哪位高人看看PCR跑电泳跑成这个样子的？这是什么原因。。。望告知 非常感谢~！_百度知道
哪位高人看看PCR跑电泳跑成这个样子的？这是什么原因。。。望告知 非常感谢~！
电泳电压有点大个人觉得有几个原因：1. 可能凝胶没有融化好，里面有小颗粒。2. 胶没有完全凝固就拔梳子和跑电泳。3，用一半量应该可以了.梳子没洗干净，上面可能有脏东西污染了样品孔；4。5. DNA稍微有点多
采纳率：40%
用2微升，甚至更少就够你好，可以减少加量试试，祝你成功！电泳“拖尾”严重，可能是PCR产物加多了，一般的电泳用5微升PCR产物，但产量高的
你也上个MARKER啊，好歹看下是不是胶的问题。
为您推荐：
其他类似问题
您可能关注的内容
pcr的相关知识
换一换
回答问题，赢新手礼包
个人、企业类
违法有害信息,请在下方选择后提交
色情、暴力
我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。请教各位高手，电泳跑成这样是咋回事_百度知道
请教各位高手，电泳跑成这样是咋回事
我有更好的答案
胶的浓度可能也会有一点点影响，一般用1，如果电泳槽够大。可以提几点注意的地方：1、凝胶一定要加热熔解完全，均匀，尽量将样点到中间，尽量避免边缘效应，让其自然沉底，均匀分布在电泳孔内。9，将胶放在中间一些，电场比较均匀，可以对着光亮的地方看看是否清澈、如果点样孔多余.5%或者1； &4；2、一般情况下，梳子越薄而长、加样时不要太快，条带越好看；5、电泳电压一般在7-10V/CM之间； &nbsp；3、上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压;6、做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；&7.7%。8没上图啊，不知道具体是啥样子的
试剂订购热线：400-968-6088
主营：化学试剂、实验室设备、生物试剂、培养基、试剂盒、实验耗材等
为您推荐：
其他类似问题
您可能关注的内容
换一换
回答问题，赢新手礼包
个人、企业类
违法有害信息,请在下方选择后提交
色情、暴力
我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。PCR产物跑胶跑不动,什么原因?
PCR产物跑胶跑不动,什么原因?
walkman(站内联系TA)是不是蛋白缠绕啊~jiaxinfish(站内联系TA)模板不纯,最好用kit纯化了,再做突变.blackrose8089(站内联系TA)蛋白没抽提干净吧?hongqifei(站内联系TA)我也遇到过这种问题.2012xin(站内联系TA)是蛋白质没有抽提干净的可能很大..chinahzd(站内联系TA)蛋白不存~DMZ3(站内联系TA)楼:Originally posted by chinahzd at
16:08:13:蛋白不存~嗯,现在看来是模板不纯,受到蛋白质污染了.但是我没金币发给你了,下次你再来回答问题,我补给你多多的!麻花13(站内联系TA)我也出现了这样的问题啊,50ul体系,将产物纯化过后,依旧还是跑不动,而20ul体系却跑出目的条带了,请问是什么情况啊!急ykl_long(站内联系TA)我想最大的可能是你的DNA模版间形成了多聚体,模板量少加点,酶量也少加点试试...
我有更好的回答：
剩余:2000字
与《PCR产物跑胶跑不动,什么原因?》相关的作业问题
跑胶中的染料应该是对身体有害
几个小时放在冰上没问题!我现在正在做这个!如果你当天还要用rna做下一步试验的话就别冻起来,冻融循环也会导致其少量降解,如果下一步提取mrna的话直接用是最好的啦!
