蛋白质(考研必备生物化学笔记)-博泰典藏网
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蛋白质(考研必备生物化学笔记)
导读：用已知分子量的标准蛋白作标准曲线，即可求出未知蛋白的分子量，有些蛋白不适宜采用这个方法，如带电荷较多的（组蛋白），带较大辅基的（糖蛋白），二、蛋白质的酸碱性，蛋白质是两性电解质，蛋白质也有等电点，多数蛋白等电点为中性偏酸，偏酸的如胃蛋白酶，偏碱的如鱼精蛋白，蛋白质在等电点时净电荷为零，天然球状蛋白的可解离基团大部分可被滴定，因为球状蛋白的极性侧链基团大都分布在分子表面，有些蛋白的部分可解离基团lgM=K1－K2μR 其中K1和K2是与试验条件有关的常数。用已知分子量的标准蛋白作标准曲线，即可求出未知蛋白的分子量。有些蛋白不适宜采用这个方法，如带电荷较多的（组蛋白），带较大辅基的（糖蛋白），结构特殊的（胶原）等。 二、蛋白质的酸碱性 蛋白质是两性电解质，分子中的可解离基团主要是侧链基团，也包括末端氨基和羧基。蛋白质也有等电点，即所带净电荷为零的pH值。多数蛋白等电点为中性偏酸，约5左右。偏酸的如胃蛋白酶，等电点为1左右；偏碱的如鱼精蛋白，约为12。 蛋白质在等电点时净电荷为零，因此没有同种电荷的排斥，所以不稳定，溶解度最小，易聚集沉淀。同时其粘度、渗透性、膨胀性以及导电能力均为最小。 天然球状蛋白的可解离基团大部分可被滴定，因为球状蛋白的极性侧链基团大都分布在分子表面。有些蛋白的部分可解离基团不能被滴定，可能是由于埋藏在分子内部或参与氢键形成。通过滴定发现可解离基团的pK’值与相应氨基酸中很接近，但不完全相同，这是由于受到邻近带电基团的影响。 蛋白质的滴定曲线形状和等电点在有中性盐存在的情况下，可以发生明显的变化。这是由于分子中的某些解离基团可以与中性盐中的阳离子如钙、镁或阴离子如氯、磷酸根等相结合，因此观察到的等电点在一定程度上决定于介质中的离子组成。没有其他盐类存在下，蛋白质质子供体解离出的质子与质子受体结合的质子数相等时的pH称为等离子点。等离子点对每种蛋白质是一个常数。 各种蛋白的等电点不同，在同一pH时所带电荷不同，在一电场作用下移动的方向和速度也不同，所以可用电泳来分离提纯蛋白质。 三、蛋白质的胶体性质 蛋白质是大分子，在水溶液中的颗粒直径在1－100纳米之间，是一种分子胶体，具有胶体溶液的性质，如布朗运动、丁达尔现象、电泳、不能透过半透膜及吸附能力等。利用半透膜如玻璃纸、火胶棉、羊皮纸等可分离纯化蛋白质，称为透析。蛋白质有较大的表面积，对许多物质有吸附能力。多数球状蛋白表面分布有很多极性基团，亲水性强，易吸附水分子，形成水化层，使蛋白溶于水，又可隔离蛋白，使其不易沉淀。一般每克蛋白可吸附0.3到0.5克水。分子表面的可解离基团带相同电荷时，可与周
围的反离子构成稳定的双电层，增加蛋白质的稳定性。蛋白质能形成稳定胶体的另一个原因是不在等电点时具有同种电荷，互相排斥。因此在等电点时易沉淀。 四、蛋白质的变性(denaturation) 1.定义： 天然蛋白因受物理或化学因素影响，高级结构遭到破坏，致使其理化性质和生物功能发生改变，但并不导致一级结构的改变，这种现象称为变性，变性后的蛋白称为变性蛋白。二硫键的改变引起的失活可看作变性。 能使蛋白变性的因素很多，如强酸、强碱、重金属盐、尿素、胍、去污剂、三氯乙酸、有机溶剂、高温、射线、超声波、剧烈振荡或搅拌等。但不同蛋白对各种因素的敏感性不同。 2.表现： 蛋白质变性后分子性质改变，粘度升高，溶解度降低，结晶能力丧失，旋光度和红外、紫外光谱均发生变化。 变性蛋白易被水解，即消化率上升。同时包埋在分子内部的可反应基团暴露出来，反应性增加。 蛋白质变性后失去生物活性，抗原性也发生改变。这些变化的原因主要是高级结构的改变。氢键等次级键被破坏，肽链松散，变为无规卷曲。由于其一级结构不变，所以如果变性条件不是过于剧烈，在适当条件下还可以恢复功能。如胃蛋白酶加热至80－90℃时，失去活性，降温至37℃，又可恢复活力，称为复性（renaturation）。但随着变性时间的增加，条件加剧、变性程度也加深，就达到不可逆的变性。 3.影响因素 1)温度：多数酶在60℃以上开始变性，热变性通常是不可逆的，少数酶在pH6以下变性时不发生二硫键交换，仍可复性。多数酶在低温下稳定，但有些酶在低温下会钝化，其中有些酶的钝化是不可逆的。如固氮酶的铁蛋白在0－1℃下15小时就会失活一个可能的原因是寡聚蛋白发生解聚如TMV的丙酮酸羧化酶。 2)pH：酶一般在pH 4－10范围较稳定。当pH超过pK几个单位时，一些蛋白内部基团可能会翻转到表面，造成变性。如血红蛋白中的组氨酸在低pH下会出现在表面。 3)有机溶剂：能破坏氢键，削弱疏水键，还能降低介电常数，使分子内斥力增加，造成肽链伸展、变
