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【主题学习】G1期和S期细胞比例均比对照组增高，G2期比对照组比例降低，请问是促进增殖还是抑制增殖？
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看了一些文献，对细胞各周期的意义感觉还是很模糊。目前对细胞周期的理解是：如果G1增高，S降低，G2/M变化不明显，意思是发生了G1/S的阻滞，起的是抑制作用。也有看到一些文献说是阻滞在G2/M期（G2/M期增高）也是抑制作用。因本人研究的是促增殖的药物，作用的细胞是胃肠道正常的细胞，请问这种促增殖作用是对细胞周期哪些期会有变化？有网友说S期增高是金标准。像我这种情况，S期增高，但是G1也增高，G2降低，这该如何描述？这药物可促进细胞G1/S期转化？请各路才人指正。谢谢！
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如何通过细胞周期各期的比例变化来判断细胞是处于促增殖状态还是抑制增殖状态？？哪位大神有相关的详细文献资料哈，求分享，可赠送适量叮当作为回报！
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丁香园准中级站友
一般来说，无论G1、S和G2/M改变，都要结合细胞增殖试验。如果其中有增高，呈剂量依赖或时间依赖性，再结合MTS或MTT、CCK8有抑制增殖现象，可以说周期阻滞。没有很明确说G1增高就是阻滞而G2增高就是促进增殖，都要结合MTT结果。同时，流式周期实验多是用在周期阻滞上，极少用于增殖的。
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hengyuanxiang 一般来说，无论G1、S和G2/M改变，都要结合细胞增殖试验。如果其中有增高，呈剂量依赖或时间依赖性，再结合MTS或MTT、CCK8有抑制增殖现象，可以说周期阻滞。没有很明确说G1增高就是阻滞而G2增高就是促进增殖，都要结合MTT结果。同时，流式周期实验多是用在周期阻滞上，极少用于增殖的。朋友新年好！我做了24h的MTT和CCK8，数据表明我所做的含药血清有明显促进作用的，用药组比正常组比较差异有统计学意义。流式周期实验之所以多研究周期阻滞，是因为他们研究的是抗癌的相关药物，针对癌细胞的作用研究；我问了实验室的老师，他说增殖应该是看G1和S期，这两期比例升高说明DNA合成在增加，因此也就促进增殖。而我的实验数据也确实是G1和S期的比例升高。关于细胞周期阻滞我也看了一些文献，基本是关于肿瘤细胞被阻滞的，G0/G1、S、G2/M期被阻滞的均有报道，最终的结论都是能抑制肿瘤细胞的生长增殖。我做的是消化道的正常细胞，研究的是促进作用，目前做出的结果是S期增高，G1也增高，G2降低，在解释和描述上可否不带阻滞字眼，就像实验室的老师提供的说法那样，G1、S增高，DNA合成所需的物质基础合成加速，从而促进DNA复制，最终促进细胞的增殖……不知有没有更合理的解释，请高手赐教指正。
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亚马逊绝对统治者 朋友新年好！我做了24h的MTT和CCK8，数据表明我所做的含药血清有明显促进作用的，用药组比正常组比较差异有统计学意义。流式周期实验之所以多研究周期阻滞，是因为他们研究的是抗癌的相关药物，针对癌细胞的作用研究；我问了实验室的老师，他说增殖应该是看G1和S期，这两期比例升高说明DNA合成在增加，因此也就促进增殖。而我的实验数据也确实是G1和S期的比例升高。关于细胞周期阻滞我也看了一些文献，基本是关于肿瘤细胞被阻滞的，G0/G1、S、G2/M期被阻滞的均有报道，最终的结论都是能抑制肿瘤细胞的生长增殖。我做的是消化道的正常细胞，研究的是促进作用，目前做出的结果是S期增高，G1也增高，G2降低，在解释和描述上可否不带阻滞字眼，就像实验室的老师提供的说法那样，G1、S增高，DNA合成所需的物质基础合成加速，从而促进DNA复制，最终促进细胞的增殖……不知有没有更合理的解释，请高手赐教指正。我是没见过促进增殖的使用周期来说明问题的。兄台可以再翻阅下文献看看有没有类似的报道。祝新年快乐，顺利。
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兄台觉得中国平安财产保险公司如何，地级市分公司在58同城上招聘医疗查堪岗靠谱吗？我如果四月一号上岗下个月他们9号统一发工资，会有拖欠扣工资吗？我有五年医院工作经验相对于本科刚毕业会加点工资吗？感觉招聘方比较热情，说下一步弄个经理面试我，有试用期吗，一般多久呢，在保险公司有哪些需要特别注意呢，
