黄酮类物质的分离一般使用何种柱子？怎么的_珍藏百科
黄酮类物质的分离一般使用何种柱子？怎么的
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能帮我下了然？黄酮类物质的分离一般使用何种柱子？怎么的?谢咯。
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【讨论】分离柱的选择和洗脱系统的选择及其选择的依据
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这个帖子发布于8年零330天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好！我是新手，在做实验方面大概思路有，但遇到具体的就不知所措。我们主要是做中药的成分分离，提取——萃取——分离——结构测定，我们都知道在做分离时，大都是通过柱层析来分离，请问选择什么样类型的柱子（如硅胶柱，凝胶柱等），及洗柱子的流动相的系统选择的依据？
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1、选择什么样的色谱柱，必须弄清楚目标物质是那一类物质？有什么性质？干扰成分有那些？等等。（一）根据物质的吸附性差别进行分离可选用硅胶色谱柱：多孔，微酸，适用分离的化合物范围广泛，但不宜分离碱性化合物。氧化铝色谱柱：适于分离碱性成分，不宜分离醛、酮、酯和内酯。活性碳：属于非极性吸附剂。适于极性物质的分离。是氨基酸、糖、及某些甙类成分的主要方法之一。一般用水及不同浓度的醇洗脱。聚酰胺色谱柱：利用的是化学吸附原理，主要是依靠氢键吸附，用于酚类、黄酮类、醌类成分的分离。大孔吸附树脂色谱柱：用于中草药化学成分如生物碱、黄酮、内酯、皂苷、香豆素及其他一些苷类成分都有一定的吸附作用。（二）根据物质分子大小差别进行分离
凝胶色谱柱：常用的有葡聚糖凝胶（sephadex G）,聚丙烯酰胺凝胶（Bio-GelP），及羟丙基葡聚糖凝胶（Sepharese LH-20）等。葡聚糖凝胶只适于在水中应用。羟丙基葡聚糖凝胶适于不同类型的有机物的分离。（三）根据物质的解离度不同进行分离离子交换色谱法：适于可离子化的物质的分离。如：氨基酸、生物碱、有机酸和酚类。2、洗脱溶剂的选择也许是整个柱色谱分离操作中最困难之处，也是实验成功的最 关键之处。它不只是决定分离效果的好坏，同时还决定分离的成本、后处理的 难易以及废弃物对环境的污染等多种因素。
一般用薄层色谱初步筛选洗脱溶剂。 溶剂的选择，原则上是让目标化合物与杂质在薄层上的斑点距离具有足够的差距，如△Rf&0.4。选择时主要从两个方面考虑，一是溶剂的极性，二是 溶剂的选择性。
溶剂的极性::常用洗脱溶剂的极性按如下次序递增:
己烷、石油醚&环己烷&四氯化碳&二硫化碳&甲苯&苯&二氯甲烷&氯仿&乙醚&乙酸乙醋&丙酮&丙醇&乙醇&甲醇&水。
在薄层色谱中，当溶剂的极性太大时，会使待分离物全部接近溶剂前沿， 当溶剂的极性太小时，又会使待分离物几乎全部保留在原点，这两种情况都使待分离物得不到分离。
如果能使目标产物的Rf值接近1，而其他杂质与目标产物的△Rf&0.4以上，则这个溶剂系统最适宜于柱色谱分离系统。 冲柱的溶剂如果可以不用氯仿、甲醇和苯等时尽量不用，因为氯仿对肝脏有很大的损害作用，而甲醇能损害眼睛，苯可导致白血病。氯仿还能溶解少量的硅胶，冲柱后最后所得到的分离物往往还需要用其他溶剂再溶解以便除去硅胶。在一般的有机溶剂中，丙酮、乙酸乙醋以及甲苯等的毒性相对较小。就拿硅胶来说吧，硅胶与待分离样品的重量比也是一个重要的因素。对于非常容易分离的样品，样品与硅胶的重量比可以高达1，30;对于一般的分离，如两组分待分离物在薄层上的△Rf&0.4，则可使用1= (50-100)的重量比比较合适;对于较难分离的样品，可以使用1=200的比例;对于更难分离的样品，甚至可以 考虑使用1 : (500---1000)的比例。在装柱前一定要分别称量样品和硅胶的重量，选取正确的硅胶用量。硅胶用量的不足，常常是导致分离失败的重要原因，因为样品的过载，会使色谱分离柱的分离效能成指数下降。硅胶柱层析流动相：一般的 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
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chemist_yx edited on
