（15分）在实验室中，经稀释后用平板分离纯化微生物的方法有稀释涂布平板法和稀释倒平板法。两种方法的主要区别在于：前者是取一定稀释度的样品，用无菌涂布器将其均匀涂布于预先制备好的琼脂平板上；后者则是取一定稀释度的样品与熔化的琼脂培养基混合均匀后，倒入无菌培养皿中。请回答下列相关问题：（1）在进行稀释倒平板时，已熔化并用&&&&&&&（填实验仪器）灭菌的琼脂培养基，需要冷却到&&&左右才能与样品稀释液混合并倒平板。（2）若要从某土壤中分离数量极少的、能降解对羟基苯甲酸（一种含碳化合物）的微生物，在样品稀释之前，最好先用液体培养基进行&&&&&&&&，该培养基中除了含有对羟基苯甲酸以外，还应加入&&&&&&&&&等主要营养物质。（3）若稀释得当，两种方法均可得到&&&&&&&&&&&&&&&菌落，但菌落生长的区域不同。其中，稀释倒平板法的菌落可能生长在平板的&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&。（4）上述两种方法都只能初步分离纯化菌种。若要保证得到的是纤维素分解菌，还需要通过&&&&&&&&&&&&&&来确定。（5）有同学在对某种霉菌接种培养的24h之内，每隔8h统计一次菌落数目，然后进行了样品中菌落数量的计算：他的计算结果&&&&&&（填“大于”、“小于”或“等于”）活菌的真实值，这是因为&&&&&&&&&&&&&&&&&&。提示：下载试题将会占用您每日试题的下载次数，建议加入到试题篮统一下载（普通个人用户：3次/天）【知识点】&&&& 类题推荐微生物的培养与应用人们的日常生活与传统发酵技术密不可分。在葡萄成熟的季节里，有很多家庭开始酿制葡萄酒，甚至是葡萄醋。回答下列问题：（1）葡萄酒的制作离不开微生物的作用，该过程常用的微生物是_______，其细胞呼吸类型是_______。（2）在葡萄酒制作的过程中，要将温度严格控制在_______。若要随时了解不同发酵时期发酵液中的活菌数，则可选择_______法进行计数，其计数原则一般选择菌落数在_______个的平板计数。（3）若盛放果酒的瓶口封闭不严，则放置一段时间后，会发现果酒带有明显的酸味，使果酒变酸的主要微生物是_______。若用于发酵的葡萄汁中混有该微生物，则在果酒发酵旺盛时期，该微生物________（填“能”或“不能”）将果汁中的糖发酵形成酸，其原因是________________。Ag /TiO2作为一种常见的半导体光催化剂，在可见光照射下不仅可杀灭饮用水中的细菌等微生物，降解水中的有机化合物，还能循环利用，因此被广泛使用。某研究小组制备了Ag /TiO2 空心微球，现欲探究不同载银量的Ag /TiO2 空心微球的杀菌性能。（1）培养大肠杆菌：制备适宜大肠杆菌生长的培养基，将培养皿、培养基等置于_________中灭菌20min；在无菌环境中倒平板，待平板冷凝后，将平板倒置，是为了_____________。将大肠杆菌制备成菌悬液，分离纯化。（2）杀菌性能检测：挑取菌落制成菌悬液，用________（工具）接种于无菌平板表面，使其均匀生长，布满平板；用浸透了__________的小滤纸片（实验组）和浸透了_________的小滤纸片（空白对照），分别放在涂好菌的平板的不同位置；将平板置于恒温箱中培养一段时间，观察记录__________。（3）测定饮用水所含的大肠杆菌数目，还有一种特别的方法：将已知体积的饮用水过滤后，将_________放在加入_______的培养基上（大肠杆菌菌落呈黑色），根据黑色菌落的数目，可计算出水样中大肠杆菌的数量。这种计数方法较实际值有误差的原因是___________。北方每年在小麦丰收的季节，焚烧秸秆火焰四起，烟雾弥漫，不但导致严重的雾霾而且造成资源的浪费。科学家为了解决这个问题，努力寻找分解秸秆中纤维素的微生物，他们做了如下实验，据图回答：（1）根据甲图，选择培养纤维素分解菌要用__________________。为了鉴别纤维素分解菌，常在培养基中加入______________。为了统计样品中活菌的数目，常用方法除稀释涂布平板法外，还有_________________________的方法。（2）乙图是培养出的单菌落示意图，最适合分解秸秆的两个菌落是_____________（填数字），纤维素分解菌将纤维素最终分解为___________________。从图中可以看出培养基上菌落数较少，推测可能的原因是__________________________________________。（3）为了长期保存该微生物，可以采用_______________________的方法。试题点评评分：0评论：暂时无评论暂时无评论末页使用过本题的试卷同步试卷相关知识点组卷网 版权所有稀释平板计数法_百度文库
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稀释平板计数法