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就两天调剂，明天下午就关闭调剂系统了，调广西医科大的，留下脚印，交流交流。
&：【经验】写给考研失败的朋友
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hCG对人卵巢癌3AO细胞增殖凋亡的影响及其与LHhCG受体的关系的研究.pdf109页
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博士学位论文
hCG对人卵巢癌3AO细胞增殖凋亡的影响及其与LH/hCG受体的关
姓名：邢艳
申请学位级别：博士
专业：生物化学与分子生物学
指导教师：陈曼玲
座机电话号码
四川大掌博士掌位论文
hCG对人卵巢癌3AO细胞增殖凋亡的影响
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正在加载中，请稍后...漆姑草水提物对K562细胞凋亡及细胞周期影响
<meta name="keywords" content="Herba Saginae Japonicae(HSJ); K562 cell cycle" />
&&&&2014, Vol. 30 Issue (12):
王雷鸣, 梁冰, 李淑芳, 沈祥春. 漆姑草水提物对K562细胞凋亡及细胞周期影响[J]. 中国公共卫生, ): .
WANG Lei-ming, LIANG Bing, LI Shu-fang, et al. Regulating effects of Herba Saginae Japonicae on apoptosis and cell cycle of K562 cell strain in vitro[J]. Chinese Journal of Public Health, ): .
漆姑草水提物对K562细胞凋亡及细胞周期影响
王雷鸣1,2, 梁冰1 , 李淑芳1, 沈祥春1&&&&
1. 贵阳医学院药理学教研室, 贵州 贵阳 550004;2. 上海市普陀区人民医院药剂科
基金项目：贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教科2010033号)
作者简介：王雷鸣(1984-),女,江苏徐州人,药师,硕士,研究方向:中药药理与新药筛选。
通讯联系人：梁冰,E-mail:
摘要：目的 探讨漆姑草水提物(HSJ)对人白血病细胞株K562细胞凋亡及细胞周期影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSJ对K562细胞的增殖抑制作用;台盼蓝拒染法观察HSJ对细胞生长曲线影响;流式细胞仪检测HSJ对K562细胞凋亡影响;DNA倍体分析法检测HSJ对K562细胞周期时相影响。结果 HSJ对K562细胞增殖抑制率随剂量增加而增加,作用48 h半数抑制浓度(IC50)为1.35 mg/mL; 1.0、2.0、4.0 mg/mL HSJ处理后,K562细胞凋亡率分别为(8.39&#177;0.81)%、(8.88&#177;1.12)%、(13.42&#177;2.04)%,均高于对照组的(4.60&#177;1.09)%(P<0.05);HSJ能够引起细胞周期进程的改变,与对照组比较,HSJ增加K562细胞中G2期细胞比例(P<0.05),降低S期时相细胞比例(P<0.05),降低增殖指数(PI)(P<0.05),HSJ将K562细胞阻滞于G2期。结论 HSJ对K562细胞具有增殖抑制作用,其机制与诱导细胞凋亡和阻滞K562细胞在G2期有关。
漆姑草(HSJ)&&&&
细胞凋亡&&&&
细胞周期&&&&
Regulating effects of Herba Saginae Japonicae on apoptosis and cell cycle of K562 cell strain in vitro
WANG Lei-ming1,2, LIANG Bing1 , LI Shu-fang1, et al&&&&
Department of Pharmacology, Guiyang Medical University, Gui-yang 550004, China
