便携式菌落数量快速检测系统--《山东师范大学》2015年硕士论文
便携式菌落数量快速检测系统
【摘要】：随着社会发展人们越来越重视食品卫生以及环境的问题，食品安全与环境污染的监督检测也越发的重要。在食品卫生监督检测中，菌落数量检测结果有着至关重要的作用，这一结果可以用来作为食品卫生安全指数的标准，其精确度以及有效性可靠性对评价结果有着极大的影响。主流的菌落总数检测方法主要是采用平板培养法来进行菌落数量的检测，但此类方法耗时长、检测携带不方便、成本高，因而有一定的局限性。
本次设计采用基于ATP生物发光原理研究的一款便携式菌落数量快速检测系统，能够快速的检测出菌落的总数。此系统主要是利用细菌中所含的ATP量与细菌数量成正比的原理，推算出食品中菌落总数。该系统应用广泛，具有测量时间短、精确度高、操作简单等优点。
本文主要描述了便携式菌落数量检测系统的发展历程与国内外发展情况，系统的组成结构与硬件、软件的设计调试过程。本次设计主要应用了PMT高灵敏度的光电倍增管信号采集放大器件，使用了自带A/D转换的ADuC834的主控制芯片，集生物传感器，信号转换、电路以及软件设计于一体，简化电路、节约资源。
目前很多产品都在提高检测精度，对细菌检测技术要求比较高，随着科技发展，ATP生物发光便携式菌落数量检测系统将更加人性化、携带方便、容易操作，降低应用成本，此系统还需提高其精确度以及需要走向市场化，将来这类检测技术将会成为社会生活的一部分，有很大的应用前景。
【关键词】：
【学位授予单位】：山东师范大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2015【分类号】：TP274【目录】：
摘要5-6Abstract6-8第一章 绪论8-12 1.1 课题研究背景8-9 1.2 国内外研究情况及发展趋势9-10 1.3 课题研究的主要内容10-12第二章 便携式菌落数量检测系统的原理概述12-16 2.1 系统原理与结构框图12-14
2.1.1 系统原理12
2.1.2 系统结构设计图12-13
2.1.3 检测仪器结构原理图13-14 2.2 本章小结14-16第三章 硬件系统模块的设计16-40 3.1 电源模块16-20
3.1.1 电源模块原理及硬件实现16-20 3.2 自动加样模块20-21 3.3 光电转换模块21-24
3.3.1 光电倍增管21-23
3.3.2 光电补偿23-24 3.4 电流电压转换模块24-25 3.5 信号处理模块25-31
3.5.1 A/D 转换模块25-28
3.5.2 基准电压模块28-30
3.5.3 信号存储模块30-31 3.6 键盘模块31-34 3.7 LCD 显示模块34-36 3.8 PCB 设计与制作36-38 3.9 本章小结38-40第四章 菌落检测系统的软件设计40-52 4.1 编译环境40 4.2 程序设计流程图40-41 4.3 部分代码41-51
4.3.1 初始化41-42
4.3.2 键盘模块42-43
4.3.3 电压升压43-45
4.3.4 AD 转换45-47
4.3.5 LCD 液晶显示47-49
4.3.6 I2C 传输总线49-51 4.4 本章小结51-52第五章 系统分析与测试52-58 5.1 系统调试52-54 5.2 系统分析54-56 5.3 本章小结56-58第六章 总结58-60参考文献60-64致谢64
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菌数报告规则：细菌宜选取平均菌落数在30～300之间的稀释级，霉菌宜选取平均菌落数在30～100之间的稀释级作为报告菌数计算的依据。如有1个稀释级在30～300（30～100）之间时，将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告；如同时有2.........
吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
&p&菌落总数的测定，一般是将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，.........
&p&菌落总数测定常用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。&/p&
菌落总数是指在一定条件下（如培养基营养成分、培养基pH、培养温度和时间、菌种的需氧性等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按照国家标准方法规定，在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长出来的细菌菌落总数.........
&p&食品的菌落总数严重超标，说明其卫生状况达不到基本的卫生要求，将会破坏食品的营养成分，加速食品的腐败变质，使食品失去食用价值。消费者食用微生物超标严重的食品，很容易患痢疾等肠道疾病，可能引起呕吐、腹泻等症状，危害人体健康。&/.........
