简述高分子的溶解ip3-dag途径的分子组成及功能

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生化重点笔记38-5
27.真核基因启动子是预案和操纵子中启动序列的同;28.所谓增强子就是远离转录起始点,决定基因的时;29.某些基因含有负性调节元件――沉默子;30.转录调节因子的分类:;①基本转录因子;②特异转录因子――为个别基因转录所必须,决定改基;30.转录调节因子的结构:;①DNA结合域,最常见的DNA结合域的结构形式是;②转录激活域;③二聚化结构域;31.mRNA转
27.真核基因启动子是预案和操纵子中启动序列的同义语,指的是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制元件。TATA盒,GC盒和CAAT盒是很多基因中常见的功能组件
28.所谓增强子就是远离转录起始点,决定基因的时间、空间特异性表达、增强启动子转录活性的DNA序列
29.某些基因含有负性调节元件――沉默子
30.转录调节因子的分类:
①基本转录因子
②特异转录因子――为个别基因转录所必须,决定改基因的时间、空间特异性表达
30.转录调节因子的结构:
①DNA结合域,最常见的DNA结合域的结构形式是锌指结构以及碱性氨基酸残基形成的α螺旋。类似的碱性DNA结合域还见于碱性亮氨酸拉链
②转录激活域
③二聚化结构域
31.mRNA转录激活需要转录起始复合物的形成
32.转录后的调节:
①hnRNA加工成熟的调节
②mRNA运输、胞质内稳定性的调节
运铁蛋白受体mRNA的降解速率受胞质内某些蛋白质成分的调节,并与mRNA自身结构有关
第十四章 基因重组与基因工程
1. DNA重组包括同源重组、特异位点重组和转座重组等类型
2. 同源重组是指发生在同源序列的重组,它通过链的断裂和再练接,在两个DNA分子同
源序列间进行单链或双链片段的交换,又称基本重组
四个关键步骤:
① 两个同源染色体DNA排列整齐
② 一个DNA的一条链断裂,并与另一个DNA对应的链连接,形成Holiday中间体 ③ 通过分支移动产生异源双链DNA
④ Holiday中间体切开并修复,形成两个双链重组DNA。如果切开的链与原来断裂的
链为同一条链。重组体还有一条异源双链区,其两侧来自同一亲本DNA,称为片段重组体。但如切开的链与原来断裂的链不是同一条链,重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA,称为拼接重组体
3. 当细胞乎哦细菌通过菌毛相互接触时,质粒DNA就可从一个细胞(细菌)转移至另一
细胞(细菌),这种类型的DNA转移至另一个细胞,这种类型的DNA转移称为接合作用。只有某些较大的质粒,如F因子方可通过接合作用从一个细胞转移至另一个细胞
4. 通过自动获取或人为地供给外源DNA,使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型,
就是转化作用
5. 当病毒从被感染的细胞(供体)释放出来,两次感染另一细胞(受体)时,发生在供体
细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转到作用
6. 特异位点重组即特异位点间发生的整合。由整合酶催化,在两个DNA序列的特异位点
间发生的整合称位点特异的重组
7. 一些常见的特异位点重组:
① γ噬菌体DNA的整合
② 细菌的特异位点重组:抗原相位的改变是由一段995bp的DNA――H片段发生倒
③ 免疫球蛋白基因的重排
抗体免疫球蛋白由两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成
8. 由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座
9. 插入序列转座:典型的插入序列(IS)是长750-1500bp的DNA片段,其中包括两个分
离的、由9~41bp构成的反向重复序列及一个转座酶编码基因,后者的表达产物可引起转座