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你可能喜欢（10分）：有2位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，并且取平均值163作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果的合理性。（1）甲同学________，原因是____________________________________________。（2）乙同学________，原因是___________________________________________。（3）正确做法是_____________________________________________________________________。（4）稀释涂布平板法所用培养基按物理性质划分属于________培养基；（5）倒平板前保证培养基无菌的常用方法是_________________________________。提示：下载试题将会占用您每日试题的下载次数，建议加入到试题篮统一下载（普通个人用户：3次/天）【知识点】&&&& 类题推荐微生物的培养与应用北方每年在小麦丰收的季节，焚烧秸秆火焰四起，烟雾弥漫，不但导致严重的雾霾而且造成资源的浪费。科学家为了解决这个问题，努力寻找分解秸秆中纤维素的微生物，他们做了如下实验，据图回答：（1）根据甲图，选择培养纤维素分解菌要用__________________。为了鉴别纤维素分解菌，常在培养基中加入______________。为了统计样品中活菌的数目，常用方法除稀释涂布平板法外，还有_________________________的方法。（2）乙图是培养出的单菌落示意图，最适合分解秸秆的两个菌落是_____________（填数字），纤维素分解菌将纤维素最终分解为___________________。从图中可以看出培养基上菌落数较少，推测可能的原因是__________________________________________。（3）为了长期保存该微生物，可以采用_______________________的方法。下图是学生们从作物根部土壤中分离产植酸酶菌株的过程。（1）分离产植酸酶的菌株，需先配制合适的培养基。配制固体培养基包括计算、称量、___________等五步。（2）接种以前进行的一系列稀释操作，目的是___________。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的___________。统计菌落数目需在菌落数目稳定时作为记录结果，这样可以防止___________。（3）由于植酸钙的不溶解性，可使培养基形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙。菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A—E五种菌株中，___________是产植酸酶的理想菌株。人们的日常生活与传统发酵技术密不可分。在葡萄成熟的季节里，有很多家庭开始酿制葡萄酒，甚至是葡萄醋。回答下列问题：（1）葡萄酒的制作离不开微生物的作用，该过程常用的微生物是_______，其细胞呼吸类型是_______。（2）在葡萄酒制作的过程中，要将温度严格控制在_______。若要随时了解不同发酵时期发酵液中的活菌数，则可选择_______法进行计数，其计数原则一般选择菌落数在_______个的平板计数。（3）若盛放果酒的瓶口封闭不严，则放置一段时间后，会发现果酒带有明显的酸味，使果酒变酸的主要微生物是_______。若用于发酵的葡萄汁中混有该微生物，则在果酒发酵旺盛时期，该微生物________（填“能”或“不能”）将果汁中的糖发酵形成酸，其原因是________________。试题点评评分：0评论：暂时无评论暂时无评论末页使用过本题的试卷同步试卷相关知识点组卷网 版权所有微生物平板涂布注意事项_百度知道
微生物平板涂布注意事项
浇注平板法和涂布平板法的一开始可能是被涂布物品稀释多少个稀释倍数，然后进行浇注，看菌落，涂布法好像在稀释度上可以进行一个涂布以后这个涂布棒上所带菌体已经量少了，所以再涂布另一个，可能不用太稀释也可以做到。但是很多菌体可能由于对培养基的亲和性比较好，所以在高浓的时候已经脱离涂布棒，可能有些微生物分离不到。（只是个人的观点）
我的问题是在涂布过程中的注意事项及其关键操作
1.全过程要在无菌条件下进行2.接种环使用前在酒精灯上灼烧至红热3.蘸取少量菌液,先在培养皿上划一条,不要转动接种环，希望对你有帮助，
采纳率：20%
首先一定要保证是无菌操作，在无菌操作台进行，试管 枪头和稀释用的水都要经过高压灭菌，在稀释过程中要充分混匀，另外在涂布时涂布棒要经过酒精灯外焰灼烧，一定要灼烧充分，吸取100ul到平板上，然后用烧好的涂布棒均匀涂抹开，各个方向都可以涂布，涂布完灼烧。希望可以帮到你。
注意力度大小适宜，不应划破培养基表面
