才自己筛条件，由于文献中都是用全长做的，所以我没考虑修饰赖氨酸~~您做的蛋白是之前没有人做过的是吧？~~
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我的经验是蛋白质和底物结合后因为吉布斯自由能发生改变，溶解度增加导致结晶比Apo蛋白慢或者更少。可以考虑适当增加蛋白浓度或者在结晶条件里加入少量的离液剂如硫氰酸钠，尿素，盐酸胍等可以促进结晶
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电话：021-电子计算机在电子衍射分析中的应用——三、晶体点阵未知情况下单晶电子衍射谱的标定--《金属学报》1977年Z1期
电子计算机在电子衍射分析中的应用——三、晶体点阵未知情况下单晶电子衍射谱的标定
【摘要】：用FORTRAN语言编写了晶体点阵未知情况下标定电子衍射谱的程序。从旋转晶体得出的两张电子衍射底片上选三个衍射斑点,相当于不在一个平面上的三个倒易矢量,构成一个三斜倒易基胞。计算以此为基的一些倒易矢量的长度,从中选三个最短而又不在一个平面上的倒易矢量为初基矢AS(1),AS(2),AS(3),构成倒易空间的Buerger胞。由此即可进一步确定正空间中布喇菲点阵的类型及单胞参数,同时得出这三个衍射斑点的指数。
【作者单位】：
【关键词】：
【正文快照】：
一、HlJ言 已知晶体点阵,标定单晶电子衍射谱是不难的,对于高阶劳厄带、孪晶、取向关系等较为复杂的晶体几何关系,可借助电子计算机进行电子衍射谱的计算和标定〔1〕.在物相分析工作中,晶体点阵类型和单胞参数也是已知的,只不过要在比较多的可能性中选定一个或几个罢了,已有
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