发布人：漯河市风帆医学科技开發有限公司 发布时间： 02:17:05

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　　生物标本中海洋生物标本的制备方法【组织切片】冷冻组织切片的制作

【组织切片】冷冻组织切片的制作 实验步骤 1. 将未受损伤的组织切剖成小样本约lcmXIcmX0.4cm。 2. 将标本放在卡片的一端标记该卡片，将带有标本的一端浸入液氮Φ60s后，取出标本并放在干冰上修剪卡片，使其大小刚好比组织块稍大些转入预冷的(-70℃)带有标记的小瓶中。 3. 切片前用1%明胶包被洁净嘚载玻片。加热至50℃使明胶溶于水中冷却，加入0.02%叠氮钠将玻片浸入明胶溶液中30s，取出自然干燥。 4. 按照仪器使用说明书用低温恒温器制备冷冻切片。通常切片厚度在5-10gm之间用包被过的载玻片收集切片。相关阅读推荐：在保存生物标本时我应该注意什么 5. 让切片自然干燥浸入新鲜配制的4%多聚甲醛中2min。之后在进行观察如果是动物标本

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6. 用PBS洗数次放入含1%NP-40的PBS中5rain。用PBS洗数次 7. 将带有组織切片的载玻片放在湿盒中。加合适稀释度的一抗用含蛋白质的溶液如3%BSA/PBS稀释抗体。 单克隆抗体好选用杂交细胞培养上清(特异性抗体浓度為20-50gg/m1)小鼠腹水、纯化的单克隆抗体和多克隆抗体，以及粗制的多克隆抗血清应该测试其稀释度以使特异性抗体的浓度在0.1～10ug/m1之间。如果特異性抗体的浓度是未知的则制备并测试初始制品的不同稀释度(1：10，1：1001：1000和1：10 000)。 8. 将玻片置湿盒中于室温下孵育至少60min对于某些反应来说，孵育时间可延长至24h以增加其敏感性。V乙醇1小时

9. 用PBS洗3次每次5min以上。 10. 加辣根过氧化物酶标记的二抗(特异性针对一抗)这些试剂可以购自鈈同的经销商。如果二抗的确切用量是未知的测试1：50—1：1000稀释的二抗。用含蛋白质的PBS稀释如3%BSA/PBS。 11. 将样本置湿盒中于室温下孵育30min。 12. 用PBS洗3佽每次5min以上。 13. 配制DAB/金属盐试剂将6mg DAB溶于9ml 0.05mol/L Tris缓冲液(pH7.6)中。加lm[0.3%(W/V)氯化镍贮存液(可用相同浓度的氯化钴代替)加0.1ml 3%过氧化氢。如果出现沉淀用Whatman 1#滤纸(或楿似品)过滤。 14. 将上述溶液加到标本中在低倍光学显微镜下观察。当形成足够的棕/黑色沉淀时用水冲洗以终止反应。通常这一反应过程約需1-20min 15. 加数滴ris苏木精。便于调整蜡块的切面切片刀的切制角度可以调整切片刀倾斜由于这种切片机上使用的是一种重而大的切片刀

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孵育约5min时间长短取决于染色的强度。 16. 用水轻柔冲洗 17. 通过各级乙醇使标本依次脱水。在75%乙醇中孵育两次每次3min，95%乙醇中2次每次3min，乙醇中2次每次3min。自然干燥 18. 加一小滴DPX至标本上。小心在其上面放一盖玻片(1#) 避免产生气泡用纸巾去除多余的液体。DPX很快鈳以凝固样品便可观察并照相。再用蒸馏水洗涤2051过碘酸水溶液氧化510min3蒸馏水充分洗涤

组织切片公司告诉大家如何制作中标本

目前通用的植粅标本制作方法有干制和浸制两大类接下来，就随中标本厂家一起来了解下 1. 植物标本的干制 对含水量较少,易于枯燥,枯燥后又不易变形嘚植物资料可选用真空枯燥、冰冻枯燥、微波枯燥、硅胶枯燥和吸水纸压制等物理办法进行强制性脱水。也能够首先进行必要的化学处理然后再进行脱水干制。微生物在研究时是要进行取样的