性。 4 胍、尿素等：破坏氢键和疏水键。硫氰酸胍比盐酸胍效果好。 5)某些盐类：盐溶效应强的盐类，如氯化钙、硫氰酸钾等，有变性作用，可能是与蛋白内部基团或溶剂相互作用的结果。 6)表面活性剂：如SDS-、CTAB+、triton等，triton因为不带电荷，所以比较温和，经常用来破碎病毒。 淀，加热则变黄，再加碱颜色加深为橙黄色。这是因为苯环被硝化，产生硝基苯衍生物。皮肤、毛发、指甲遇浓硝酸都会变黄。 3.米伦反应 米伦试剂是硝酸汞、亚硝酸汞硝酸和亚硝酸的混合物，蛋白质加入米伦试剂后即产生白色沉淀，加热后变成红色。酚类化合物有此反应，酪氨酸及含酪氨酸的化合物都有此反应。 4.乙醛酸反应 在蛋白溶液中加入乙醛酸，并沿试4.变性蛋白的构象 胍和尿素造成的变性一般生成无规卷曲，如果二硫键被破坏，就成为线性结构。胍的变性作用最彻底。热变性和酸、碱造成的变性经常保留部分紧密构象，可被胍破坏。高浓度有机溶剂变性时可能发生螺旋度上升，称为重构造变性。 5.复性 根据蛋白质结构与变性程度和复性条件不同，复性会有不同结果。有时可以完全复性，恢复所有活力；有时大部分复性，但保留异常区；有些蛋白结构复杂，有多种折叠途径，若无适当方法，会生成混合物。 6.变性的防止和利用 研究蛋白质的变性，可采取某些措施防止变性，如添加明胶、树胶、酶的底物和抑制剂、辅基、金属离子、盐类、缓冲液、糖类等，可抑制变性作用。但有些酶在有底物时会降低热稳定性。有时有机溶剂也可起稳定作用，如猪心苹果酸脱氢酶，在25℃下保温30分钟，酶活为50％；加入70％甘油后，经同样处理，活力为109％。 变性现象也可加以利用，如用酒精消毒，就是利用乙醇的变性作用来杀菌。在提纯蛋白时，可用变性剂除去一些易变性的杂蛋白。工业上将大豆蛋白变性，使它成为纤维状，就是人造肉。 五、蛋白质的颜色反应 蛋白质中的一些基团能与某些试剂反应，生成有色物质，可作为测定根据。常用反应如下： 1.双缩脲反应 双缩脲是有两分子尿素缩合而成的化合物。将尿素加热到180℃，则两分子尿素缩合，放出一分子氨。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应生成红紫色络合物，称为双缩脲反应。蛋白质中的肽键与之类似，也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。此反应可用于定性鉴定，也可在540nm比色，定量测定蛋白含量。 2.黄色反应 含有芳香族氨基酸特别是酪氨酸和色氨酸的蛋白质在溶液中遇到硝酸后，先产生白色沉 管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环，凡含有吲哚基的化合物都有此反应。不含色氨酸的白明胶就无此反应。 5.坂口反应 精氨酸的胍基能与次氯酸钠（或次溴酸钠）及?萘酚在氢氧化钠溶液中产生红色物质。此反应可用来鉴定含精氨酸的蛋白质，也可定量测定精氨酸含量。 6.费林反应（Folin-酚）酪氨酸的酚基能还原费林试剂中的磷钼酸及磷钨酸，生成蓝色化合物。可用来定量测定蛋白含量。它是双缩脲反应的发展，灵敏度高。 六、蛋白质的分离提纯 （一）选材及预处理 1. 选材
主要原则是原料易得，蛋白含量高。蛋白质的主要来源包括动物、植物和微生物。由于种属差异及培养条件和时间的差别，其蛋白含量可相差很大。植物细胞含纤维素，坚韧，不易破碎，且多含酚类物质，易氧化产生有色物质，难以除去。其液泡中常含有酸性代谢物，会改变溶液的pH。微生物因为容易培养而常用，但也需要破碎细胞壁。动物细胞易处理，但不经济。 2.细胞破碎