Abstract: Objective To investigate regulating effects of Herba Saginae Japonicae(HSJ) on apoptosis and cell cycle of K562 cell strain in vitro.Methods The inhibited proliferation of K562 cells was measured with methyl thiazolyl tetrazolium(MTT).The effect of HSJ on cell growth was analzyed with trypan blue dye exclusion method.The HSJ-induced apoptosis of K562 cells was detected with annexinV-FITC/PI double staining method.The cell cycle phase of K562 cells was determined with DNA ploid analysis.Results There was a positive relation between inhibitive effect of HSJ on K562 cell proliferation and the concentration of HSJ.The 50% inhibitory concentration(IC50) of HSJ was 1.35 mg/ml with the treatment of HSJ for 48 hours.The apoptotic ratios of K562 cells were 8.39&#177;0.81%,8.88&#177;1.12%,and 13.42&#177;2.04% treatd with HSJ of 1.0,2.0,and 4.0 mg/ml,respectively,with a significant difference compared with that of the control group(4.60&#177;1.09 %)(P<0.05).Compared with control,HSJ increased the percentage of the cells in G2 phase(P<0.05),decreased the percentage of cells in S phase and the proliferous index(PI)(P<0.05,P<0.05).Cell cycle of K562 cells with HSJ treatment were blocked in G2 phase.Conclusion HSJ can inhibit the proliferation of K562 cells and the mechanism maybe involve the induced cell apoptosis and blocked G2 phase of K562 cells.
Key words:
Herba Saginae Japonicae(HSJ)&&&&
K562 cell strain&&&&
cell apoptosis&&&&
cell cycle&&&&
漆姑草(Herba Saginae Japonicae，HSJ)又名珍珠草、地松和大龙叶等，石竹科。HSJ属1、2年生小草本植物，有提脓、拔毒、散结消肿和抗癌等功效，民间常用于治疗白血病、疮、痈、淋巴结核等病症[]。白血病是造血系统的原发性肿瘤，在中国居民恶性肿瘤死因中位居第6位，是儿童及<35岁人群中死亡率最高的恶性肿瘤[, ]。目前有少量关于HSJ治疗白血病的临床研究[]，而药理学方面的研究更为少见。本研究以人慢性髓细胞性白血病急变期细胞株K562细胞为实验对象，观察HSJ水提取物对体外培养的K562细胞增殖抑制作用以及对细胞凋亡和细胞周期影响，旨在为白血病治疗和HSJ研究开发提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
HSJ(贵阳市药材市场，经贵阳医学院龙庆德教授鉴定)，称取HSJ全草250 g，加蒸馏水浸泡后加热煮沸，先用强火煮沸，后改用文火，保持微沸约1 h，搅拌，趁热过滤。药渣再加蒸馏水，同法煮沸后过滤，合并滤液，水浴浓缩，得干浸膏，取适量配成20 mg/mL母液，0.22 μm滤膜过滤后，-20 ℃保存备用，用前用无血清培养基稀释至所需浓度；注射用盐酸多柔比星(浙江海正药业有限公司1640培养基(美国Invitrogen公司)；胎牛血清(杭州四季青公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)；台盼蓝、四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)(美国Amresco公司)；凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物科技发展有限公司)；Cycletest Plus DNA检测试剂盒 340242[美国碧迪医疗器械(上海)有限公司]。TS-100-F倒置相差显微镜(日本Nikon公司)；Elx 800 UV酶联免疫检测仪(美国Bio-tek公司)；BD FACSCantoTM ⅡFlow Cytometer 338960流式细胞仪(美国Becton Dikson公司)。