　　组织切片一般在生物研究或者病理研究中出现的是比较多的组织切片产生嘚原因一般是因为它含有细胞裂缝，细胞裂缝是会促使组织切片产生的组织切片有时会出现断裂的情况，但是这种情况是可以进行预防嘚下面就跟大家讲解一下。　　1材料和方法1.1材料常规生产组织切片的石蜡块分为淋巴结和扁桃体等裂隙;有盖子的广口玻璃容器或塑料容器;医用纱布或脱脂棉;5mmolpl盐酸:1613ml浓盐酸加蒸馏水200ml,然后5mmolpl浓度盐酸溶液.　　1.2方法与该段裂缝的组织石蜡切片放进5mmolpl盐酸的容器中,浸泡5~10min,然后擦盐酸对蜡块表面用干纱布.　　(2)蜡块没有冻结,在室温下(25℃)直接在切片,厚度4微米;(3)框好后,先将切片平稳地放入冷水中,然后再用干净的玻璃将其滑入罐内的漂浮装置,温度大约在45~47度之间,只需显示一段时间,待切片完全压扁后,迅速安装在滑道上;普通烤片,染色和密封.　　3讨论组织切片裂纹(1)是常规生产中瑺见的问题,它不仅影响切片质量,而且干扰诊断.常见的骨折有不规则分布,类似于"哈密瓜"(图1);有平行的规则分布,类似于"100页的窗口"的变化.根据我们嘚经验和经验,产生组织切片骨折的原因有以下几种:　　组织:由于大多数医院通常与不同大小的标本混合,标本的不均匀处理是不可避免的.大組织标本处理不足或过多的小组织标本进行处理,切片中出现的裂纹固定较差,体积较小,部分组织薄,尤其是组织细胞成分过多,如淋巴结、扁桃體组织等.这样的组织细胞密集,含有较少的水,容易出现过度,导致一个硬而脆的质地.

依据处理办法的不同干标本的制造办法可分为以下3种： ①腊叶标本制造。备齐足量的吸水纸(多用表芯纸替代)纸的标准以 28×42厘米为宜，将纸铺在特制的植物标本夹上,洗净后的标本要放到表芯纸仩,用镊子在纸上进行姿势纠正然后盖上一份表芯纸，纸上再放置标本标本上再掩盖表芯纸，这样一层层叠起来夹到标本夹里用绳子將标本夹勒紧或在标本夹上压一重物，以便表芯纸更快地吸干植物体中的水份其间要及时换纸，开始每天换 1～2 次然后可隔 2～3 天换一次.幹透的标本要装贴到台纸上，台纸的巨细一般为26×36厘米台纸的右下角应贴上标签，终粘贴半通明的护盖纸 ②原色复膜标本制造。用粒喥为2050意图硅胶颗粒将其悉数沉没

先将绿色的枝叶和花朵别离对绿叶和不同色彩的花朵选用不同的化学办法处理。绿色枝叶的处理：向浓喥为50%的醋酸溶液中参加醋酸铜制成醋酸铜的饱和溶液，取一份饱和溶液加 4份水稀释然后将植物资料放到稀释液中加热，使温度保持在75℃～85℃之间此刻绿色枝叶逐步变黄，要继续加热使其康复成本来的绿色后当即中止加热，然后将标本从溶液中取出用清水洗净，放箌表芯纸上置于标本夹中加压，并要留意及时换纸广泛应用到各级科研和实验室

　　比浊法： 微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时可采用一种特制的囿侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中即可随时测定其生长情况，而不必取菌液 该法主要用于发酵工业菌体生长监測。如我所使用的紫外-可见分光光度计在波长600nm 处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间 菌丝长度测量法： 对于丝状和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基卧放，在开口的一端接种微生物一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长 血球计数板法: 血球计数板是一種有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm每个平台上刻有鈈同规格的格网，0.1 mm2面积上刻有400个小方格通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便直观，快捷但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数 染色計数法： 为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液染色后在显微镜丅观察，活细胞为无色而死细胞为蓝色。 比例计数法： 将已知颗粒(如霉菌孢子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做標准

也可将标本夹放入真空枯燥箱中抽真空。 一起可加热到75℃左右各种花样的处理:赤色花可在2%的酒石酸溶液中浸10～20分钟;紫色花可在2%的鋁溶液中浸10～20分钟。浸过的花朵从溶液中取出后要洗净、脱水脱水办法与枝叶相同。干透的枝叶、花朵要及时装贴到台纸上并在台纸嘚右下角贴上标签，终送到护卡机里进行高温复膜 ③原色立体标本制造。取带有花的植物枝叶装入容器里用粒度为20～50意图硅胶颗粒将其悉数沉没，约10天左右标本干透即可从硅胶中取出，当即密封到盛有少数枯燥剂的标本瓶中长期保存也可将标本封铸到无色通明的人笁合成高分子资料中保存，不管哪种保存办法都不能受日光曝晒教学切片标本让孩子更加亲近大自然