我是做药物化学合成方向的，我们实验室 用过正相硅胶柱层析，反相硅胶C18柱层析，活性炭柱层析这三种。我先说一下正相硅胶柱，这种柱子是极性小的先被洗脱下来，然后才是极性大的物质下来，洗脱剂一般有石油醚、乙酸乙酯、正己烷、氯仿等几种，正相硅胶柱的洗脱剂选择一般是根据TLC来判断的，先用TLC来跑你的物质，找到合适的的展开剂，然后将TLC展开剂极性减半就可以作为正相硅胶柱的洗脱剂了，洗脱的时候可以选择梯度洗脱也可以选择均梯度洗脱。反相硅胶C18柱子，是极性大的物质先出来，然后是极性小的在出来，洗脱剂一般是水、乙腈、甲醇等，反相C18柱层析洗脱剂的选择我们是根据HPLC来定的，一般自己装的反相C18柱硅胶颗粒比HPLC的柱子填料大很多，为了得到好的分离效果，需要将HPLC的流动相的极性增大10%就可以了。如果条件允许用反相板也可以确定洗脱剂。活性炭柱层析用的是颗粒状活性炭，一般是极性大的先出来，然后是极性小的。洗脱剂是甲醇、乙醇、水等，一般是先用水冲柱子，然后逐渐增加醇的比例洗脱就可以了。
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至于凝胶柱层析我们没有用过，你可以在园子里搜索一下，这方面的资源也很多。
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谢谢，看了你写的东西，让我知道了不少！谢谢你的指导！
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讨论比求助好，现在丁香园尽是些求助贴，真得很每意思。
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我来说两句。1.正相硅胶便宜，用起来也方便，分离全世界就它用的最多。2.做植化，我一般选择的分离流程：a.正相硅胶粗分(VLC)，洗柱子一两天搞定，这一步绝对不能分细，避免将样品分散。b.检测，选定目标化合物，根据检测分析情况选择填料，我一般用正相或反相。c.粗分完毕，100mg左右的样品我会用PTLC或Pre-HPLC，这时候大批的化合物就出来了，一天拿几个都可以。d.PTLC或Pre-HPLC分不干净的，我才会考虑其它的填料，凝胶是个好东西。3.Natural Product Isolation 这本书不错，论坛里有下载。4.以上只供参考，一家之言，欢迎提意见批评讨论。
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谢谢，万分的谢谢指教！
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欢迎进入天然药物世界，希望各位师弟师妹站的高看的远！天然药化现在很困难，但困难背后往往隐藏地都是宝藏！有问题欢迎询问。
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建议多用凝胶，比如：sephdex LH-20,分子筛原理，分子量大的先留下来，分子量小的后洗脱下来，洗脱剂一般用甲醇，或者氯仿：甲醇=1：1，单一溶剂好回收，成本低。市场价13800元每500g ,用下来狠好的，是提取分离必不可少的材料。凝胶基本不损失样品，冲洗每一次就是再生，避免太杂的样品和色素较深的样品，一面洗不下来，污染凝胶。！其它的凝胶也狠多，只是转专一性较强。
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浏览过，很受用
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我用过硅胶柱，在走柱时总会有气泡出现，有什么好办法解决吗？谢谢
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呵呵我是新手 前辈们能说的细一点吗 怎样做才能达到比较理想的分离效果
借楼主一块宝地:)
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硅胶柱一般不会有气泡，是不是你的柱子干了啊？硅胶柱不能干的，除了VLC外！
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石榴红 我用过硅胶柱，在走柱时总会有气泡出现，有什么好办法解决吗？谢谢请问石榴用的是加压柱吗？1.柱子干了，是有的人硅胶柱有气泡的原因，但是我想石榴没干；2.加压柱流速过快，易产生气泡；3.加压柱加流动相时放气过快，易产生气泡；4.还有，我想流动相极性变化过大也会产生气泡。其它原因有待战友补充。BTW，I'd prefer VLC.