1.2 K562细胞培养
人白血病细胞株K562细胞(中科院上海细胞库)，培养基为含10%胎牛血清的RPMI 1640。置于37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养，细胞生长至近70%时，收集细胞，离心后弃上清，重悬细胞，进行传代，每周3次左右。
1.3 指标与方法
1.3.1 细胞生长抑制率检测
采用MTT法，将K562细胞制成5×104个/mL细胞悬液于96孔板培养24 h后，分别加入终浓度为0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/mL的HSJ，阳性对照组加入终浓度为0.06 mg/mL多柔比星；同时设阴性对照组和空白对照组，每组设3个复孔。细胞分别继续培养至24、48、72 h时，每孔加入MTT(5 mg/mL)20 μL，继续培养4 h，离心弃上清。每孔加入150 μL二甲基亚砜充分溶解结晶。用酶标仪测定波长为490 nm吸光度(A)值。按下式计算细胞生长抑制率，根据Logistic回归法法求出半数抑制浓度(50% inhibitory concentration，IC50)。
1.3.2 细胞生长曲线观察
采用台盼蓝拒染法，将5×104个/mL K562细胞悬液接种于24孔培养板，每孔1 mL。培养24 h后，加入HSJ，终浓度分别为0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0 mg/mL，对照组加等体积无血清培养基，于加入HSJ后1、2、3、4、5 d各取3孔细胞，用台盼蓝染液(0.4 g/mL)染色后于细胞计数板中计数，每孔计数3次，得出细胞浓度平均值。以培养时间为横坐标，细胞浓度为纵坐标，绘制生长曲线。
1.3.3 细胞凋亡率检测
K562细胞经HSJ作用48 h后，离心收集细胞，用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)洗涤；取1×106个细胞，离心弃上清；PBS重悬细胞后离心弃上清，重复2次；收集1×105个细胞；加入500 μL的bingding buffer悬浮细胞；加入5 μL Annexin V -FITC混匀后，加入5 μL 碘化吡啶，混匀；避光室温反应；流式细胞仪检测细胞凋亡率。
1.3.4 细胞周期检测
采用DNA倍体分析法，取对数生长期细胞，调整细胞5×104个/mL浓度，培养24 h后加入HSJ，终浓度分别为1.0、2.0、4.0 mg/mL；继续培养48 h，离心收集细胞，PBS洗涤2次，弃上清；加入70%乙醇固定；离心弃上清，加入100 μg/mL RNase，37℃水浴30 min；碘化吡啶(50 μg/mL)染色；流式细胞仪检测；计算各期细胞比例，并按下式计算增殖指数(proliferous index，PI)[]：
1.4 统计分析
应用软件SPSS 16.0进行统计分析，计量资料多组间比较采用方差分析，两两比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 HSJ对K562细胞增殖抑制率影响(表 1)
经不同浓度HSJ作用后，K562细胞的生长明显减慢，细胞增殖能力受到不同程度抑制；K562细胞增殖抑制率随着HSJ浓度增加明显增高，同一浓度下，作用时间越长，细胞增殖抑制率越高。经HSJ作用24、48和72 h后的IC50分别为1.64、1.35和1.01 mg/mL。
表 1表 1 HSJ对K562细胞增殖抑制率影响(%，x±s,n=3)
组别(mg/mL)HSJ作用时间(h)
对照组0.00±0.000.00±0.000.00±0.00
SHJ0.511.70±0.89a12.78±3.03a21.41±0.03ab
1.015.60±1.11a29.20±1.92ab30.65±0.02ab
2.046.71±2.76a63.59±4.02ab82.90±4.34ab
4.091.88±1.87a96.62±1.01ab98.71±0.86ab
8.097.41±0.69a98.46±0.81ab99.42±0.89ab
多柔比星0.0348.05±1.56a79.59±2.36ab92.77±2.31ab
注：与对照组比较，a P＜0.05；与24 h比较，b P＜0.05。
表 1 HSJ对K562细胞增殖抑制率影响(%，x±s,n=3)
