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标本常用染料性能简介
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> ->->微生物实验中常用药品试剂配制――染色剂
微生物实验中常用药品试剂配制――染色剂
录入时间: 9:26:04
来源：水世界
（六）染色剂
1、细菌染色剂
配方一 齐氏（Ziehl）石炭酸品红染液
甲液 取石炭酸5克，溶解在95毫升蒸馏水中。
乙液 取0.3克碱性品红，放入研钵中研磨，逐渐加入10毫升95%酒精，继续淹没，使它溶解。
将甲液和乙液混合后，摇匀，过滤，装瓶，备用。
配方二 罗氏（Loeffler's）美蓝染液
甲液 取5克美蓝，溶于100毫升95%酒精中，制成美蓝-酒精饱和液。
乙液 取氢氧化钾0.01克（或1%氢氧化钾溶液1毫升），溶液也可用于放线菌染色，0.1%浓度可用于酵母菌染色。
配方三 革兰氏（Gram's）染液
用此液染色因先用甲液染色，再加乙液固定，用丙液处理，最后用丁液复染。四种液体的配方如下：
甲液（结晶紫液）
（1）结晶紫 2克 95%酒精 20毫升
（2）草酸铵 0.8克 蒸馏水 80毫升
使用钱江（1）、（2）液相混，静置48小时后使用。
乙液(碘液)
碘 1克 碘化钾 2克 蒸馏水 300毫升
将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘，待碘全部溶解后，加水稀释至300毫升。
丙液 95%酒精溶液
丁液（番红花红液）
2.5%番红花红酒精溶液 10毫升 蒸馏水 100毫升
2、细菌特殊染色剂
配方一 芽孢染液 用此配方染色是用甲液染色后，用乙液复染。
甲液 取5克孔雀绿，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成孔雀绿染液。
乙液 取番红花红0.5克，加入少量蒸馏水，使它溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，集成番红花红复染液。
配方二 荚膜染液 此配方先用甲液染色，后用乙液复染。
甲液 取结晶紫0.1克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，再加入0.25毫升冰醋酸一结晶紫染液。
乙液 取硫酸铜31.3克，溶于少量蒸馏水后，加水稀释到100毫升，即成20%硫酸铜脱色剂。
配方三 鞭毛染液
饱和明矾溶液 2毫升 5%石炭酸溶液 5毫升
20%丹宁酸溶液 2毫升
碱性品红 11克 95%酒精 100毫升
使用前取甲液9毫升和乙液1毫升相混，过滤即可。
3、植物细胞壁染色剂
配方一 纤维素细胞壁染液（Ⅰ）
取固绿0.1克，溶于100毫升95%酒精中，即成0.1%固绿-酒精溶液。
该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。
配方二 纤维素细胞壁染液（Ⅱ）
氯化锌 20克 碘化钾 6.5克
碘 1.5克 蒸馏水加至100毫升
先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入6.5克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到100毫升，即成碘-氯化锌溶液。
该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。
配方三 纤维素细胞壁染液（Ⅲ）
甲液 取1克碘和1.5克碘化钾，溶于100毫升蒸馏水中，即成1%碘液。
乙液 取7份硫酸和3份蒸馏水相混，即成66.5%硫酸溶液。
染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。
配方四 木质化细胞壁染液（Ⅰ）
硫酸化苯胺（或盐酸话本安） 1份
蒸馏水 70份 95%酒精 30份
将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。
配方五 木质化细胞壁染液（Ⅱ）
取间苯三酚4～5克，溶于100毫升95%酒精中，即成间苯三酚-酒精液。
先在材料上滴上1滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚-酒精液1滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。
配方六 木质化细胞壁染液（Ⅲ）
取1克番红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%番红溶液。
4、细胞质染色剂
配方一 伊红染液
伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。
（1）取1克伊红，溶于99毫升蒸馏水中，即成1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水稀释液来代替本溶液）。
（2）取1克伊红，溶于99毫升70%酒精中，即成1%伊红-酒精溶液。
配方二 甲基蓝染液
取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。
配方三 亮绿染液
取0.5克亮绿，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%亮绿溶液。
5、细胞核染色剂
配方一 甲基绿染液
取1克甲基绿，溶于99毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。
配方二 龙胆紫染液
取1克龙胆紫，溶于少量2%醋酸溶液中，加2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。
配方三 美蓝（亚甲基蓝）染液
取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内 。
此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。
配方四 硼砂-洋红染液
取4克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。再加入2克洋红，加热溶解后煮沸30分钟，静置3日，用100毫升70%酒精冲淡，放置24小时后过滤。
此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。
配方五 德氏（Delafield's）苏木精染液
甲液 取1苏木精，溶于6毫升无水酒精中，即成苏木精-酒精溶液。
乙液 取10克铵矾溶于90毫升蒸馏水中，即成10%铵矾水溶液。
取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。3～4天后将溶液过滤，在滤液中加入25毫升甘油和25毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置1～2个月，待该液颜色变深时过滤，可长久保存。
本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。
配方六 席夫（Schiff's）试剂
称取0.5克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠或无水亚硫酸氢钠。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24小时。在溶液颜色退到淡黄色时，加入0.5克活性炭，用力摇荡1分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。如溶液变成红色，即失去染色能力。
碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgen's）反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。
6、染色体染色剂
配方一 醋酸-洋红染液
取45毫升冰醋酸，加蒸馏水55毫升，煮沸后徐徐加入洋红1克，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10分钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。
配方二 醋酸-地衣红染液
取45毫升醋酸，跟55毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末1～2克，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。