如目的蛋白在细胞内，需要进行细胞破碎，使蛋白释放出来。动物细胞可用匀浆器、组织捣碎机、超声波、丙酮干粉等方法破碎。植物可用石英砂研磨或纤维素酶处理。微生物的细胞壁是一个大分子，破碎较难。有超声振荡、研磨、高压、溶菌酶、细胞自溶等方法。 3.抽提 一般用缓冲液保持pH。可溶蛋白常用稀盐提取，如0.1Mol/L NaCl。脂蛋白可用稀SDS或有机溶剂抽提，不溶蛋白用稀碱处理。抽提的原则是少量多次。要注意防止植物细胞液泡中的代谢物改变pH，可加入碱中和；为防止酚类氧化可加5mMol/L维生素C。加DFP或碘乙酸可抑制蛋白酶活力，防止蛋白被水 解。 （二）粗提 主要目的是除去糖、脂类、核酸及大部分杂蛋白，肽键（peptide bond）:一个氨基酸的羧基与另一个的氨基的氨基缩合，除去一分子水形成的酰氨键。 并将蛋白浓缩。常用以下方法： 1.沉淀法 核酸沉淀剂：MnCl2、硫酸鱼精蛋白、链霉素、核酸酶等 蛋白沉淀剂：醋酸铅、单宁酸、SDS等，也可除多糖，沉淀后应迅速盐析除去沉淀剂，以免目的蛋白变性。 选择变性：用加热、调节pH或变性剂选择性地变性杂蛋白。如提取胰蛋白酶或细胞色素C时，因其稳定性高，可用2.5％三氯乙酸处理，使杂蛋白变性沉淀。 2.分级法 常用盐析或有机溶剂分级沉淀蛋白。 3.除盐和浓缩 盐析后样品中含大量盐类，应透析除去。也可用分子筛，如Saphadex G25层析除盐。如样品过稀，可用反透析、冻干、超滤等方法浓缩。 （三）精制 以上方法得到的制剂可供工业应用。如需高纯样品，应精制。常用方法有各种层析、电泳、等电聚焦、结晶等。蛋白结晶不等于无杂质，但变性蛋白不能结晶，所以可说明其具有生物活性。
本 章 名 词 解 释
氨基酸（amino acid）：是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在?-碳上。 必需氨基酸（essential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）（赖氨酸，苏氨酸等）自己不能合成，需要从食物中获得的氨基酸。 非必需氨基酸（nonessential amino acid）：指人（或其它脊椎动物）自己能由简单的前体合成不需要从食物中获得的氨基酸。 等电点（pI,isoelectric point）：使分子处于兼性分子状态，在电场中不迁移（分子的静电荷为零）的pH值。 茚三酮反应（ninhydrin reaction）：在加热条件下，氨基酸或肽与茚三酮反应生成紫色（与脯氨酸反应生成黄色）化合物的反应。
肽（peptide）:两个或两个以上氨基通过肽键共价连接形成的聚合物。 蛋白质一级结构（primary structure）：指蛋白质中共价连接的氨基酸残基的排列顺序。 层析（chromatography）:按照在移动相和固定相 （可以是气体或液体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。 离子交换层析（ion-exchange column）使用带有固定的带电基团的聚合树脂或凝胶层析柱 透析（dialysis）：通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。 凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）：也叫做分子排阻层析。一种利用带孔凝胶珠作基质，按照分子大小分离蛋白质或其它分子混合物的层析技术。 亲合层析（affinity chromatograph）：利用共价连接有特异配体的层析介质，分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白质或其它分子的层析技术。 高压液相层析（HPLC）：使用颗粒极细的介质，在高压下分离蛋白质或其他分子混合物的层析技术。 凝胶电泳（gel electrophoresis）：以凝胶为介质，在电场作用下分离蛋白质或核酸的分离纯化技术。 SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）：在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不是根据分子所带的电荷大小分离的。 等电聚胶电泳（IFE）：利用一种特殊的缓冲液（两性电解质）在聚丙烯酰氨凝胶制造一个pH梯度，电泳时，每种蛋白质迁移到它的等电点（pI）处，即梯度足的某一pH时，就不再带有净的正或负电荷了。 