潮霉素筛选浓度 b 筛选肿瘤细胞浓度一般是多少

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-07-24 05:56 标签： 潮霉素筛选浓度
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Hygromycin B（潮霉素B）是一种由吸水链霉菌产生的抗生素，是氨基糖苷类抗生素之一，为微黄褐色粉末。Hygromycin B（潮霉素B）可通过抑制细菌、真菌和一些高等真核生物细胞内的蛋白质生物合成来杀死这些生物。潮霉素B可溶于甲醇、乙醇和水，但在乙醚、氯仿或苯中都几乎不溶。
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Hygromycin B（潮霉素B）是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成能杀死细菌、真菌和高等真核细胞，用于筛选和保持转化（转染）有潮霉素抗性基因的原核和真核细胞。

与大多数氨基糖苷类抗生素一样，通过中断易位并增加 80S 核糖体上的错误翻译抑制蛋白质的合成。可以稳定核糖体大亚基上的tRNA结合位点，导致空载tRNA不能脱离核糖体，抑制了翻译的继续进行，潮霉素的抑制作用对于原核细胞与真核细胞的核糖体都是有效的。

在实验室中，Hygromycin B（潮霉素B）被用于选择和保持拥有潮霉素抗性基因的原核和真核细胞。潮霉素抗性基因编码一个激酶（潮霉素激酶），它通过磷酸化潮霉素B使其失活。自从潮霉素的抗性基因被发现以来，Hygromycin B（潮霉素B）就被用来作为转基因实验中的标准筛选方法。目前植物组织培养中常用潮霉素B进行筛选。由于它所采用的作用模式与 Geneticin?、Blasticidin S 和 Zeocin? 不同，因而十分适合与其它选择试剂配合用于双选择实验。

工作浓度：细胞培养中为50 - 1,000 ?g/ml。哺乳动物细胞培养通常使用的浓度为200 ?g/ml。但是，*适浓度必须通过实验确定，这需要根据细胞类型不同而改变。

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华中农业大学 硕士学位论文 红肉脐橙（Citrus sinensis [L.]Osbeck）番茄红素β-环化酶 基因（Lcyb）功能的初步验证和分析 姓名：周文静 申请学位级别：硕士 专业：果树学 指导教师：邓秀新 红肉脐橙(Citrus 基因(Lcyb)功能的初步验证和分析 摘要 红肉脐橙(Citrus sinensis【L．】Osbeck)是华盛顿脐(Citrus 的红肉突变体，是果肉呈粉红的脐橙品种，其果肉中主要含有番茄红素和∥．胡萝卜 素，是研究柑橘果实类胡萝卜素代谢的良好素材。番茄红素伊环化酶(LCYB)在 柑橘类胡萝卜素合成代谢途径中起关键作用，该酶能使反式番茄红素转化为伊胡萝 卜素，是番茄红素向下游代谢物质转化的一个关键分支点。 目前，本课题组已经从红肉脐橙中克隆到番茄红素伊环化酶基因(Lcyb)，为 了对该基因的功能进行鉴定分析，本研究以红肉脐橙中克隆到的番茄红素伊环化酶 基因(Lcyb)两个转录本的cDNA为目的片段，通过农杆菌介导的转基因手段，以 esculentum Mill．)为受体材料进行了遗传转化，通过抗性筛选， 番茄(Lycopersicon 获得转基因植株群体，通过对转基因植株群体及其后代进行分子水平的检测和生理 指标测定分析，表明红肉脐橙中克隆到的番茄红素伊环化酶基因(Lcyb)及其产物 具有正常功能。主要结果如下： 1．利用已构建成功的含有红肉脐橙番茄红素伊环化酶基因(Lcyb)cDNA片段的 载体，通过农杆菌介导的遗传转化方法将它们成功导入番茄品种中蔬5号中。获得 卡那霉素抗性植株14棵，提取部分To代转化番茄PCR阳性植株的基因组DNA， 1．3个不等。 2．To代转化番茄中有两棵植株的果实在成熟时果实色泽表现出明显的改变，成 熟果实呈黄色，对照的非转化植株成熟果实则为红色。对T0代番茄果实进行了色 差值的测定，发现多数转基因果实相对于对照偏黄。通过HPLC(高效液相色谱)测 定黄色转基因果实的色素成分和比例发现，其伊胡萝卜素的含量极显著的高于对 照，而番茄红素的含量则显著低于对照。说明转基因植株中，外源伊环化酶基因 (三啪)确实超量表达，致使番茄红素大量向伊胡萝卜素转化，导致果实积累伊胡萝 卜素而呈现出黄色。 相对表达量，14株转基因植株中有8株检测到目的基因的表达，表达量各有高低。 通过Real—timePCR检测转基因植株果实中其他色素代谢相关基因的表达情况，发现 在色素代谢途径中，位于Lcyb基因上游的基因在转基因植株中的表达量普遍降低，

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