EB病毒IgM与DNA检测在小儿EB病毒相关疾病诊断中的价值研究
目的：探讨ELISA和荧光定量PCR方法在诊断小儿多种EB病毒感染相关性疾病中的临床意义。方法：采用ELISA和荧光定量PCR方法检测520例小儿多种EBV感染相关性疾病EBV-IgM 抗体与EBV-DNA。结果：EBV-IgM 检测阳性率和EBV-DNA 检测阳性率在上呼吸道感染、传染性单核细胞增多症、支气管炎及肺炎、特发性血小板减少性紫癜及病毒性心肌炎等EB V相关性疾病患儿有显著差异（ P＜0．01或 P＜0．05）；在上呼吸道感染及传染性单核细胞增多症患儿EBV-DNA检测阳性率显著高于EBV-IgM 检测阳性率（P＜0．01），而在支气管炎及肺炎、特发性血小板减少性紫癜及病毒性心肌炎患儿两种检测阳性率无明显差异（ P＞0．05）。结论：EB V-IgM和EBV-DNA检测对小儿多种EBV感染相关性疾病的诊断具有重要价值，尤其是EBV-DNA检测在某些EB V感染相关性疾病的诊断上更为敏感。
作者单位：
栏目名称：
论著 -- 临床研究
您可以直接复制参考文献内容，或按指定格式导出。
参考文献：
指定格式：
客服热线： 转3 (周一至周五：8:00至17:00)
客服邮箱：.cn广西中医学院第一附属医院检验科,
医药、卫生
目的探讨应用PCR技术检测EB病毒DNA（EBV—DNA）的临床应用价值。方法应用PCR和荧光检测技术检测外周血EBV—DNA，对100例阳性病例的临床特点进行回顾性分析。结果病例年龄1个月至12岁，中位年龄3岁，〈3岁65例，3～7岁25例，〉7岁10例；传染性单核细胞增多症（IM）组EBV-DNA的阳性率为84．0％（84／100），对照组阳性率为5．0％（2／40），差异有统计学意义（P〈0．01）；IM患儿早期EBV的含量[（75．52±175．11）×10^3copies／ml]，明显高于恢复期EBV的含量[（0．67±2．27）×10^3copies／ml]（P〈0．01）。结论PCR法检测EBV—DNA时间短，准确性好，灵敏度高，在EB病毒感染相关疾病诊断中有一定价值。EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
您当前的位置： &
& EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
点击图片查看大图
EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)&
欢迎来电咨询&
进口/国产&
最小起订量：
供货总量：
发货期限：
自买家付款之日起 1 天内发货
产品导航：
发布时间：
20:45:49&&有效期至：长期有效
更新时间：
EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)名 &&公司致力于为广大科研用户提供最佳科研试剂系列产品应用方案，努力追踪世界最前沿的生物科技。整合优质产品体系,只为让您满意,欢迎来电咨询!
【包装】48T
【分类】PCR-荧光试剂盒
EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)&我司提供数万种化学试剂，拥有完整、科学的质量管理体系,并随时更新科研新动态，为客户提供更完善的产品线。
本公司的部分合作单位：中科院﹑医科院﹑农科院等科研院所﹑北京大学、同济医院、复旦大学、解放军总医院、黑龙江省医院、第一军医大学、安徽省农科院、浙江大学等大学院校的重点实验室选用。
本公司为客户专业提供【EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)】等产品，更多型号价格与优惠信息，全面专业及时更新！更多产品年终优惠火热进行中，欢迎来电选购：
连钱草对照品/标准品
胃蛋白胨|CAS号无|NA
人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin1(Eotaxin1/CCL11)ELISA试剂盒,96T/48T
bs-7636R,岩藻糖转移酶1抗体|FUT1抗体价格
荜茇标准品/对照品
CAS:,4，4-双（二甲氨基）硫代二苯甲酮,4,4-双(二甲氨基)硫代二甲酮,硫代米氏酮,4,4&-四甲基二氨基硫代二苯甲酮,对,对&-四甲基二氨基二苯硫酮,4,4&-双(二甲氨基)硫代二苯甲酮,Thiomichler's ketone
金诺芬对照品/标准品
bs-13028R,二肽基肽酶10抗体|DPP10抗体价格
TNE缓冲液(10&,pH7.4)
鱼骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA检测试剂盒说明书
短葶山麦冬皂苷C对照品/标准品
异喹啉物对照品/标准品
蒲公英(蒲公英)标准品/对照品
小鼠基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA检测试剂盒说明书
CAS:137-16-6,十二烷基肌氨酸钠,N-月桂酰肌氨酸钠,十二烷基肌氨钠,N-甲基-N-月桂酰甘氨酸钠,SLS
虫草素对照品/标准品
CAS:-6,7-[(1R,4R,6R,9R)-4-(1,1-二氟戊基)-4-羟基-8-氧代-5-氧杂双环[4.3.0]壬烷-9-基]庚酸 Lubiprostone现货供应
鱼腥草标准品/对照品
bs-0769R,多腺苷二磷酸多聚酶抗体/多聚ADP-核糖聚合酶1|PARP1抗体价格
%血红蛋白溶液 100ml培养基厂家