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杨长奎　冉玲2017年高考考试大纲新增了“微生物数量的测定”的内容。高中生物教材中有两处涉及微生物数量需要测定，一处是必修3中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”，运用抽样检测法，在显微镜下观察统计血球计数板上酵母菌数量并推算出培养液中酵母菌的个体数；另一处是选修1中“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”，运用稀释涂布平板法，通过统计平板上的菌落数推测出样品中活菌的大致个数。其中，稀释涂布平板法计数微生物是考试的热点，也是学生的易错点。1 易错点一：用实验组的平均菌落数与对照组菌落数的差值推算样品中活菌个数【例1】 空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度的沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤：① 配制培养基；② 制作无菌平板；③ 设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；④ 将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：（1） 步骤③中，实验组的操作是 。（2） 若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。若将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法 （填“正确”或“不正确”）。解析：本实验的目的是了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况，应选择不同的高度放置平板，实验组的培养皿盖应揭开，使之暴露在空气中一段时间，以利于空气中微生物沉降到平板培养基表面上。空白对照组的培养皿盖不能打开，使之不接触空气，不应该出现菌落。若空白对照组平板出现了菌落，则说明空白对照组的平板被污染。对照组平板出现污染，实验组平板不一定有污染或污染程度可能不一定与空白对照组的相同。所以，用实验组获取的菌落数的平均值减去污染产生的菌落数作为实验的结果是不正确的。正确的做法是：在防止污染的情况下重新实验，以获得较准确的数据。参考答案：（1） 将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间 （2） 污染 不正确解题指南：用稀释涂布平板法计数微生物，应设置空白对照实验（跟实验组唯一不同的是不接种或接种等量的无菌水），其目的是确定培养基制作是否合格。空白对照组如果出现了菌落，实验组的数据不能用于计算样品中的活菌数，也不能用实验组的平均菌落数与空白对照组菌落数的差值来推算样品中活菌个数。正确的做法是重新实验，直到空白对照组没有菌落出现为止。2 易错点二：用所有重复实验组的平均菌落数来推算样品中活菌个数【例2】 图1是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。（1） 图中选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加 作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成 色。（2） 在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。每克土壤样品中的细菌数量为 个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较 。解析：脲酶能够催化尿素分解为氨，要从土壤中筛选出产脲酶的细菌，需用以尿素作为唯一氮源的选择培养基。尿素被分解成氨，会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚红指示剂变红色。将稀释倍数为105的土壤样品溶液接种在细菌培养基平板上，用于计数细菌菌落数的方法是稀释涂布平板法。统计的菌落数应介于30～300，所以，选择细菌菌落数为156、178和191的平板计算出平均菌落数，即（156+178+191）÷3=175，每克土壤样品中细菌数量为175÷0.1×105=1.75×108个。由于两个或多个细菌连接在一起时，在平板上往往形成一个菌落，因此，统计的菌落数要少于样品中活菌的实际值。答案：（1） 尿素 酚红 红 （2） 1.75×108 少解题指南：（1） 用稀释涂布平板法计数细菌的原理是——当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中大约含有多少活菌。（2） 为增强实验的说服力和保证准确的结果，要设置对照和重复实验。设置空白对照，能排除培养基污染对实验结果产生的影响。设置重复实验（同一稀释度涂布至少3个平板，一般设置3～5个平板），并且选择菌落数在30～300的平板计算平均菌落数，再用平均菌落数推算样品中活菌数。重复实验可排除偶然因素对实验结果的影响。如果重复实验中某个平板的菌落数与其他差别甚远，说明该平板操作过程有误，应舍弃。若舍弃之后不足三个平板，如重复实验组的平板菌落数为240、250、33，则不能用这三个平板的平均值来推算样品中的活菌数，也不能用菌落数为240、250这两个平板的平均值来推算样品中的活菌数，而应找出原因并重新实验。（3） 稀释涂布平板法計数微生物的计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数。样品的稀释流程是将10 g土样加入到90 mL无菌水中得到稀释10倍的样液，从稀释10倍的样液中取1 mL加入到9 mL无菌水中得到稀释100倍的样液，如此进行梯度稀释。
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