10. 保守性转座是插入序列从原位迁至新位。复制性转座是插入序列复制后,其中的一个复
制本迁移至新位,另一个仍保留在原位
11. 转座子就是可从一个染色体位点转移至另一位点分散的重复序列
转座子包括了反向重复序列、转座酶基因、含有抗生素抗性等的有用基因
12. 克隆就是来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合,获取同一拷贝的集合,获取同一拷贝
的过程称为克隆化,也就是无性繁殖
13. 克隆的意义:分离获取某一感兴趣的基因或DNA
14. 限制性内切核酸酶就是识别DNA的特意序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA
的一类内切酶。功能:能特异水解双链DNA的磷酸二酯键。末端切口为粘性末端切口或平端切口
15. 识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称,通常称这种特殊的结构顺序为回文结构
16. 同尾酶:有些限制核酸内切酶虽然识别序列不完全相同,但切割DNA后,产生相同的
粘性末端,称为同尾酶
17. 在某些限制性内切核酸酶虽然识别序列不完全相同,但切割DNA后产生相同类型的粘
性末端,称配伍末端
18. 同工异源酶:来源不同的限制酶,但能识别和切割同一位点,这些酶称为同工异源酶
19. 重组DNA技术中常用的工具酶:
限制性核酸内切酶:识别特异序列,切割DNA
DNA连接酶:使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接
DNA聚合酶Ⅰ
Klenow片段又名DNA聚合酶Ⅰ大片段,是体外复制时常用的DNA片段
20. 目的基因:感兴趣的DNA序列或基因
21. 目的基因的获取方法:
① 化学合成法(一般用于小分子活性多肽基因而当合成)――优点:合成速度快,准
确性极高 缺点:一般只适用于小分子
② 基因组DNA文库
③ cDNA文库――利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA,再复制双链cDNA片段 ④ 聚合酶链反应(PCR)
前提:必须知道目的基因5’、3’端的各一段核苷酸序列及其他相关条件,以设计出合适的引物
22. 克隆载体是为“携带”感兴趣的外源DNA、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的
蛋白质所采用的一些DNA分子。为插入的外源DNA序列可转录、进而翻译成多肽链而特异设计的克隆载体又称表达载体
23. 质粒是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子。特点为能在宿主细胞独立自主
的进行复制,带有某些遗传信息,所以会赋予宿主细胞一些遗传性状
24. 载体的选择标准:
① 有自身复制子
② 具有多个单一酶切位点
③ 有可供选择的遗传标记
④ 分子量尽量小,复制能力要强
⑤ 拷贝数要高
⑥ 表达载体要具备使目的基因表达的完整转录单位
25. 稍早经γ噬菌体DNA造成的载体系统有λgt系列(插入型载体,适用于cDNA克隆)
和EMBL系列(置换型载体,适用于基因组DNA克隆)
26. 外源基因与载体的连接:
① 粘性末端连接
② 平端连接DNA连接酶可催化相同和不同特异性内切核酸酶的平端之间的连接 ③ 同聚物加尾连接
④ 人工接头连接
27. 受菌体选择条件:安全宿主菌、限制酶和重组酶缺陷、处于感受态
28. 导入重组DNA分子有转化、转染和感染等不同方式
29. 重组体的筛选:
直接选择法:
① 抗药性标志选择
② 标志补救
③ 分子杂交法
免疫学方法
30. 原核的克隆表达体系的优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产工艺
要求有:①含大肠杆菌是以的选择标志,便于重组子的筛选
②具有调控转录、产生大量mRNA的强启动子
③含适当的翻译控制序列,翻译起始点等
④含有合理设计的多接头克隆位点