双向电泳（two-dimensional electrophorese）：等电聚胶电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚胶电泳（按照pI）分离，然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小分离）。经染色得到的电泳图是二维分布的蛋白质图。 Edman降解（Edman degradation）：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切 下修饰的残基，再经层析鉴定，余下的多肽链（少了一个残基）被回收再进行下一轮降解循环。 同源蛋白质（homologous protein）：来自不同种类生物的序列和功能类似的蛋白质，例如血红蛋白。 构形（configuration）:有机分子中各个原子特有的固定的空间排列。这种排列不经过共价键的断裂和重新形成是不会改变的。构形的改变往往使分子的光学活性发生变化。 构象（conformation):指一个分子中，不改变共价键结构，仅单键周围的原子放Z所产生的空间排布。一种构象改变为另一种构象时，不要求共价键的断裂和重新形成。构象改变不会改变分子的光学活性。 肽单位（peptide unit）:又称为肽基（peptide group），是肽键主链上的重复结构。是由参于肽链形成的氮原子，碳原子和它们的4个取代成分：羰基氧原子，酰氨氢原子和两个相邻?-碳原子组成的一个平面单位。 蛋白质二级结构（protein在蛋白质分子中的局布区域内氨基酸残基的有规则的排列。常见的有二级结构有?-螺旋和?-折叠。二级结构是通过骨架上的羰基和酰胺基团之间形成的氢键维持的。 蛋白质三级结构（protein tertiary structure）: 蛋白质分子处于它的天然折叠状态的三维构象。三级结构是在二级结构的基础上进一步盘绕，折叠形成的。三级结构主要是靠氨基酸侧链之间的疏水相互作用，氢键，范德华力和盐键维持的。 蛋白质四级结构（protein quaternary structure）:多亚基蛋白质的三维结构。实际上是具有三级结构多肽（亚基）以适当方式聚合所呈现的三维结构。 ?-螺旋（?-heliv）:蛋白质中常见的二级结构，肽链主链绕假想的中心轴盘绕成螺旋状，一般都是右手螺旋结构，螺旋是靠链内氢键维持的。每个氨基酸残基（第n个）的羰基与多肽链C端方向的第4个残基（第4+n个）的酰胺氮形成氢键。在古典的右手?-螺旋结构中，螺距为0.54nm，每一圈含有3.6个氨基酸残基，每个残基沿着螺旋的长轴上升0.15nm. ?-折叠（?-sheet）: 蛋白质中常见的二级结构,是由伸展的多肽链组成的。折叠片的构象是通过一个肽键的羰基氧和位于同一个肽链的另一个酰氨氢之间形成的氢键维持的。氢键几乎都垂直伸展的肽链，这些肽链可以是平行排列（由N到C方向） 或者是反平行排列（肽链反向排列）。 ?-转角（?-turn）：也是多肽链中常见的二级结构,是连接蛋白质分子中的二级结构（?-螺旋和?-折叠），使肽链走向改变的一种非重复多肽区，一般含有2～16个氨基酸残基。含有5个以上的氨基酸残基的转角又常称为环（loop）。常见的转角含有4个氨基酸残基有两种类型：转角I的特点是：第一个氨基酸残基羰基氧与第四个残基的酰氨氮之间形成氢键；转角Ⅱ的第三个残基往往是甘氨酸。这两种转角中的第二个残侉大都是脯氨酸。 超二级结构（super-secondary structure）:也称为基元(motif).在蛋白质中，特别是球蛋白中，经常可以看到由若干相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，形成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体。 结构域（domain）:在蛋白质的三级结构内的独立折叠单元。结构域通常都是几个超二级结构单元的组合。 纤维蛋白（fibrous protein）:一类主要的不溶于水的蛋白质，通常都含有呈现相同二级结构的多肽链许多纤维蛋白结合紧密，并为 单个细胞或整个生物体提供机械强度，起着保护或结构上的作用。 球蛋白(globular protein):紧凑的，近似球形的，含有折叠紧密的多肽链的一类蛋白质，许多都溶于水。典形的球蛋白含有能特异的识别其它化合物的凹陷或裂隙部位。 角蛋白（keratin）:由处于?