鸡性肠炎(DEV)ELISA试剂盒,96T/48T
bs-15313R,9号染色体开放阅读框139抗体|C9orf139抗体价格
小鼠葡萄糖-6-磷酸酶/葡萄糖-6-磷酸酯酶(G-6-Pase)ELISA试剂盒,96T/48T
bs-4232R,自噬体ATG16L2蛋白抗体|ATG16L2抗体价格
兔子组胺(HIS)ELISA试剂盒,96T/48T
木兰箭,cas:对照品
F1300,仓鼠血清
bs-3129R,磷酸化Ephrin B抗体|phospho-Ephrin B (Tyr324 + Tyr29)抗体价格
来曲唑厂家|CAS号-5
石菖蒲标准品/对照品
无水磷酸氢二钠对照品/标准品
人肽-主要组织相容性复合体复合物(pMHC)ELISA试剂盒,96T/48T
醋酸阿比特龙厂家|CAS号-2
重组人 Dim2/TXNL4B 蛋白(His 标签)/13501-H07E
秦皮甲素标准品,cas:531-75-9对照品
CAS:,去氢二异丁香酚标准品/对照品
10％氢氧化鉀|CAS号|Potassium hydroxide
CAS:-6,麦白霉素现货供应
重组人 CD1B/CD1A 蛋白(Fc 标签)/11831-H02H
CAS:587-98-4,酸性金黄G有现货
野马追内酯A对照品/标准品
人B细胞分化因子(BCDF)ELISA试剂盒,96T/48T
大鼠己糖激酶(HK)ELISA试剂盒,96T/48T
人水通道蛋白5(AQP-5)ELISA试剂盒,96T/48T
CAS:,黄芪甲苷价格
bs-2678R,转录接头蛋白EP300抗体|KAT3B/Ep300抗体价格
bs-6810R,构成激活过氧化酶活化增生受体&样蛋白2抗体|FAM120C抗体价格
CAS:451-82-1,邻价格
乙酰苯胺对照品/标准品
CAS:,荧光黄3G有现货
EB病毒(EBV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)& &一站订购Elisa试剂盒、生物试剂、培养基、标准品等科研试剂产品，到江莱生物，安全便捷！我们全心全意，愿您10分满意，欢迎新老客户来电。本产品网址：/b2b/jianglai05/sell/itemid-.html
能否提供样品
最小订货量
销售条款及附加条件
质量/安全认证
请选择常用问题
我对贵公司的产品非常感兴趣，能否发一些详细资料给我参考？
请您发一份比较详细的产品规格说明，谢谢！
请问贵公司产品是否可以代理？代理条件是什么？
我公司有意购买此产品，可否提供此产品的报价单和最小起订量？
报价请注明是否含税，是否可以开具增值税发票？
(不用打字)
我对您在中国贸易网发布的这个产品很感兴趣，能否发一份详细资料给我参考？非常感谢您。
联系电话 *荧光定量PCR_百度百科
声明：百科词条人人可编辑，词条创建和修改均免费，绝不存在官方及代理商付费代编，请勿上当受骗。
荧光定量PCR
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
荧光定量PCR原理
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;时，Taq酶的5’端－3’端活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。或者使用荧光染料SYBR。SYBR可以结合到双链DNA上面，当体系中的模板被扩增时，SYBR可以有效结合到新合成的双链上面，随着PCR的进行，结合的SYBR染料越来越多，被仪器检测到的荧光信号越来越强，从而达到定量的目的。
荧光量化PCR原理
荧光定量PCR应用领域
临床疾病诊断：各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价；地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。
动物疾病检测：禽流感、、、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、。
食品安全：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。
科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。
应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。
荧光定量PCR前景展望
实时荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合，荧光定量PCR在医学检测及其他各个领域中的应用前景将更加广阔，令人欣喜。尽管如此我们也应清晰认识到，FQ-PCR技术在我国各个研究领域的应用并不多见，这就需要我国学者迎头赶上，使FQ-PCR技术更充分地推广，以推动研究工作的快速发展。[1]
荧光定量PCR操作步骤
荧光定量PCR　实验步骤：
荧光定量PCR样品RNA的抽提
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
荧光定量PCRRNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 μg RNA/ml。样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 μg/ml。具体计算如下：