31. 原核的克隆表达体系的不足是:
① 由于缺乏转录后加工机制,E.coli表达体系只能表达克隆的cDNA,不宜表达真和
② 由于缺乏适当的翻译后加工机制,E.coli表达体系不能形成适当的折叠或进行糖基
③ 表达的蛋白质常常形成不溶性的包涵体,欲使其具有活性尚需进行复杂的复性处理 ④ 很难在E.coli表达体系表达大量的可溶性蛋白
32. 常用于细胞转染的方法有:磷酸钙转染、电穿孔、脂质体转染及显微注射等
⑴自然基因的转录和重组
接合作用、转化、转导作用、同源重组
概念:克隆、基因工程、工具酶、目的基因、基因载体、基本原理和过程
第十五章 细胞信息转导
1. 细胞通讯是体内一部分细胞发出信号,另一部分细胞接收信号并将其转变为细胞功能变
2. 细胞针对外源信息所发生的细胞内生物化学变化及效应的全过程称为信号转导
3. 内分泌信号距离远、作用缓慢、范围持久
旁分泌信号一般作用时间较短
神经递质距离短、传递快、信号准确
4. 细胞通讯方式称为膜表面分子接触通讯,属于这一类通讯的有相邻细胞间粘附因子的相
互作用、T淋巴细胞与B淋巴细胞表面分子的相互作用等
5. 受体是细胞膜上或细胞内能识别外源化学信号并与之结合的成分,其化学本质是蛋白
质,个别糖脂也具有受体作用。
6. 能够与受体特异性结合的分子称为配体
7. 受体与配体结合的特点:
高度特异性、高度亲和力、可饱和性、可逆性、特定的作用模式
8. 按照受体在细胞内的位置,受体分为细胞表面受体(膜受体)和细胞内受体(胞内受体)
(多为转录因子)
9. 膜受体接收的是不能进入细胞的水溶性化学信号(生长因子、细胞因子和水溶性激素等)
和位于邻近细胞表面分子的信号(粘附分子等)
10. 受体介导的跨细胞模信号转导是一细胞内网络结构。构成这一网络系统的基础是一些蛋
白质分子和小分子活性物质,这些蛋白质分子称为信号转导分子,小分子物质亦被称为第二信使
11. 细胞外的信号经过受体进入细胞,通过一些蛋白质和小分子活性物质进行传递,这些传
递信号的分子称为信号转导分子
12. 鸟苷酸结合蛋白是重要的信号通路开关,鸟苷酸结合蛋白简称G蛋白
13. G蛋白自身均具有GTP酶活性,可将结合的GTP水解为GDP,回到非活化状态
14. 活化性:α亚基与GTP结合,与β、γ亚基分离
15. 介导七跨膜受体信号转导的异源三聚体G蛋白,以α、β、γ三聚体形式存在于细胞质
膜内侧(非活化型),与GDP结合。β、γ亚基在细胞内紧密结合呈二聚体,而与α分离,且α与GTP结合――活化型
16. G蛋白循环:活化型与非活化型不停转换
17. 膜表面受体又可分为离子通道受体、七跨膜受体(G-蛋白耦连受体)和单膜受体(酶偶
联受体)等三种类型
18. 单跨膜受体大多为糖蛋白,仅含有一个跨膜区段,其信号转导的共同特征是需要直接依
赖酶的催化作用作为信号传递的第一步反应,故又称为酶耦连受体
19. 蛋白激酶不是cAMP和cGMP的唯一靶分子
20. 钙离子是细胞内重要的第二信使
21. 钙调蛋白可看作是细胞内钙离子的受体(肌收缩除外)
22. 蛋白质的可逆磷酸化修饰是最重要的信号通路开关
蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶和蛋白酪氨酸激酶是主要的蛋白激酶
23. 低分子质量G蛋白在多种细胞信号转导途径中亦具有开关作用,具有GTP酶的活性
24. 蛋白质相互作用的结构基础则是各种蛋白质分子中的蛋白质相互作用结构域。特点是:
①一个信号分子中可含有两种以上的蛋白质相互作用的结构域 ②同一类蛋白质相互作用结构域可存在于多种不同的分子中 ③这些结构域均为非催化结构域
25. G蛋白偶联受体通过G蛋白-第二信使-靶分子发挥作用
26. G蛋白激活AC:ATP变为cAMP→蛋白激酶A变构→效应蛋白磷酸化
27. 血管紧张素Ⅱ受体通过PLC-IP3/DAG-PKC通路介导信号转导
28. 表皮生长因子是一种多肽,具有存进创伤后表皮愈合等作用。SOS是低分子量G蛋白的
正调节因子,含有可以被Grb2的SH3识别和结合的模体结构
29. JAK-STAT通路转导白细胞介素受体信号