-螺旋或?-折叠构象的平行的多肽链组成不溶于水的起着保护或结构作用蛋白质。 胶原（蛋白）（collagen）:是动物结缔组织最丰富的一种蛋白质，它是由原胶原蛋白分子组成。原胶原蛋白是一种具有右手超螺旋结构的蛋白。每个原胶原分子都是由3条特殊的左手螺旋（螺距0.95nm,每一圈含有3.3个残基）的多肽链右手旋转形成的。 疏水相互作用(hydrophobic interaction):非极性分子之间的一种弱的非共价的相互作用。这些非极性的分子在水相环境中具有避开水而相互聚集的倾向。 伴娘蛋白（chaperone）:与一种新合成的多肽链形成复合物并协助它正确折叠成具有生物功能构向的蛋白质。伴娘蛋白可以防止不正确折叠中间体的形成和没有组装的蛋白亚基的不正确聚集，协助多肽链跨膜转运以及大的多亚基蛋白质的组装和解体。
二硫键（disulfide bond）:通过两个（半胱氨酸）巯基的氧化形成的共价键。二硫键在稳定某些蛋白的三维结构上起着重要的作用。 范德华力（van der Waals force）:中性原子之间通过瞬间静电相互作用产生的一弱的分子之间的力。当两个原子之间的距离为它们范德华力半径之和时，范德华力最强。强的范德华力的排斥作用可防止原子相互靠近。 蛋白质变性（denaturation）:生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照，热，有机溶济以及一些变性济的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。 肌红蛋白（myoglobin）:是由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，是肌肉内储存氧的蛋白质，它的氧饱和曲线为双曲线型。 复性（renaturation）:在一定的条件下，变性的生物大分子恢复成具有生物活性的天然构象的现象。 波尔效应（Bohr effect）:CO2浓度的增加降低细胞内的pH，引起红细胞内血红蛋白氧亲和力下降的现象。 血红蛋白（hemoglobin）: 是由含有血红素辅基的4个亚基组成的结合蛋白。血红蛋白负责将氧由肺运输到外周组织，它的氧饱和曲线为S型。 别构效应（allosteric effect）:又称为变构效应，是寡聚蛋白与配基结合改变蛋白质的构象，导致蛋白质生物活性丧失的现象。 镰刀型细胞贫血病（sickle-cell anemia）: 血红蛋白分子遗传缺陷造成的一种疾病，病人的大部分红细胞呈镰刀状。其特点是病人的血红蛋白?―亚基N端的第六个氨基酸残缺是缬氨酸（vol），而不是下正常的谷氨酸残基(Ghe)。
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蛋白质章节课后练习（第2――6章） 一、填空 1、蛋白质多肽链中的肽键是通过一个氨基酸的羧基和另一氨基酸的氨基连接而形成的。 2、稳定蛋白质胶体的因素是表面的水化膜和同性电荷。 3、当氨基酸溶液的pH=pI时，氨基酸以两性离子形式存在，当pH>pI时，氨基酸以负离子形式存在。 4、球状蛋白质中有极性侧链的氨基酸残基常位于分子表面而与水结合，而有非极性侧链的氨基酸位于分子的内部。 5、今有甲、乙、丙三种蛋白质，它们的等电点分别为8、0、4、5和10、0,当在pH8、0缓冲液中，它们在电场中电泳的情况为：甲不动，乙向正极移动，丙向负极移动。 6、加入低浓度的中性盐可使蛋白质溶解度增大，这种现象称为盐溶，而加入高浓度的中性盐，当达到一定的盐饱和度时，可使蛋白质的溶解度_减小,这种现象称为盐析。 7．蛋白质变性主要是空间结构遭到破坏，而其一级结构仍可完好无损。 8、皮肤遇茚三酮试剂变成蓝紫色颜色，是因为皮肤中含有蛋白质所致。 9、维持蛋白质二级结构最主要的力是氢键。 10、蛋白质中氨基酸的主要连接方式是肽键。 11、蛋白质在等电点时溶解度最低。 13、蛋白质的二级结构主要有?-螺旋、?-折叠、β-转角和无规卷曲等四种形式，维持蛋白质二级结构的力主要是氢键。 14、除脯氨酸以外，氨基酸与水合茚三酮反应产物的颜色是蓝紫色。脯氨酸与亚脯氨酸直接生成亮黄色产物 15、在各种蛋白质分子中，含量比较相近的元素是氮（N），测得某蛋白质样品含氮量为14.0克，该样品蛋白质含量应为87.5克。 16.