引物、模板没问题的话,就加cycle,多扩几轮,就亮了.（一般pcr酶和buffer是没有问题的,除非你反复冻融或者长时间放置室温）如果上一轮扩出来特异性好的话,可以适当降低退火温度.多扩了几轮,退火温度也降低了,但是条带仍然很淡,这时候,基本上就是引物和模板的问题了.你要好好看看引物特异性好不好,dimer亮不亮,（
PCR产物酶切后跑胶,不是有你需要的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA
原因在于测序时经历了PCR反应及测序反应（测序反应本身也是PCR反应）二次聚合酶的打滑现象.原因不明的复杂结构,测序结果就出现突然信号减弱或消失.出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的.当DNA碱基中含GC含量高的时候,从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去.这样的情况,建议可以尝试换用反向引物进行测
与亮度直接相关的是DNA的量,一般以纳克表示.但是,一般点样时加入的DNA溶液是已知的,因此和浓度是等效的.
原因有很多,1,PCR出了问题,2,跑胶的缓冲液出了问题3,MARK溶液中的DNA被降解了4,操作时间太长,DNA被降解
说明扩增产物浓度很低量不多这里面可能的原因很多PCR反应的各个组分及循环条件都有可能造成产物过低所以在PCR的时候需要先进行预实验把反应条件优化一下最常用的办法就是建立正交表再利用单因素条件法优化PCR就能得到比较理想的结果
原因是你的样品PCR没做成功,可能性大样品跑出去了,可能性小而且你说电泳液热,而且胶倒是因为电泳的电压大时间长把电泳液加热了,胶都融化了 和电泳条件应该无关,除非电压大时间长你的片段“跑出去”了至于电泳液发热的情况我也遇到过,但是具体原因我也不是很清楚可能是缓冲液配置的问题,离子浓度大了或者是电泳槽的问题,线路老化电阻
做PCR时,最抑闷的一件事就是花了三个多小时,一点儿结果都没有.以前做的时候,我也遇到这增的问题!所有的反应液和底物加好了,机器设好了,跑吧,跑完PCR了,好的,再来跑电泳检测,结果,白花花一大片,什么都没有,那一刻,觉得自己好失败,别人的什么有,自己的什么都见不到,真想把机器给砸了.&&&nbsp
1 不可以啊2 须除去背景 再问： 你好，谢谢你的回答，请问在做比值分析时，我选择volume命令中的volume rect tool 然后框起条带，然后在volume report options 对话框中我该选择哪几个？选择完之后，点done，出来的数据应该是有条带的灰度也有背景的吧，我具体该怎么计算，可否举个例子
看条带的中点.
可以呀~但是如果你的样品本身浓度就不高的话,再跑一次电泳造成一定的损失,还不如重新PCR一次~如果浓度高,重新回收当然没有问题啦~ 再问： 好的，非常感谢！主要感觉PCR太麻烦了，酶什么的太浪费。那么重新PCR的话，能用我这个回收不纯的产物吗？ 再答： 不太好吧。。你的不纯是指回收的时候割到非特异性条带了吗？这样就没必
一般这种情况下是调高退火温度.如果还是有很多条带,那么就证明你的引物特异性有问题,建议你重新设计引物,或者是切胶回收目的条带.