30. 细胞信号转导过程的特点和规律:
① 对于外源信息的反应信号的发生和终止十分迅速,即可以迅速满足功能调节的需
要,已经产生的信号又需要及时终止以便细胞恢复常态
② 信号转导过程是多级酶反应,因而具有级联放大反应
③ 细胞信号转导系统具有一定的通用性,一些信号转导分子和信号转导通路常常为不
同的受体共用,而不是每一个受体都有自己完全专用的分子和途径
④ 不同信号转导通路之间存在广泛的信息交流
⑴第二信使、受体、配体的概念
⑵受体的分类
⑶G蛋白的概念、结构和作用机制
⑷受体作用的特点
⑸cAMP-蛋白激酶途径:
cAMP的合成与分解以及作用机制
⑹钙离子依赖性蛋白激酶途径:
IP3、DAG的生物合成和功能
钙离子、PKC、Ca-CaM的生理功能、整个途径
附录一:氨基酸的三字符号
附录二:一些辅酶所含的维生素种类
NAD+(辅酶Ⅰ)
NADP+(辅酶Ⅱ)
FMN(黄素单核苷酸)
FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)
TPP(焦磷酸硫胺素)
辅酶A(CoA)
Phe Trp Tyr
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蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)蛋白激酶C是偶联受体系统中的, 在非活性下是水溶性的,游离存在于中,激活后成为膜结合的酶。蛋白激酶C的激活是脂依赖性的,需要膜脂的存在,同时又是Ca2+依赖性的,需要胞质溶胶中Ca2+浓度的升高。当DAG在中出现时,中的蛋白激酶C被结合到质膜上,然后在Ca2+的作用下被激活。同一样,蛋白激酶C属于多功能丝氨酸和苏氨酸激酶。
蛋白激酶CPKC亚类
到目前为止,在哺乳动物组织内已确定10种PKC亚类(8-3),分为A、B、C三组,A组称为典型或传统的PKC(classicalor conventional PKC,cPKC),包括α、βI、βⅡ和 γ亚类,其中βI和βⅡ有高度的同源性,是由同一mRNA的不同剪接而成,A组成员分子量在76-78kDa。B组为新型PKC(novel PKC,nPKC),包括δ、ε、η(L)和θ亚类,分子量在77-83kDa。C组为非典型PKC(atypicalPKC,aPKC),由ζ和λ亚类组成,分子量较小为67kDa。
蛋白激酶CPKC的结构
PKC亚类的分子结构
PKC的所有亚类都由一条单肽链组成(图8-11),分子量大约为67-83kDa,其结构可分为四个保守区C1-C4(mPKC和aPKC缺少C2区)和五个可变区V1-V5。基中C1区可能是膜结合区,并且含有富含半胱氨酸的随机重复序列Cys-X2-Cys-X13(14)-Cys-X2-Cys-X7-Cys-X7-Cys(X代表任何一种氨基酸),这段顺序与在许多金属-蛋白质及调节有关的DNA结合蛋白中的半胱氨酸-锌-DNA结合指形区(cysteine-Zinc-DNabinding finger)保守顺序Cys-X2-Cys-X13-Cys-X2-Cys相似。对PKC的多肽片段进行分析发现,该序列与佛波酯和(DAG)的结合有关。C2区与PKC对Ca2+的敏感性有关。C1和C2在结构上不同于其它蛋白激酶,能结合Ca2+、磷脂、DAG和TPA,因此C1和C2区又称为调节区。C3区包括一个ATP结合序列Gly-X-Gly-X-X-Gly-Lys,该区域与其它蛋白激酶的ATP结合位点具有很高的同源性,又称催化区。C4区包含一个底物结合区,是识别磷酸化底物所必需的。
已发现了至少11种亚型,其结构有一定的而又有所差别,导致其功能和调控
蛋白激酶图示
的多样性。新合成的PKC一般需要经历活化茎环(Activation-loop,A-loop)、转角(Turn motif,TM)以及疏水模体(hydrophobic motif,HM)的程序性磷酸化过程才能成熟,获得进一步活化的功能。
蛋白激酶C蛋白激酶C的转位与激活
蛋白激酶CPKC的转位