组成蛋白质分子的碱性氨基酸有赖氨酸(Lys)，精氨酸（Arg）和组氨酸（His）。酸性氨基酸有天冬氨酸（Asp）和谷氨酸（Glu）。 17.
氨基酸在等电点时，主要以 两性离子形式存在，在pH>pI的溶液中，大部分以负离子形式存在，在pH<pI的溶液中，大部分以 正离子形式存在。 18、谷氨酸的pK1(α-COOH)＝2.19,
pK2 (α-NH+3 ) = 9.67,
pKR(R基)= 4.25,谷氨酸的等电点为3.22。
pI=(pK1+pK2)/2R侧链不水解才适用
19、蛋白质中的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸3 种氨基酸具有紫外吸收特性，因而使蛋白质在280nm 处有最大吸收值。以酪氨酸吸收最强 20、在适当浓度的?-巯基乙醇和8M脲溶液中，RNase（牛）丧失原有活性。这主要是因为RNA酶的内部结构被破坏造成的。其中?-巯基乙醇可使RNA酶分子中的二硫键破坏。而8M脲可使氢键破坏。当用透析方法去除?-巯基乙醇和脲的情况下，RNA酶又恢复原有催化功能，这种现象称为蛋白质的复性。 21、蛋白质的二级结构最基本的有两种类型，它们是_α-螺旋结构__和_?-折叠结构。 22、多肽链中氨基酸的序列称为一级结构，主要化学键为肽键和二硫键。
24、人体蛋白质的基本组成单位为氨基酸。
26、蛋白质为两性电解质，大多数在酸性溶液中带正电荷，在碱性溶液中带负电荷。当蛋白质的净电荷为零时，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。
28、蛋白质在紫外光280nm处有强的光吸收，核酸在紫外光260nm处有明显的光吸收。蛋白质的平均含氮量是16%. 29、在各种蛋白质中含量相近的元素是氮（N）. 31、组成蛋白质的20 种氨基酸中，含有咪唑环的氨基酸是组氨酸，含硫的氨基酸有蛋氨酸、半胱氨酸。 32、稳定蛋白质亲水胶体的因素是具有水化膜和同性电荷。 33、根据理化性质，氨基酸可分成脂肪族氨基酸 ，芳香族氨基酸，杂环氨基酸 和杂环亚氨基酸 四种。 39、决定蛋白质的空间构象和生物学功能的是蛋白质的一级结构，该结构是指多肽链中氨基酸残基的排列顺序。 40、稳定蛋白质三级结构的次级键包括氢键、盐键、疏水键和范德华力等。 二、单选题 1、维持蛋白质二级结构稳定的主要因素是：(B ) A、静电作用力
D、范德华作用力 2、变性蛋白质的主要特点是（C）
A、不易被胃蛋白酶水解
B、溶解度增加
C、原有的生物活性丧失
D、粘度下降
E、颜色反应减弱 3、 在pH8．6时进行电泳,哪种蛋白向负极移动? （B） A、血红蛋白(pI=7、07)
B、鱼精蛋白(pI=12、2)
C、清蛋白(pI=4、64)
D、β-球蛋白(pI=5、12) 4、蛋白质变性是由于（ B）
A、一级结构改变
B、空间构象破坏
C、辅基脱落
D、蛋白质水解 5、测得某一蛋白质样品的氮含量为0．40g，此样品约含蛋白质多少？（B） A、2.00g
E、6.25g 6、蛋白质一级结构的主要化学键是(E)
E、肽键 7、甘氨酸的解离常数是pK1=2.34,
，它的等电点（pI）是(B) A、7.26
D、10.77 8、当蛋白质处于等电点时，可使蛋白质分子的（D）
A、稳定性增加
B、表面净电荷不变
C、表面净电荷增加
D、溶解度最小 9、下列哪条对蛋白质变性的描述是正确的？ ( D )
A、蛋白质变性后溶解度增加
B、蛋白质变性后不易被蛋白酶水解 C、蛋白质变性后理化性质不变
D、蛋白质变性后丧失原有的生物活性 E、蛋白质变性后导致相对分子质量的下降 10、蛋白质三维结构的构象特征主要取决于A
A、 键、盐键、范德华力和疏水力等构象维系力 B、 基酸的组成、顺序和数目 C、 链间及肽链内的二硫键 D、 基酸间彼此借以相连的肽键 11、关于蛋白质四级结构的论述哪一个是不正确的？（B） A、一般有两条或两条以上的肽链组成
