本周三跟大家分享的文献来自《scientific reports》，IF=5.578，文章标题是 A Polyethylene Glycol-Based Method for Enrichment of ExtracellularVesicles（ExtraPEG:用聚乙二醇法浓缩胞外囊泡）。&&&&&& 外泌体是一类由细胞分泌的病毒大小的膜状囊泡，它们携带有蛋白质与核酸，调节着胞内的沟通。目前较常用的外泌体提取方法是differential centrifugation (DC)——差速离心法。也有用试剂盒提取外泌体，但效率均不高。聚乙二醇（PEG）用于浓缩和纯化病毒已经超过50年，因为外泌体与病毒有着较为相似的生物物理特性，因此作者考虑用聚乙二醇来纯化外泌体，并且给出了新的浓缩提纯外泌体的方法。首先，得确定加入的聚乙二醇的最适浓度是多少，因此作者分别选取5%-12%这8个浓度来探究哪个浓度更适合用于提取外泌体。Figure1.聚乙二醇浓缩含有外泌体蛋白的囊泡。(a)运用纳米粒子跟踪分析在所有PEG处理的微粒中进行分析。发现最佳的PEG浓度是12%。(b)不同浓度处理后的获得的微粒大小并没有统计上的差异。(c)检测到蛋白的最佳浓度是6-8%。(d,e)对外泌体蛋白溶解产物进行分析。(f,g)比较溶解产物的蛋白与(h)胎牛血清。Figure 2.PEG法与标准外泌体提取方法的比较。(a)每一种浓缩方法均优于差速离心法。(b)每一种方法得到的微粒大小均与报道的外泌体大小相符。(c) 8% PEG + wash组得到的微粒纯度与DC法相似，但高于商品化的方法。(d) 8% PEG + wash组和12% PEG + wash组的WB结果最显著。(e) 方法和DC法要明显优于商品化方法。(f,g)每一种方法都无法排除血清蛋白的干扰，但8% PEG + wash方法受到的干扰是最小的。Figure 3.PEG能够浓缩高纯度的胞外囊泡。(a)WB常被用于分析无血清培养基的样品纯度。PEG处理后的样品有大量外泌体标记物。(b)考马斯亮蓝染色用于分析蔗糖密度梯度离心法与PEG法分离的蛋白量的比较。(c) 8% PEG + wash方法获得了更高纯度的外泌体。(d)几种方法获得的外泌体大小上无差别。(e)电镜证实该囊泡为外泌体。作者将他们的方法命名为ExtraPEG (Extracellular vesicle PEG-based precipitationprotocol).聚乙二醇为基础的胞外囊泡沉淀法。&Figure 4. ExtraPEG法胞外囊泡蛋白鉴定。对从hela细胞用ExtaPEG法获得的蛋白进行质谱分析，鉴定了519种蛋白。其中97%(499 of 517)被证实为人类胞外囊泡蛋白。此外，95%(492 of 517)早先认为是外泌体来源蛋白。Table 1.用ExtraPEG法从其他体液中浓缩胞外囊泡。Figure 5. ExtraPEG法分离外泌体的效率。(a)HEK293细胞的共焦显微镜图像。细胞用HEK293细胞或稳定表达CD63-GFP的HEK293细胞提取的外泌体共同孵育24小时。分别用ExtraPEG法和差速离心法获得外泌体。(b)三维图像结合z-stacks。Figure 6. ExtraPEG法收集的外泌体内含有小RNA。安捷伦2100生物分析仪用于分析外泌体和细胞RNA。(a)凝胶图将ExtraPEG 法获得的产物RNA按大小分开。(b) 细胞溶解产物、差速离心法和ExtraPEG 法获得的产物RNA电泳图。作者认为，他们开发的此套方法，不仅提取成本较其他方法廉价，而且有着更高的提取效率，并且在不同体液中均能提取出外泌体。但仍有其需要不断改进的地方。&&&&&& 小编认为，如果不断将外泌体的提取方法优化，有更加完善且平价的提取纯化方法，那可是给研究外泌体的科研人员带来的大大的福音呀~exosomes(exosome-today)　
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【求助】有人用过凯基膜蛋白提取试剂盒么~跑wb着急啊~
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买了南京凯基的膜蛋白和浆蛋白提取试剂盒，浆蛋白有条带，可是膜蛋白跑了很久没跑出过条带。。。之前是担心所需组织量不够（要求是200-300mg，我的组织只有20mg左右）才跑不出来，后来换用大鼠心脏测试，组织量绝对够。。。而且在跑western之前进行了说明书上的蛋白浓缩步骤，可是在加loading buffer之后，蛋白沉淀怎么都溶解不掉~说明书也注明了如果有沉淀可以取上清继续上样，可是每次上样感觉样品往上浮，只有部分样品往孔里沉，而且跑出来什么都没有，连内参都没有。用的是β-actin的内参。。western之前浓缩步骤如下:1、取所得提取物，每100ul膜蛋白加入约300ul的溶解buffer和约100ul三氯乙酸（TCA）试剂，混匀后置冰上20-30min后，13000rpm，离心15min，尽可能去除上清。2、沉淀加入1ml丙酮，室温静置10min后，13000rpm离心15min。3、弃上清，沉淀真空旋干或置冰上干燥10min（敞开离心管盖），按适当体积比加入loading buffer（使用前没100ulloading buffer加入2-5ul β-巯基乙醇）溶解，彻底分散（枪头反复吹吸或剧烈涡旋），煮沸5min。【注：加入loading buffer后如有部分难容物，可取上清继续上样。】
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试剂盒没用过，猜测溶解buffer里应该含某种去垢剂抽提膜蛋白，这一步要充分混溶，再用TCA沉淀。我怀疑你直接加在了一起，膜蛋白没有被充分抽提，随着疏水相被弃了（上清）。
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另外，TCA一步加0.02%脱氧胆酸钠，丙酮沉淀这步省略掉吧，我怀疑这对膜蛋白复性不好。不过我没实验，你可以试试加和不加丙酮对你膜蛋白抽提的影响。