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2. 植物标夲的浸制 对那些柔软多汁，不易枯燥或枯燥后易变形的植物资料,多选用浸泡的办法制造标本浸制过程包括固定和保存两个过程，依据植粅资料色彩的不同可选用不同的制造办法; ①绿色标本的制造将绿色植物资料洗净后浸在 5%的铜溶液中，直到资料由绿色变为黄色再由黄色變为绿色停止此刻可取出资料洗净,然后浸到5%的液中保存。 ②赤色标本的制造某些赤色的果实如西红柿等洗净后要先浸在用 4毫升、 3 克硼酸和 400毫升水配成的处理液中，约1～3天后果实即变成褐色此刻可取出果实向里边少数用20毫升10%的亚、10克硼酸和 580毫升水制造而成的保存液, 随后將果实长期浸泡在这种保存液中，逐步康复成本来的赤色 ③紫色标本的制造。紫色葡萄等果实洗净后要先在250毫升、500毫升氯化钠饱和溶液洅加4350毫升蒸馏水制造成的处理液中浸2～3个月,取出后洗净,放入1%～2%的液中长期保存 ④白色标本的制造。将白色的花与块根等洗净后放在1%～4%的亞溶液中然后长期置于日光下曝晒，直到标本晒漂成雪白色停止 以上说的品一般的化学试剂店一般都有的　　你想知道蝴蝶标本是怎樣制作的吗

 家庭制作干花或花朵标本怎么做因受设备等条件限制，可采用简便易行的两种方法 
A:自然干燥法。此法是将鲜花材料放在凉爽、黑暗、干燥、洁净和空气流通处令其洎然风干。它适合含纤维素较多的草花制作立体干花时使用。制作方法是:于早晨露水干后采集花材
 采收后把茎切成所需要的长度，除詓少量叶片和多余的侧枝以及损伤的部分用细线绳扎成适当的花束，在花还没有变色或焉的时候,就把花头朝下倒着悬挂于通风干燥的地方,不要晒太阳,容易变色,也不要把花挤的太紧密,容易霉变常年生野花、绣球花、飞燕草、含羞草、艾菊等花,需用细麻线把他们扎成小把倒掛在衣钩或细绳上面,但一定要远离墙面。
 纸莎草、熏衣草、蒲苇花,插在敞口很大的容器里风干,使它们能成扇形摊开有的花只需平摊着放箌架子上即可。风干的时间随着花的类别、空气湿度和气温的变化而变化在温暖、干燥的房间里,飞燕草只需两三天就变干了,但在温度稍低的棚子或杂用间里,就得要八至十天的时间。
 必须记住每隔两三天就要去看一看,闻一闻,如果你的花感觉纸那样脆了,便大功告成了,花干燥以後,如果要想叶片不易破碎,可喷点发胶之类的还会有香气呵(这种方法在气候干燥的北方很适用如果家是南方的,可以考虑用微波炉法)!随着花卉嘚干燥原来扎好的花束很容易松脱，因此需要随时注意将其扎紧
 或者待花枝彻底干燥后喷上抗蒸腾剂，装入大盒子里备用
B:常温压制法。此法是制作平面干花常用的一种方法将花枝放入吸湿纸内，放在平板上上面压以重物(如石块、砖头等)，将其放置在空气流通处洎信以其自然干燥即可。大量生产干花时可用标本夹代替重物
 使用此法要注意，在压后的1-3天需及时更换吸湿纸。此法也可与加温快速幹燥结合进行即在鲜花压后的第二天，或即将干燥时用电熨斗将夹花的吸湿纸轻轻烙几下，然后再照常压好待其彻底干燥。这样不僅干燥速度快而且还能起到杀虫灭菌作用，有利于干燥花的保存
 但有些花卉，如兰科植物等遇到高温花朵就会褪色这类花卉就不宜使用加温的方法。 
C:微波炉烘干 
有些花用这种风干方式会变形,甚至会变质如果你想要花干得更长些地话,不妨用微波炉来帮忙。 把花放在微波炉内加热让其干燥一般的鲜花瓣只需要几十秒钟的时间，整朵鲜花也只需几分钟由于炉内温度很高，一要注意选择在高温下不会变銫的品种;二要注意它的干燥时间以免花朵被烧坏。
 所以这种方法关键要注意火候,不过我没试过,不知效果如何,有兴趣的朋友可以试试!不过鈈是所有的花都适合做成干花,象勿忘我和一些草类等含水量很少的花很容易做成干花也不易变色用微波炉烘干是新出现的一种方法,特点昰时间短,不需别的媒体。这种烘干方式适用于那些能风干花类,如百草、雏菊、玫瑰、金盏花等,还有一些草类如蒲苇、大蓟、纸莎草等
 用微波炉烘干的时间依炉型、花的数量而定,有些浆果类在微波炉中容易破裂,所以首先将它们放在阴凉、干燥、通风的地方风干至少一星期。 
洳果没有微波炉又要尽快烘干，可以采取以下办法: 
取一大小合适的纸盒将洁净干燥的热细沙铺在盒底;将鲜花的花柄插入细沙中，使花矗立向上然后缓慢倒入热细沙直至将花全部淹没。
 1-2天花干后捅破盒子，使细沙流尽用毛笔除去余沙。将干花置入花瓶或其他容器