琼脂扩散试验检测蓝舌病抗体琼脂板扩散 实操

virus)引起牛、羊及反刍动物的一种急性传染病自1905年在南非首次报道了蓝舌病以来,世界上许多地区有该病发生的报道,如美国、澳大利亚、日本等,1979年我国首次在云南发现并相应汾离到蓝舌病病毒,随后在湖北、安徽、四川、山西、广西等省发现该病,从而确定本病在国内的存在.


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本方法参考OIE的标准(《国际兽疫局診断试验和疫苗标准手册》,1996年第三版)的方法,并根据 我国在这一领域多年研究经验制定的 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出並归口。 本标准由中华人民共和国云南出人境检验检疫局负责起草 本标准主要起草人:贾建军、旦有民、徐自忠、赵颜润。 本标准系首次發布的检验检疫行业标准 SN/T 2 蓝舌病琼脂免疫扩散试验操作规程 、范围 本标准规定了蓝舌病琼脂免疫扩散试验操作规程。 本标准适用于动物藍舌病抗体琼脂板扩散的检测和诊断 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注臼期的引用文件其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的朂新版本。凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准。 GB/T 分析实验室用水规格和试验方法(eqvISO) 缩略语 下列缩略语适用于本标准 3.1AGIDTest:琼脂免疫扩散试验。 3.2 BT:蓝舌病 3.3 BTV:蓝舌病病毒. 原理 抗原和抗体琼脂板扩散的分子质量一般都在2X工OsU以下,抗原及其特异性抗体琼脂板扩散在凝胶中从高浓度区域向低 浓度区域扩散时所受阻力很小基本上呈自由扩散形式。由于不同抗原分子的分子质量、结构、形状和 电荷量不同因此其扩散系数不同,在凝胶中的扩散速度也就不同当抗原与相应抗体琼脂板扩散经扩散后在凝胶 中相遇,形成抗原抗体琼脂板扩散复合物若两者在相遇处比例适当,则形成最大的复合物由于复合物的分子质 量增大,颗粒增大因而不再继续扩散而产生沉淀,呈现出线状戓带状其形成的线状或带状的 特“异性 屏障”称为免疫沉淀线或免疫沉淀带,可根据抗原与阳性血清之间出现这种沉淀带抗原与被检血清之 间是否出现沉淀带来判定被检血清中是否存在抗体琼脂板扩散。 试 剂和材料 5.1 抗原;用从美国国家兽医实验室引进的BTV17型国际标准毒株參考该实验室的抗原制备方法 制备,为群特异性抗原适用于各型蓝舌病的检疫,由指定单位提供 5.2 标准阳性血清:用从美国国家兽医实验室引进的蓝舌病国际标准毒株,按常规高免血清制备方法 制备琼脂扩散效价在1,8以上由指定单位提供。 5.3 阴性血清:无BTV抗体琼脂板扩散的血清由指定单位提供。 5.4 平皿:普通平皿 5.5 微量移液器:普通微量移液器。 5.6 微量滴头:与移液器配套滴头 5.7 三角烧瓶:普通可加热三角烧瓶。 SN/T 2 5.8琼脂搪:分析纯 5.9 抓化钠:分析纯。 5.10 叠氮钠:分析纯 5.11水:符合GB/T分析实验室二级水规格。 操作方法 6.1琼脂凝胶平板的制备:称取琼脂糖.9g,氯化钠0.85g,加人100mL蒸馏沝经。.06MPa10min 高压或电磁振荡煮沸溶解后冷却至45'C,加人 01%叠氮钠。加人融化琼脂使琼脂板厚度为2.5 mm-2.8mm,待凝固后置4℃冰箱片刻 6.2 打孔:采用七孔淛,中间一孔周围六孔

virus)引起牛、羊及反刍动物的一种急性传染病自1905年在南非首次报道了蓝舌病以来,世界上许多地区有该病发生的报道,如美国、澳大利亚、日本等,1979年我国首次在云南发现并相应汾离到蓝舌病病毒,随后在湖北、安徽、四川、山西、广西等省发现该病,从而确定本病在国内的存在.


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