RNA溶于40 μl DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495μl的TE中，测得A260 = 0.21
RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 μg/ml = 840 μg/ml 或 0.84 μg/μl
取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 μl，剩余RNA总量为：
35 μl × 0.84 μg/μl = 29.4 μg
②纯度检测
RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
2）变性琼脂糖凝胶电泳测定
1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
10×MOPS电泳缓冲液
0.4M MOPS，pH 7.0
0.1M 乙酸钠
0.01M EDTA
灌制凝胶板，预留加样孔至少可以加入25 μl溶液。胶凝后取下梳子，将凝胶板放入电泳槽内，加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。
②准备RNA样品
取3μgRNA，加3倍体积的甲醛上样染液，加EB于甲醛上样染液中至终浓度为10μg/ml。加热至70℃孵育15分钟使样品变性。
上样前凝胶须预电泳5min，随后将样品加入上样孔。5–6V/cm电压下2h，电泳至溴酚兰指示剂进胶至少2–3cm。
④紫外透射光下观察并拍照
28S和18S核糖体RNA的带非常亮而浓（其大小决定于用于抽提RNA的物种类型），上面一条带的密度大约是下面一条带的2倍。还有可能观察到一个更小稍微扩散的带，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖体RNA）组成。在18S和28S核糖体带之间可以看到一片弥散的EB染色物质，可能是由mRNA和其它异型RNA组成。RNA制备过程中如果出现DNA污染，将会在28S核糖体RNA带的上面出现，即更高分子量的弥散迁移物质或者带，RNA的降解表现为核糖体RNA带的弥散。用数码照相机拍下电泳结果。
荧光定量PCR样品cDNA合成
①反应体系
逆转录buffer
逆转录酶MMLV
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
③取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。
荧光定量PCR样品
管家基因（β-actin）实时定量PCR
①β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释（加水27μl并充分混匀）为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
②反应体系如下：
标准品反应体系
SYBR Green 1 染料
阳性模板上游引物F
阳性模板下游引物R
阳性模板DNA
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
管家基因反应体系：
SYBR Green 1 染料
内参照上游引物F
内参照下游引物R
待测样品cDNA
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
③制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
荧光定量PCR模板
①针对每一需要测量的基因，选择一确定表达该基因的cDNA模板进行PCR反应。
反应体系：
10×PCR缓冲液
dNTP混合液
加水至总体积为
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
35个PCR循环（94℃1分钟；55℃1分钟；72℃1分钟）； 72℃延伸5分钟。
②PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
③将PCR产物进行10倍梯度稀释: 设定PCR产物浓度为1×1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104几个浓度梯度。
荧光定量PCRPCR
①所有cDNA样品分别配置实时定量 PCR反应体系。
体系配置如下：
SYBR Green 1 染料
待测样品cDNA
轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
②将配制好的PCR反应溶液置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增反应。反应条件为：93℃2分钟预变性，然后按93℃ 1分钟，55℃1分钟，72℃1分钟，共40做个循环，最后72℃7分钟延伸。
荧光定量PCR引物列表
引物设计软件：Primer Premier 5.0，并遵循以下原则：引物与模板的序列紧密互补；引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构；引物不在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配)。
荧光定量PCR电泳
各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。[2]
．中国知网．2006-09[引用日期]
．荧光定量PCR[引用日期]