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菌落总数检测方法相关经验菌落总数测试片 菌落总数测试卡 菌落总数测定方法-北京中诺泰安科技有限公司
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本产品适合于食品及水中菌落总数的测定，也可用于与食品接触的容器操作台和其他设备表面的卫生检测。
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保质期不超24小时的食品怎么快速检测菌落总数和大肠菌群？
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中级会员, 积分 425, 距离下一级还需 175 积分
请问：对于保质期不超过24小时的食品（湿米粉），要求每批出厂前都要检测菌落总数和大肠菌群合格后才能出厂销售，但是标准用的又是GB，至少需要2天，保质期都过了。有没有快速检测的方法呢？液体样品可以考虑流式细胞仪，但是像固体样品就不是很适用了。试纸片也需要培养24小时，也不适用。请教大神们，有没有遇过类似的情况？给点建议啊~~~
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我也搞不清楚
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这个没办法，只能先出厂，监管部门不理会的，因为他们也没办法。
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取证的时候你们是怎么操作的？
老老实实做人，踏踏实实做事。
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取证的时候你们是怎么操作的？
我们有产品保质期24小时，发证检验的时候，质监局要求保质期改成5天送样
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我们有产品保质期24小时，发证检验的时候，质监局要求保质期改成5天送样
杯具，他们总是来这一套，否则就不发证。
老老实实做人，踏踏实实做事。
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先出厂，同时检验
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关键是这是地方标准，自己写的普通包装保质期不超过24小时，真空包装或者充气包装不超过72小时，还要批批出厂检。现在被厂家的人问，都不知道怎么说
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& &就是，面包、蛋糕类产品也是这样。一般是出厂、同时检验，如果检验结果出现异常不合格，就要分析原因，追踪溯源。
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我记得当初做糕点的时候也有这个问题，你们可以去质监局咨询下，应该可以先出货再出报告的。有问题再追回。
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就是，面包、蛋糕类产品也是这样。一般是出厂、同时检验，如果检验结果出现异常不合格，就要分析原因， ...
等结果出来，已经迟到肚子里了
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取证的时候你们是怎么操作的？
申证的时候不需要考虑吧，质监局一样用GB做，没管保质期的问题吧？
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原标题：食品中的菌落总数检测方法
【导读】食品中细菌数量可反映该食品被污染的程度，预测食品耐放程度和时间，估测出食品腐败状况，是食品卫生检测的重要指标，应该如何检测呢？一、菌落总数的概念及卫生意义1、菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1mL （或1g）检样中形成菌落的总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在 平板计数 琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。2、细菌总数细菌总数指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1g或1mL或1cm2样品中的细菌总数来表示。3 菌落总数在食品卫生质量评价中的意义1）食品中细菌数量可反映该食品被污染的程度&新鲜的食品内部一般是没有或很少有细菌的，但由于外界污染情况不同，食品被细菌污染的多少就有所不同。食品中细菌数量越多，说明被污染的程度就越严重，越不新鲜，对人体健康威胁越大。相反，食品中菌数越少，说明该食品被污染的程度越轻，食品卫生质量越好，对人体健康影响也越小。&2）食品中细菌数量可预测食品耐放程度和时间&一般讲，细菌数越少，食品耐放时间越长；相反，食品耐放时间就越短，例如用O℃保存牛肉，菌落总数为103cfu／cm2时，可保存18天，而当菌落总数增至lO5cfu／cm2时则只能保存7天。另外，用0℃保存鱼时，菌落总数为105cfu／cm2时可保存6天．而菌落总数在103cfu／cm2时则可保存12天。&3）食品中细菌数量可估测出食品腐败状况&一般认为日常食品的活菌数为104～107cfu／g。而当活菌数达到108cfu／g则可认为处于初期腐败阶段。例如，活的家禽，皮肤表面的细菌数可低到1.5×103cfu／cm2。而加工后马上检测可达3.5×104cfu／cm2。当菌落数为107cfu/cm2时表示确已经腐败，鸡肉的细菌数达108cfu／cm2时可有气味并变粘。一般讲，食品中细菌数量越多，则会加速腐败变质过程的进程，甚至可能引起食用者的不良反应。二、菌落总数检测方法菌落总数的常规检验方法菌落总数的常规检验方法(GB8)：基本操作一般包括：样品的稀释——倾注平皿——培养48（24）小时——计数报告。（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：1）、以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。2）、用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。3）、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。4．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。（二）倾注培养1．操作方法：&1）、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。2）将凉至46℃平板计数琼脂培养基注入平皿约15mL，并转动平皿，混合均匀。同时将平板计数琼脂培养基倾入加有1mL稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。3）待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。&4）倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察5）为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。6）温较低，故多采用30℃）。培养时间一般为48h，有些方法只要求24h的培养即可计数。培养箱应保持一定的湿度，琼脂平板培养48h后，培养基失重不应超过15％。7）为了避免食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细菌菌落发生混淆，不易分辨，可同时作一稀释液与琼脂培养基混合的平板，不经培养，而于4℃环境中放置，以便计数时作对照观察。在某些场合，为了防止食品颗粒与菌落混淆不清，可在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑（TTC），培养后菌落呈红色，易于分别。（三）计数和报告1. 操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算出原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。2. 计数：到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。3. 稀释度选择及菌落数报告方式1）. 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。2）. 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（l）计算：N=∑C/（n1+0.1n2）d……………………（1）式中：N―样品中菌落数；∑C―平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n 1―第一个适宜稀释度接种平板个数n2―第二个适宜稀释度接种平板个数；d―稀释因子（第一稀释度）。3）. 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。4）. 若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5）. 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6）. 若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。4. 菌落总数的报告1）. 菌落数在100以内时，按“四舍五人”原则修约，采用两位有效数字报告。&2）. 大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。3）. 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。4）. 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5）. 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。（四）特别注意1 不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。2．当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。3．当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。来源 |&检测联&检 &测 &联Jiancelian如果您觉得文章有意思，您可以&点赞&或&分享到朋友圈，独乐不如众乐~长按&二维码&可关注&检测联&微信号，了解检测行业新动态，快速找到检测机构做检测报告。点击阅读原文，查看更多检测信息。检测联(jiancelian)
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