B、亚基之间靠共价键连接 C、每条肽链都有特定的三级结构
D、每条肽链称为它的一个亚基 12、下列关于蛋白质的结构与其功能关系的论述哪一个是正确的？（B）
A、从蛋白质氨基酸排列顺序可推知其生物学功能 B、氨基酸排列顺序的改变将导致其功能异常 C、只有具特定二级结构的蛋白质才有活性 D、只有具特定四级结构的蛋白质才有活性
单体蛋白三级结构就有活性 13、变性蛋白质的主要特点是（C）
A、不易被胃蛋白酶水解
B、溶解度增加
C、原有的生物活性丧失
D、粘度下降
E、颜色反应减弱 14、蛋白质在280nm处的光吸收值主要归之于下列哪个氨基酸？（A） A、酪氨酸
D、精氨酸 15、处于等电状态下的蛋白质应具有下列哪一特性？（A ）
A、在电场中不向任一电极移动
B、溶解度最大
C、可被硫酸铵沉淀
D、失去生物学活性 17．下列叙述中哪项有误（C）
A、蛋白质多肽链中氨基酸残基的种类、数目、排列次序在决定它的二级结构、三级结构乃至四级结构中起重要作用
B、每种亚基都有各自的三维结构
C、蛋白质变性过程中空间结构和一级结构被破坏，因而丧失了原有生物活性
D、维持蛋白质三维结构的次级键有氢键、盐键、二硫键、疏水力和范德华力 18．蛋白质中多肽链形成α-螺旋时，主要靠哪种次级键维持（Ｃ）
D、二硫键 19．有关亚基的描述，哪一项不恰当（ Ｃ）
A、每种亚基都有各自的三维结构
B、亚基内除肽键外还可能会有其它共价键存在
C、一个亚基（单位）只含有一条多肽链 D、亚基单位独立存在时具备原有生物活性 20．下列叙述中不属于蛋白质一般结构内容的是（C）
A、多肽链中氨基酸残基的种类、数目、排列次序
B、多肽链中氨基酸残基的键链方式
C、多肽链中主肽链的空间走向，如α-螺旋
D、胰岛分子中A链与B链间含有两条二硫键，分别是A7-S-S-B7，A20-S-S-B19 21． 不参与构成蛋白质的氨基酸是：C A、谷氨酸
B、谷氨酰胺
D、精氨酸 22.
维持蛋白质三级结构主要靠（
二硫键 23.
下列氨基酸中，哪个是酸性氨基酸？（ Ｄ ） A
天冬氨酸 24.
下列氨基酸中，哪个是碱性氨基酸？（Ｄ ） A
赖氨酸 25.
下列氨基酸中哪一种不具有旋光性(Ｃ )？ A．Leu
.维系蛋白质一级结构的化学键是（ Ｄ）
B．疏水作用
E．肽键 27、下列氨基酸中_________属于亚氨基酸。Ｂ A、丝氨酸
28、维持蛋白质化学结构的是_________。Ａ A、肽键
D、氢键 29、在蛋白质的变性作用中，不被破坏的是_________结构。D A、四
D、一 30、蛋白质中多肽链形成?-螺旋时，主要靠哪种次级键维持（Ｃ ）
D、二硫键 31、关于蛋白质结构的叙述，哪项不恰当（C ）
A、胰岛素分子是由两条肽链构成，所以它是多亚基蛋白，具有四级结构 B、蛋白质基本结构（一级结构）中本身包含有高级结构的信息，所以在生物 体系中，它具有特定的三维结构 C、非级性氨基酸侧链的疏水性基团，避开水相，相互聚集的倾向，对多肽链 在二级结构基础上按一定方式进一步折叠起着重要作用
D、亚基间的空间排布是四级结构的内容，亚基间是非共价缔合的 32、变构效应是多亚基功能蛋白、寡聚酶及多酶复合体的作用特征，下列动力学曲线中哪种一般是别构酶（蛋白质）所表现的：（ B ） v v v v
s s s s 33、 醋酸纤维薄膜电泳时，下列说法不正确的一项是（A）
A、点样前醋酸纤维薄膜必须用纯水浸泡一定的时间，使处于湿润状态
B、以血清为样品，pH8.6条件下，点样的一端应置于电泳槽的阴极一端
C、电泳过程中保持恒定的电压（90～110V）可使蛋白质组分有效分离
D、点样量太多时,蛋白质组分相互粘联,指印谱带会严重拖尾，结果不易分析 34、下列性质_________为氨基酸和蛋白质所共有。B A、胶体性质
B、两性性质
C、双缩脲反应
D、变性性质 35、在蛋白质生物合成中肽链延伸的方向是从_________。B A、C-端到N-端