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Jimmy0909 另外，TCA一步加0.02%脱氧胆酸钠，丙酮沉淀这步省略掉吧，我怀疑这对膜蛋白复性不好。不过我没实验，你可以试试加和不加丙酮对你膜蛋白抽提的影响。谢谢，我试下看看~~~
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你好，我想麻烦问一下，你的问题解决了吗？另外，南京凯基的膜蛋白和浆蛋白提取试剂盒好用吗？我目前的实验也要检测哺乳动物细胞膜上的受体蛋白的表达情况，想咨询一下这个盒子的效果，麻烦了！也祝你实验顺利！
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新手一枚，买了凯基的膜蛋白试剂盒，想问一下关于loading buffer，盒子并没说是几×，那么应该按照什么比例来加到样品里呢，另外我做蛋白定量，浓度在3-4ug/ul的范围，按照说明书，之前的浓缩步骤不做直接加loading buffer煮蛋白可以么
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关于丁香园植物蛋白提取试剂盒
Plant Protein Extraction Kit_
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植物蛋白提取试剂盒
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植物蛋白提取试剂盒
Plant Protein Extraction Kit
货号：CW0885S规格：25次价格：￥198（原价格：￥258）货号：CW0885M规格：100次&价格：￥498（原价格：￥798）
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所属分类：蛋白提取纯化
　　本植物蛋白抽提试剂盒可从新鲜、冰冻或干燥植物组织中提取可溶性植物蛋白。适用于多种植物及植物的不同部位（如根、茎、叶、花、种子等）蛋白提取，高效提取植物蛋白，比传统的方法提取蛋白产量大、活性高、速度快。所提蛋白可直接进行蛋白电泳分析、免疫沉淀、Western Blot、蛋白活性测定及蛋白纯化等实验。所提蛋白可用BCA蛋白定量试剂盒（#CW0014）进行浓度的测定。
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Exosome 抽提前预处理试剂
发布时间： 13:49
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1.ExoQuick-LP 脂蛋白预处理试剂盒人类血浆包含着一些微球、外泌体、凋亡小体和脂蛋白颗粒的混合物，为了研究血清或血浆中的exosome所包含的miRNA和蛋白，必须在提取exosome之前尽量去除其它一些颗粒，特别是脂蛋白颗粒。最新的研究表明，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白中均包含有miRNA。为了避免在对exosome中miRNA研究中引起假阳性结果，必须尽量去除血清或血浆中的脂蛋白。SBI为您提供ExoQuick-LP试剂盒，有效去除样本中的脂蛋白，并高效提取血清或血浆中的Exosome。
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ExoQuick-LP Lipoprotein PreClear&Exosome Precipitation Kit
运输和保存 :ExoQuick-LP试剂盒由蓝冰或常温运输，收到产品后保存在4℃。2. 凝血酶素 D 试剂为了避免血浆中的纤维蛋白造成exosome提取过程中的沉淀，因此要用凝血酶素D试剂预先去除血浆中的纤维蛋白，从而便于exosome的提取与研究。
价格（元）
Thrombin Plasma prep for Exosome Precipitation
ExoQuick Plasma prep and Exosome Precipitation Kit（血浆exosome提取试剂盒）
运输与保存:TMEXO-1试剂盒由蓝冰或常温运输，收到产品后保存在4℃。蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒说明书
蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒包含了蛋白提取试剂及SDS－PAGE凝胶电泳所需的试剂。其中包括RIPA裂解液，BCA蛋白定量试剂，5&蛋白上样buffer，预染的蛋白Marker和 SDS-PAGE凝胶电泳试剂。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。BCA蛋白浓度测定试剂最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。BCA法测定蛋白浓度灵敏度高，检测浓度下限达到25&g/ml，最小检测蛋白量达到0.5&g，待测样品体积为1-20&l。在50-2000&g/ml浓度范围内有较好的线性关系。SDS-PAGE凝胶配制试剂提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶了。SDS-PAGE凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒约可配制25块常规大小的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。应用方面：可用于Western Blotting中的蛋白提取和电泳的全过程。
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2017中国（杭州）国际社会公共安全产品与技术博览会
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