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谢谢指导 受益匪浅
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1、选择什么样的色谱柱，必须弄清楚目标物质是那一类物质？有什么性质？干扰成分有那些？等等。（一）根据物质的吸附性差别进行分离可选用硅胶色谱柱：多孔，微酸，适用分离的化合物范围广泛，但不宜分离碱性化合物。氧化铝色谱柱：适于分离碱性成分，不宜分离醛、酮、酯和内酯。活性碳：属于非极性吸附剂。适于极性物质的分离。是氨基酸、糖、及某些甙类成分的主要方法之一。一般用水及不同浓度的醇洗脱。聚酰胺色谱柱：利用的是化学吸附原理，主要是依靠氢键吸附，用于酚类、黄酮类、醌类成分的分离。大孔吸附树脂色谱柱：用于中草药化学成分如生物碱、黄酮、内酯、皂苷、香豆素及其他一些苷类成分都有一定的吸附作用。（二）根据物质分子大小差别进行分离
凝胶色谱柱：常用的有葡聚糖凝胶（sephadex G）,聚丙烯酰胺凝胶（Bio-GelP），及羟丙基葡聚糖凝胶（Sepharese LH-20）等。葡聚糖凝胶只适于在水中应用。羟丙基葡聚糖凝胶适于不同类型的有机物的分离。（三）根据物质的解离度不同进行分离离子交换色谱法：适于可离子化的物质的分离。如：氨基酸、生物碱、有机酸和酚类。2、洗脱溶剂的选择也许是整个柱色谱分离操作中最困难之处，也是实验成功的最 关键之处。它不只是决定分离效果的好坏，同时还决定分离的成本、后处理的 难易以及废弃物对环境的污染等多种因素。
一般用薄层色谱初步筛选洗脱溶剂。 溶剂的选择，原则上是让目标化合物与杂质在薄层上的斑点距离具有足够的差距，如△Rf&0.4。选择时主要从两个方面考虑，一是溶剂的极性，二是 溶剂的选择性。
溶剂的极性::常用洗脱溶剂的极性按如下次序递增:
己烷、石油醚&环己烷&四氯化碳&二硫化碳&甲苯&苯&二氯甲烷&氯仿&乙醚&乙酸乙醋&丙酮&丙醇&乙醇&甲醇&水。
在薄层色谱中，当溶剂的极性太大时，会使待分离物全部接近溶剂前沿， 当溶剂的极性太小时，又会使待分离物几乎全部保留在原点，这两种情况都使待分离物得不到分离。
如果能使目标产物的Rf值接近1，而其他杂质与目标产物的△Rf&0.4以上，则这个溶剂系统最适宜于柱色谱分离系统。 冲柱的溶剂如果可以不用氯仿、甲醇和苯等时尽量不用，因为氯仿对肝脏有很大的损害作用，而甲醇能损害眼睛，苯可导致白血病。氯仿还能溶解少量的硅胶，冲柱后最后所得到的分离物往往还需要用其他溶剂再溶解以便除去硅胶。在一般的有机溶剂中，丙酮、乙酸乙醋以及甲苯等的毒性相对较小。就拿硅胶来说吧，硅胶与待分离样品的重量比也是一个重要的因素。对于非常容易分离的样品，样品与硅胶的重量比可以高达1，30;对于一般的分离，如两组分待分离物在薄层上的△Rf&0.4，则可使用1= (50-100)的重量比比较合适;对于较难分离的样品，可以使用1=200的比例;对于更难分离的样品，甚至可以 考虑使用1 : (500---1000)的比例。在装柱前一定要分别称量样品和硅胶的重量，选取正确的硅胶用量。硅胶用量的不足，常常是导致分离失败的重要原因，因为样品的过载，会使色谱分离柱的分离效能成指数下降。硅胶柱层析流动相：一般的 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
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chemist_yx
说得很好，受益匪浅。关于分离我还有几个问题：1。拖尾加的是冰醋酸还是它的一定浓度的水溶液？2。看过一些贴说加了醋酸洗脱后要再加一点碱回去，防止浓缩后PH太低使目标化合发生其它反应，那加碱是加氨水吗？3。关于摸索的显色，我现在只有254、365的紫外灯、碘，还有什么显色剂比较方便好用的？10%硫酸显色是指其水溶液还是醇溶液阿？4。我做的植化是乙酸乙酯和正丁醇两个组分的分离，乙酸乙酯这个好办，正丁醇这个极性的看到的例子不多，有的说了也不是很详细，可否说个较为详细的例子给我方便模仿。详细说一下用硅胶或其他不是很贵的吸附剂方法所用到的洗脱液种类及其一般所用梯度比例。另说明一下我做材料含色素是比较少的。