B、N-端到C-端
C、定点双向进行
D、C-端和N-端同时进行 36、下列氨基酸中_________属于酸性氨基酸。A还有天冬氨酸 A、谷氨酸
D、异亮氨酸 37、下列各项中，_________与蛋白质的变性无关。A
A、肽键断裂
B、氢键被破坏
C、离子键被破坏
D、疏水键被破坏 38、蛋白质水溶液很稳定主要与其分子_________有关。C A、内有肽键
B、内有疏水基团
C、内既有疏水基团也有亲水基团
D、表面形成水化膜 39、维系蛋白质二级结构稳定的化学键是___________
B、、二硫键
D、疏水作用
E、氢键 40、在各种蛋白质中含量相近的元素是__________
E、 硫 41、蛋白质溶液的稳定因素是__________
A、 蛋白质溶液的粘度大
B、 蛋白质分子表面的疏水基团相互排斥
C、 蛋白质分子表面带有水化膜
D、 蛋白质溶液属于真溶液
E、 以上都不是 42、氨基酸在等电点时具有的特点是__________：E
A、不带正电荷
B、不带负电
D、溶解度最大
E、在电场中不泳动 43、组成蛋白质的基本单位是__________：D
A、L-β氨基酸
B、D-β氨基酸
C、D-α氨基酸
D、L-α氨基酸
E、L,D-α氨基酸
44、蛋白质中多肽链形成?-螺旋时，主要靠哪种次级键维持____
D、二硫键 45、维持蛋白质三级结构稳定的因素是__________：E
E、次级键 46、蛋白质吸收紫外光能力的大小，主要取决于_________
D A、含硫氨基酸的含量
B、肽链中的肽键
C、碱性氨基酸的含量
D、芳香族氨基酸的含量
E、 脂肪族氨基酸的含量 47、盐析法沉淀蛋白质的原理是____________
A A、 中和电荷，破坏水化膜
B、盐与蛋白质结合成不溶性蛋白盐
C、降低蛋白质溶液的介电常数
D、 调节蛋白质溶液的等电点
E、以上都不是 48、蛋白质分子中维持一级结构的主要化学键是____________：B
E、疏水键 49、天然蛋白质中不存在的氨基酸是_______________：
E A、脯氨酸
B、半胱氨酸
E、瓜氨酸 50、下列哪一种氨基酸不属于人体必需氨基酸_____________ E
B、异亮氨酸
C、苯丙氨酸 D、色氨酸
E、酪氨酸 52、、下列含有两个羧基的氨基酸是(
)AB A、精氨酸 B、赖氨酸 C、甘氨酸
E、谷氨酸 53、下列有关蛋白质的叙述哪项是正确的( B )？ A、蛋白质分子的净电荷为零时的pH值是它的等电点 B、大多数蛋白质在含有中性盐的溶液中会沉淀析出 C、由于蛋白质在等电点时溶解度最大，所以沉淀蛋白质时应远离等电点 D、以上各项均不正确 54、有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pI为4.6， 5.0， 5.6 ，6.7，7.8。
电泳时欲使其中四种电泳泳向正级，缓冲溶液的pH应该是多少（ B ）？ A 、4.0
55、蛋白质的一级结构及高级结构决定于（C） A、 亚基
B、分子中盐键
C、氨基酸组成和顺序
D、分子内疏水键
E、分子内氢键 56、蛋白质变性后可出现下列哪种变化[Ｄ]
A、一级结构发生改变
B、构型发生改变
C、分子量变小
D、构象发生改变
E、溶解度变大 57、盐析沉淀蛋白质的原理是[Ａ]。 A 中和电荷，破坏水化膜
B 与蛋白质结合成不溶性蛋白盐
C 降低蛋白质溶液的介电常数
D 调节蛋白质溶液的等电点
E 使蛋白质溶液的pH值等于蛋白质等电点 58、某一溶液中蛋白质的百分含量为 55% ，此溶液的蛋白质氮的百分浓度为（ Ａ）
D 、9.2% 60、维持蛋白质三级结构主要靠（ Ｃ） A、
二硫键 61、下列氨基酸中，哪个含有吲哚环？（C
组氨酸 64、天然蛋白质中含有的20种氨基酸的结构（D ） A、全部是L－型
B、全部是D型
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