2.2 HSJ对K562细胞生长曲线影响(图 1)
经HSJ作用后，K562细胞浓度明显低于空白对照组，各HSJ组细胞生长明显减慢，细胞增殖能力受到不同程度抑制。
图 1 HSJ对K562细胞生长曲线影响
2.3 HSJ对细胞凋亡率影响
对照组及1.0、2.0、4.0 mg/mL HSJ组K562细胞凋亡率分别为(4.60±1.09)%、(8.39±0.81)%、(8.88±1.12)%和(13.42±2.04)%；与对照组比较，HSJ各剂量组K562细胞凋亡率均升高，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 HSJ对细胞周期影响(表 2)
K562细胞经各浓度HSJ作用48 h后，G2期细胞比例呈明显上升趋势(P<0.05)，S期细胞比例则逐渐下降(P<0.05)。PI随着HSJ浓度增加逐渐下降，与对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。
表 2表 2 HSJ对K562细胞细胞周期影响(%，x±s,n=3)
组别(mg/mL)各期细胞比例PI
对照组22.95±5.3823.52±3.3253.53±7.3377.05±1.30
HSJ 1.026.46±6.3223.22±3.43a50.32±1.32a73.54±3.23a
2.027.59±6.4427.21±2.31a45.20±1.22a72.41±3.31a
4.028.48±2.45a34.15±6.32a37.36±8.41a71.52±2.36a
注：与对照组比较，a P＜0.05。
表 2 HSJ对K562细胞细胞周期影响(%，x±s,n=3)
白血病被认为是多因素联合作用的结果，临床治疗以化疗为主，但化疗药物毒性大、选择性差、容易产生多药耐药；与此同时，中草药因在治疗疾病的同时能调理机体功能而成为药物研发热点。本研究结果显示，HSJ水提取物作用后，K562细胞生长受到不同程度抑制，细胞增殖能力下降，且在一定范围内与剂量和作用时间相关，表明HSJ对K562细胞具有增殖抑制作用。本研究结果还表明，经HSJ水提取物处理后的K562细胞凋亡率均高于对照组，差异有统计学意义，提示HSJ对K562的增殖抑制作用与其诱导K562细胞凋亡有关。
细胞周期即是DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)、DNA合成后期(G2期)、有丝分裂期(M期)周而复始的细胞的生长、分裂循环[]。在内外因素影响下，细胞周期有序进行；而肿瘤细胞的重要特征之一则是细胞增殖和分化失控，故细胞周期调控紊乱是导致肿瘤细胞增殖失控的根本原因[, ]。本研究结果显示，在HSJ水提取物作用48 h后，随HSJ水提取物浓度增加，K562细胞增殖指数逐渐下降；S期细胞比例逐渐减少，G2期细胞比例呈明显上升趋势。提示HSJ能够降低K562细胞增殖活性，将细胞阻滞于G2期，阻止其进入有丝分裂，避免其走向无限增殖状态。HSJ对K562细胞具有增殖抑制作用，其作用与诱导K562细胞凋亡及阻滞K562细胞在G2期有关。
国家中医药管理局《中华本草》编写组.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,.
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细胞增殖受到抑制，除了细胞周期受阻还有原因可能是什么？
我用药物处理细胞，用MTT检测出药物能显著抑制细胞的增殖，但是用流式检测出的G0/G1期、S期、G2/M期在药物却没有显著性差异，该怎么分析这种情况呢？关于细胞的增殖受到，除了从细胞周期是否改变来分析，还可以从什么角度来分析细胞增殖受到抑制呢？请高手指点，谢谢！还有凋亡呢？MTT是很粗的，如果凋亡增加了MTT当然表现出不同了，其它很多因素都会影响的也就是说MTT不能准确反映细胞的增殖状况，只能表示火活性咯。那假如MTT显示的活性降低，细胞周期也受阻，是不是就能说明该药物能抑制增殖呢？fennua 战友说的除了凋亡还有其他因素，不知道您指的因素还有哪些？望指点，谢谢！我想除了凋亡，药物如化疗药浓度高的时候也直接引起坏死的，无论凋亡还是坏死MTT测出的结果是一样的MTT检测反映的是单纯活细胞数量变化的情况，细胞增殖受抑制，最终的结果表现为有活力的细胞数量减少，而活细胞数目减少除了抑制增殖外，促进凋亡也是其中的一个因素，抑制增殖主要影响细胞周期的，促进凋亡主要是影响bcl-2等凋亡基因，同样外来因素本身对细胞的直接杀伤作用也会是一个原因因素的！感谢各位高手的指导！！
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