配方三 龙胆紫染液
取1克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100毫升，保存在棕色瓶内。
配方四 甲苯胺蓝染液
取0.5克甲苯胺蓝，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。
7、线粒体染色剂
配方一 詹钠斯绿B(Janu's green B)酒精饱和溶液
取125毫升詹钠斯绿B，加入到62.5毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿B酒精饱和染液。
（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按1：30000比例加蒸馏水稀释，用来染原生动物线粒体。
(2)取詹钠斯绿酒精饱和液，按1：10000比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。
配方二 詹钠斯绿B中性红染液
先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法：取125毫升中性红，加入到50毫升无水酒精中，搅拌。
在10毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为0.65%；哺乳类生理盐水浓度为0.9%）中，加入詹钠斯绿B酒精饱和液0.7～1毫升，中性红酒精饱和液2毫升，混合。
詹钠斯绿B稀释液是活体染液。
8、脂肪染色剂
苏丹Ⅲ染液
取0.1克苏丹Ⅲ，溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹Ⅲ染液。
这染液能染脂肪，还能染木栓、角质层。
9、血液染色剂
配方一 瑞氏（Wright's）染液
取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制的染液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.4～6.8。因此，染色时加入缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。
这种染液除能染血液，还能染疟原虫。
瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上1小时，取出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升，随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后，用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。
配方二 甲基紫染液
取甲基紫0.5克，加到100毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。
10、吸虫染色剂
梅耶氏（Mayer's ）明矾-洋红染液
取铵明矾（硫酸铝铵）5克，溶于95毫升蒸馏水中，再加入0.5克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸）等，以防生霉。
这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。
11、活体染色剂
配方一 中性红染液
先配成1%中性红水溶液（1克中性红溶于100毫升蒸馏水中）。取这种溶液1毫升，用0.6%生理盐水（或蒸馏水）稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。
本染液用来显示原生动物的食物泡以及动植物组织中活细胞的内含物等。
配方二 尼罗蓝（Nile Blue）染液
取0.1克尼罗蓝，溶解于毫升蒸馏水中，即成尼罗蓝染液。
这种染液能把原生动物大核染成绿色，食物泡染成蓝色。
配方三 亚甲蓝染液
取0.1克亚甲蓝，溶解于1000毫升蒸馏水中，即成亚甲蓝染液。
这种染液用于原生动物的活体染色。
12、透明骨骼标本染色剂
配方一 茜素红染液（Ⅰ）
取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。在这种混合液中方入少量茜素红，制成茜素红饱和溶液。
配方二 茜素红溶液（Ⅱ）
取1克茜素红，溶于100毫升95%酒精中，搅拌，然后跟900毫升1%氢氧化钾溶液相混，即成深紫色的茜素红染液。
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生物标本常用染色剂
（一）天然染料(Natural Dyestuff)
　　1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
　　苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。
　　2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。
　　洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
（二）人工染料(Synthetic dyestuff)
　　人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。
　　1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。
　　组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。
　　2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。
　　3、甲基蓝甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用他染色后不能长久保存。
　　4、固绿固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
　　5、苏丹Ⅲ 苏丹Ⅲ是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。
　　6、伊红这类染料种类很多。常用的伊红Y，是酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（15摄氏度是溶解度达44%）和酒精（溶于无水酒精的溶解度为2%）。伊红在动物制片中广泛应用，是很好的细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。
　　7、碱性品（复）红碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中，长用来鉴别结核杆菌。在尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。
　　8、结晶紫结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。
　　9、龙胆紫龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。
　　10、中性红中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。
　　11、番红番红是碱性染料，能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。
　　12、亚甲蓝或美蓝亚甲蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度9.5%）和酒精（溶解度6%）。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。
　　13、甲基绿甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水（溶解度8%）和酒精（溶解度3%）。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
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12第二章10节染色1123
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