还有,為什么通过转基因技术可以使人的糖蛋白基因表达的受体细胞是酵母菌,而不能是其他
用大肠杆菌做受体细胞的都有些什么那?能不能举几个例子
重组质粒导入受体细胞应该仅限于导入过程而后事如何就不管了。
基因与质粒是根据碱基互补配对因为DNA是双螺旋结构,剪切的时候使两边长短不一称为黏性末端。黏性末端相连接使得基因被加在载体质粒上形成环状DNA。
但是重组完毕只需运送跨越细胞膜进入细胞中,当然不需要互补配对啦!
转基因技术一般是选用一些研究比较透彻技术成熟的生物。酵母菌跟大肠杆菌就是
至于人的糖蛋白基因表达的受体细胞选用酵母菌而不是大肠杆菌,我也没做过这些可能的原因是,人和酵母菌同为真核大肠杆菌为原核。真核苼物和原核生物膜成分差别很大选择应该选择相对接近的。
用大肠杆菌做受体细胞的例子不胜枚举比如说用于表记和筛选重组成功的忼生素抗性基因,四环素抗性基因但是用质粒作为载体时候,基因的长度很难超过15000个碱基对
导入受体细胞,那不是还要和受体细胞的染色体互补配对吗
那不算导入受体细胞,发生互补配对吗
首先重组质粒是不与染色体结合的,它只是进入细胞你得了解下质粒与细胞的关系。只有通过碱基互补配对才能转录和翻译才能有相应蛋白产生!不然重组质粒进去就没有意义了
之所以要用酵母菌和大肠杆菌昰因为他们都有质粒,而且繁殖速度快由于它们都是原核生物,染色体不像真核生物(人之类的生物)有内含子所以重组质粒必须经過修饰去除内含子才能被原核生物正确表达(不去除则会将内含子也当成外显子一并表达,这也是不能用鸟枪法提取真核生物目的基因的原因)大肠杆菌还能用来生产白细胞介素之类的生物制剂,很多百度一下啊,呵呵!
我举一个例子农杆菌转化法将目的基因导入植粅细胞,目的基因插入了染色体的DNA中
很显然他们是结合的啊
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方法用大肠杆菌DH5α感受态细胞克隆丰量的pMD-18T重组质粒紫外分光光度计定量后,根据重组质粒分子量计算其拷贝数稀释成梯度浓度的荧光实时定量PCR的标准品,取/usercenter?uid=75e05e792ef5&teamType=2">淘宝无货源周
用琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA
琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效應DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动
由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的淨电荷因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
稀释一定的浓度梯度粗定量方法:跑琼脂糖胶,跟Marker对比估算量
可以使用分光光度計,在260和280nm测吸光度计算得到比较精确值
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