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谈点自己看法，有不妥请包涵sing312 wrote:chemist_yx
说得很好，受益匪浅。关于分离我还有几个问题：1。拖尾加的是冰醋酸还是它的一定浓度的水溶液？一般根据目标物质的酸碱性调ph值，采用离子抑制法,目标物质为酸性，用一定浓度的醋酸溶液调PH值,为碱性时,用三乙胺或氨水调PH值。2。看过一些贴说加了醋酸洗脱后要再加一点碱回去，防止浓缩后PH太低使目标化合发生其它反应，那加碱是加氨水吗？一般的最好加三乙胺或氨水。3。关于摸索的显色，我现在只有254、365的紫外灯、碘，还有什么显色剂比较方便好用的？10%硫酸显色是指其水溶液还是醇溶液阿？检测方法很多：除了你提到的，还可以用水。如果你上面的方法还不能满足，也可以采用通常分析薄层中使用的化学检测方法。10%硫酸乙醇溶液显色4。我做的植化是乙酸乙酯和正丁醇两个组分的分离，乙酸乙酯这个好办，正丁醇这个极性的看到的例子不多，有的说了也不是很详细，可否说个较为详细的例子给我方便模仿。详细说一下用硅胶或其他不是很贵的吸附剂方法所用到的洗脱液种类及其一般所用梯度比例。另说明一下我做材料含色素是比较少的。由于本人没有做过正丁醇部位的分离，所以不能给你详细的解答，不过我在网上搜索了一些相关信息给你参考。如下：近年来，部位分离更多地采用石油醚(或苯)-氯仿(或乙醚)-醋酸乙酯-正丁醇-水的五部位法。正丁醇部位的分离一向是分离工作中的难点。正丁醇部位往往含有单糖、二糖等小分子糖，多种酚类化合物，以及苷类化合物，极性较大，在硅胶柱上吸附较多，成点性差，分离效果不好。因此，一般说来，对于正丁醇部位可采取以下方法： 1. 大孔树脂柱分段。 水溶后上样，依次用水，30%、60%、95%乙醇溶液洗脱，分别合并、收集。一般说来目标化合物多在60%段，水，30%段多为一些水溶性单糖、二糖及多酚类化合物，可以考虑弃去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大极性段重叠，可以乙酸乙酯部位合并处理。 2. 反相硅胶分段。 如果正丁醇部位量不是太大，或者有大反相柱，可以考虑用反相柱砍段。需要提醒注意的是，由于一般是用正相硅胶板检测化合物分离情况，所以反相柱 砍段后往往各组份在硅胶板上看起来比较混乱，不如硅胶柱砍段后那么直观，一定要小心对比，否则会越分越乱。 3.正相柱分配色谱层析。 如果正丁醇部位量太大，或者没有大的相柱用来分段，那么可以考虑氯仿：甲醇：水 体系来砍段。一般可用8：2：1、7：3：1以及6.5：3.5：1依次洗脱，效果不会很好，但两到三次反复上柱后各部分还是可以看得到点的。内蒙古黄芪中黄芪苷的提取分离方法：大致内容如下内蒙古黄芪根→95%乙醇渗漉→乙醇回收，正丁醇萃取→回收正丁醇，上反相硅胶以20%，40%，60%，95%乙醇洗脱→得A、B部分（95%乙醇得到）A部分：→正相硅胶，不同比例的氯仿-甲醇-水洗脱→浓缩，氯仿-甲醇重结晶→得黄芪苷2、母液→氯仿-甲醇重结晶得黄芪苷4.B部分：→正相硅胶，不同比例的氯仿-甲醇-水洗脱→得a、b、c部分。a部分→浓缩重结晶得胡萝卜苷。b部分→浓缩重结晶得谷甾醇。c部分→浓缩重结晶得结晶。
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非常感谢 chemist_yx 的帮忙！
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用聚酰胺柱色谱分离下列黄酮类化合物，乙醇一水进行洗脱，出柱的顺序为A.单糖苷一双糖苷-三糖苷-苷
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提问人：匿名网友
发布时间：
用聚酰胺柱色谱分离下列黄酮类化合物，乙醇一水进行洗脱，出柱的顺序为A.单糖苷一双糖苷-三糖苷-苷元B.苷元-单糖苷-双糖苷-三糖苷C.三糖苷-苷元-单糖苷-双糖苷D.苷元-双糖苷-三糖苷-单糖苷E.三糖苷一双糖苷一单糖苷一苷元请帮忙给出正确答案和分析，谢谢！
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