PKC广泛分布于多种组织、器官和细胞,中PKC主要存在于胞浆中,当细胞受到刺激后,PKC以Ca2+依赖的形式从胞浆中移位到细胞膜上,此过程称之为转位(translocation)。一般将PKC的转位作为PKC激活的标志。 [2]
蛋白激酶CPKC的激活
PKC的活性依赖于钙离子和磷脂的存在,但只有在磷脂代谢中间产物二酰基甘油(DAG)存在下,生理浓度的钙离子才起作用,这是由于DAG能增加PKC对底物亲和力的缘故。磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)在磷脂酶-C作用下水解生成DAG和IP3。IP3促进细胞内钙离子的释放,在激活PKC过程中与DAG起协同作用。乙酸豆塞外佛波酯(12-o-tertradecanoylphordol-13-acetate,TPA;或phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)是一种促肿瘤剂,由于基结构与DAG相似,可在很低尝试下模拟DAG,活化PKC,使PKC亲和力增至10-7M。PKC是TPA的受体,当TPA插入细胞膜后可以替代DAG而直接活化PKC。当过高剂量TPA处理细胞可使靶细胞中PKC迅速耗竭,反而影响细胞的信号传递。
多种化学物持或抗生素对PKC活性具有抑制作用,根据抑制剂作用PKC靶部位的不同可以将抑制剂分为二组:一组是作用于催化区的抑制剂,它们可与蛋白激酶的保守残基结合,因此对PKC无明显的选择性;另一组是作用于调节区的抑制剂,它们可与Ca2+、磷脂和二酰基甘油/佛波酯相结合,因而有较高的选择性 。
蛋白激酶C蛋白激酶C的作用
蛋白激酶C是一种细胞质酶,在未受刺激的细胞中,PKC主要分布在细胞质中, 呈非活性构象。一旦有第二信使的存在,PKC将成为膜结合的酶,它能激活细胞质中的酶,参与生化反应的调控, 同时也能作用于细胞核中的转录因子, 参与基因表达的调控, 是一种多功能的酶。 [3]
蛋白激酶C对糖代谢的控制
在肝细胞中, 蛋白激酶C与协作磷酸化,抑制葡萄糖聚合酶(glucose-polymerizing enzyme)的活性,促进糖原代谢
cAMP介导的促进糖原分解、抑制合成作用是由胰高血糖素受体和β肾上腺素受体结合了相应激素所引起;而IP3、DAG和Ca2+介导的促进糖原分解和抑制糖原合成的是由α肾上腺受体结合肾上腺素所引起。cAMP激活蛋白激酶A,而IP3、DAG和Ca2+ 激活蛋白激酶C.[2]
蛋白激酶C对细胞分化的控制
肌细胞生成素是一种转录因子,在肌细胞分化中起关键作用。在成肌细胞(myoblast)中, 蛋白激酶C可使肌细胞生成素磷酸化,抑制了肌细胞生成素与DNA结合的能力,因而阻止了细胞分化为肌纤维。
蛋白激酶C参与基因表达调控
蛋白激酶C至少可通过两种途径参与基因表达的控制。一种途径是蛋白激酶激活一个磷酸化的,使MAP蛋白激酶磷酸化,磷酸化的MAP蛋白激酶将基因调节蛋白Elk-1磷酸化,使之激活。激活了Elk-1与一个短的DNA序列(称为血清反应元件,SRE)结合,然后与另一个因子(血清反应因子,SRF)共同调节基因表达。另一种途径是蛋白激酶磷酸化并激活抑制蛋白Iκ-B,释放基因调节蛋白NF-κ-B,使之进入细胞核激活特定的转录。[4]
蛋白激酶C参与长时程抑制(LTD)
小脑LTD是由于PKC激活间接或直接引起AMPA受体的磷酸化,使AMPA受体转化为稳定的失敏状态或使受体发生内化,结果导致LTD[5]
蛋白激酶C此外
有人认为PKC能够催化未被其他激酶催化的蛋白,如催化与分泌和增殖有关的蛋白磷酸化。还可以活化Na+-K+交换系统、使细胞内H+减少、提高细胞质中的pH,还可以提高Na+/K+泵的运转等。 蛋白激酶C在细胞的生长、分化、细胞代谢以及转录激活等方面具有非常重要的作用 。[4]
PKC的活性下降与肿瘤也有密切关系。[3]
.医源世界[引用日期]
.中华医学信息网[引用日期]
.中华医学信息网[引用日期]
.中华医学信息网[引用日期]
李国彰.神经生理学:人民卫生出版社,2007:80

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