primerstar pcr没有pcr电泳条带分析是为什么

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最近做PCR扩增,用taq酶能扩出条带来,但是换成primerstar之后就一直出不了带,到底是什么原因?师姐说从来没遇到过,一般都是primer能出,taq酶出不了,不知道为什么我遇到这么奇怪的现象
小疯子OM98
做个对照,如果酶没有问题的话.那可以降低一下退火温度或者稍微提高一下模板量再试试.
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做个对照,如果酶没有问题的话。那可以降低一下退火温度或者稍微提高一下模板量再试试。
taq一般不是高保真的,有可能你的菌种被污染,也会出现这种情况。如果不是做测序,taq应该也可以用。或者你测序一下就知道p的什么了
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【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究.  模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消 化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚.⑤模 板核酸变性不彻底.在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处 理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应 固定不宜随意更改.  酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性.需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭.  引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因.有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度 高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为:①选定一个好的引物合成单 位.②引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做PCR有可能失败,应和引物合成单位协商解决.如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度.③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效.④引物设计不合理,如引物长度不够,引物之间形成二聚体等.  Mg2+浓度:Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特 异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带.  反应体积的改变:通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul.或100ul,应用多 大体积进行PCR扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul 后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败.  物理原因:变性对PCR扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率.有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是PCR失败的原因之一.  靶序列变异:如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某 段缺失使引物与模板失去互补序列,其PCR扩增是不会成功的.
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各位老师您们好,请教一个很棘手的问题,为什么用普通的TAQ酶能跑出目的基因条带。换成高保真酶takara的Primer Max Star就跑不出来了呢?而且什么条带也没有?做过高保真梯度优化,模板浓度优化都不行。求指点?
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高保真的用过,不怎么稳定,批次间差异比较明显
该用户从未签到
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我用高保真酶做重叠PCR,菌落鉴定是Taq酶,都有条带啊!注意PCR反应体系和PCR条件,不同的酶反应体系不一样,反应的条件也不一样!你最好看一下酶的说明书!上面有反应体系,也有需要设置的PCR条件!
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我用高保真酶做重叠PCR,菌落鉴定是Taq酶,都有条带啊!注意PCR反应体系和PCR条件,不同的酶反应体系不一样 ...
我严格按照说明书上面的来设置的反应程序,反应体系也是按照说明书来的,但是就是扩不出来!
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该用户从未签到
不同的酶有不同的优点,个人感觉用PrimerStar从文库里P基因效果不错,但是以基因组为模板选用PS效果不佳。
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一直用NEB的Q5,从来没出过问题~~~~
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生物秀探花
你的条带多大,较长的片段确实不太好p出来
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你的条带多大,较长的片段确实不太好p出来
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生物秀探花
那应该可以啊,我用PrimeSTAR扩2kb的片段也可以P出来
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