那要看你的PCR产物有没有非特异性带,如果你PCR产物跑胶后很纯的只有一条带（不算引物二聚体）,那么就不需要切胶纯化,传统法就是将PCR产物加入2倍体积的乙醇－20度沉淀过夜后低速短暂离心（如 3000rpm离心1~2min),弃掉上清,然后用70%乙醇洗涤一次后,弃掉乙醇,放干后再用无菌水或者TE溶解.当然这种方法对
我们一般用的都是切胶回收的,这样能更保证一些,可以有效去除杂带,肯定有不用切胶的,生物公司一般用的就是直接回收的
PCR产物电泳拖尾,可能有如下原因：a.模板不纯.b.退火温度偏低.c.酶量过多,dNTP、Mg2+浓度偏高.d.循环次数过多.解决办法：a.纯化模板.b.适当提高退火温度.c.降低酶量,适当降低dNTP和镁离子的浓度.d.减少循环次数
如果最亮的带是你的目的带,那就是拖尾而不是杂带,问题不大.要是顺便点了marker,问题很容易看出来,因为如果marker也拖尾的话,自然可以判断是电泳的问题.现在没有marker,但也首先怀疑是这个问题,原因可能有2：点样量过高（那要pcr产物量相当高）,TAE（是否用水配了胶?）或者琼脂糖有问题.解决办法：减少点样
一楼没有做过 miRNA,先不要理他.楼主的做法我并没有做过,因为我使用的是Tagman试剂盒带有特异性探针,所以并无特异性问题.我理解楼主的意思是：曲线不正常,1505条带正常,1489条带不正常659与1491曲线正常,但是两个条带都不正常我的意见如下：1.楼主的引物是自己设计的吗?目标只有二十多当前位置：
&请问做PAGE电泳MARKER总是跑不开，不知道为什么，请高手指教
请问做PAGE电泳MARKER总是跑不开，不知道为什么，请高手指教
作者 xingrui314
请问做PAGE电泳MARKER最上面的两条总是跑不开，今天做了一板SDS胶结果连Marker都看不到条带，不知道为什么，请高手指教，因为这个已经重复做了好多次了，结果还是一样，都不知道该怎么办？谢谢啦。
提供的信息太少，无从判断。
你的胶是自己配的还是pre－casted（买来现成的）？浓度是多少？梯度胶？running buffer？新鲜还是用过多次了？ Marker是什么？最大的有多大？
重复性这么好说明你某个环节出了问题，暂时不要重复了，逐个排除一下（每次改变一个条件）看看。
你的分离胶浓度是多少？跑胶的电压（电流）是多少？跑多长时间？电泳液的配方？是否新配？以上都会影响SDS-PAGE中蛋白的涌动。一般分离胶的浓度小（8% or 10%），电压120V 2h，新配的电泳液，只要marker本身没用质量问题，都能跑出来的。
可能是你的胶浓度太大，分子量大的条带分不开也是可能的。我跑过15％的胶，245kd的分的开。不知你是啥情况，或者发个图
引用回帖:: Originally posted by ssssllllnnnn at
提供的信息太少，无从判断。
你的胶是自己配的还是pre－casted（买来现成的）？浓度是多少？梯度胶？running buffer？新鲜还是用过多次了？ Marker是什么？最大的有多大？
重复性这么好说明你某个环节出了问题，暂 ... 恩，谢谢。我的胶都是自己配的，后来SDS的marker出来了，就是PAGE的还是分不开，12%分离胶，5%浓缩胶，Marker最大是116KDa，
引用回帖:: Originally posted by 冷月絮清风 at
你的分离胶浓度是多少？跑胶的电压（电流）是多少？跑多长时间？电泳液的配方？是否新配？以上都会影响SDS-PAGE中蛋白的涌动。一般分离胶的浓度小（8% or 10%），电压120V 2h，新配的电泳液，只要marker本身没用质量 ... 谢谢，现在我的SDS的Marker跑出来了,就是PAGE还是分不开，感觉用的都是新的，没什么问题
引用回帖:: Originally posted by pengchenping at
可能是你的胶浓度太大，分子量大的条带分不开也是可能的。我跑过15％的胶，245kd的分的开。不知你是啥情况，或者发个图 谢谢你。我用的是12%的分离胶，116KD的，SDS的分开了，现在就是PAGE的仍然分不开
24小时热帖
下载小木虫APP
与700万科研达人随时交流各位电泳师傅，请教下类似图中电泳出来为何会出现这种情况，，，又如何解决_百度知道
各位电泳师傅，请教下类似图中电泳出来为何会出现这种情况，，，又如何解决
我有更好的答案
应该是流水线的挂链润滑油或者其他什么东西滴落到产品上，赶紧查查，槽液什么不会出现这种现象。
采纳率：94%
来自团队：
为您推荐：
其他类似问题
换一换
回答问题，赢新手礼包
个人、企业类
违法有害信息,请在下方选择后提交
色情、暴力
我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。