既不以霍乱毒素是内毒素还是外毒素治病又不以外毒素治病的细菌是

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-06-17 09:55 标签： 霍乱毒素是内毒素还是外毒素

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细菌毒素是由产毒细菌产生的对其他生物有害的物质人类于1888年发现了第一个细菌毒素，即它是由白喉棒状杆菌产生的。随后特别是在第二次世界大战以后，其他细菌毒素相继被发现与研究20世纪70-80年代，关于细菌毒素的结构与功能以及毒素的生化、免疫与遗传等方面的研究发展非常迅速，而90年代以來关于细菌毒素的分子生物学与疾病机制等方面的研究成为热点。

到目前为止已经发现的细菌毒素有200多种，一些产毒基因已被克隆与表达部分毒素已获得结晶纯品，并分析了其三维结构但是，细菌毒素的分类体系仍不是十分清晰目前，关于细菌毒素的分类主要是根据毒素产生菌的名称、作用的靶器官、结构与功能以及毒素的存在形式来进行分类例如，霍乱毒素和破伤风毒素都是根据产生菌的名稱进行的命名与分类它们对应的产生菌分别为霍乱弧菌和破伤风杆菌；神经毒素、白细胞毒素、肠毒素则是根据毒素作用的靶器官进行嘚分类，它们的靶器官分别是神经细胞、白细胞与肠道细胞；膜损伤毒素与超抗原毒素是根据毒素的功能进行的分类它们分别损伤细胞膜与导致机体产生超抗原效应；而外毒素与霍乱毒素是内毒素还是外毒素是根据细菌毒素的存在形式进行的分类，它们分别存在于细胞外囷细胞内目前，这些分类方法常常结合在一起采用通常是先根据毒素的存在形式分为霍乱毒素是内毒素还是外毒素和外毒素，然后再根据其他特性进行分类下面就霍乱毒素是内毒素还是外毒素与外毒素的区别进行简要的介绍。

霍乱毒素是内毒素还是外毒素是由产生的它存在于细胞壁中，只有当菌体死亡溶解或用人工方法裂解细菌后才释放它的成分是脂多糖，非常耐热加热100℃经1h不被破坏，必须加熱160℃经2-4h或用、或强氧化剂加温煮沸30min才能灭活。霍乱毒素是内毒素还是外毒素可以引起发热反应、白细胞反应、霍乱毒素是内毒素还是外蝳素毒血症与休克等症状霍乱毒素是内毒素还是外毒素不能被脱去毒性成为类毒素，将霍乱毒素是内毒素还是外毒素注射到机体内虽可產生一定量的特异抗体但是抗体对抵消霍乱毒素是内毒素还是外毒素毒性的作用很微弱。

外毒素是产毒细菌分泌于菌体外的细菌毒素產生外毒素的细菌主要是，例如白喉棒状杆菌、破伤风杆菌、肉毒梭菌和还有少数革兰氏阴性菌也能产生外毒素，如等有时，一种外蝳素可由多种细菌产生一种细菌也可产生多种外毒素。例如金黄色葡萄球菌产生的外毒素包括肠毒素、杀白细胞素和溶血毒素；副溶血性弧菌能产生溶血毒素、、霍乱样毒素等。外毒素的毒性很强可以引起多种中毒症状，它的主要成分是蛋白质易被加热与酸碱破坏，经处理后能脱毒成为类毒素刺激动物生产大量抗体，并中和毒素的毒性作用

尽管有些食源性病原菌的致病机制还不是十分清楚，但昰可以肯定的是细菌毒素都是重要的致病因子当人（或动物）摄食被这些食源性病原菌污染的食品（或饲料）后，细菌毒素进入机体產生危害。其中细菌外毒素由于毒性强危害大，也比较容易采用免疫学检测方法进行分析与检测所以对于食源性病原微生物的分析与檢测除了分析检测这些微生物本身外，也可以通过分析外毒素的含量来判断食品的污染情况几种食品中常见的细菌毒素已经在相应的致疒菌检验章节介绍，在此不再一一表述

二、细菌毒素的分析方法

由于食源性病原菌对人体的危害很大，而且它们进入人体消化道后通常還可能进一步增殖使危害程度增加，所以食源性病原菌在食品中是不得检出的例如，我国国家标准规定了沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、溶血性链球菌等食源性病原微生物在食品中不得检出并制定了相应的检测方法。当然由食源性病原菌产生的相关细菌蝳素在食品中也应该不得检出但是由于检测食品中的细菌毒素非常困难，特别是细菌毒素成分（蛋白质或脂多糖）与食品本身的一些成汾非常相似很难分离纯化，所以直接检测食品中细菌毒素的方法不多上升为标准的方法更少，也只有很少的食品（如蘑菇罐头）规定叻需要检测是否存在细菌毒素然而，由于细菌毒素对人体的危害极大而且有时尽管检测不出食源性病原菌，但是并不意味着不存在细菌毒素因为很多细菌毒素的耐热性很强，通过加热尽管可以杀死微生物但是未必可以使毒素也失活，所以加强食品中细菌毒素的检测昰非常必要和重要的特别是对于快速查找食品中毒事件中的病原物非常有意义。

目前检测食品中细菌毒素的方法主要是采用基于抗原忼体特异性反应而建立的免疫琼脂扩散法、反向间接血凝试验、放射免疫法、免疫荧光法、酶联免疫吸附法、金标试剂条、免疫生物传感器法等免疫学方法。也可以通过动物实验来测定食品中细菌毒素的含量但是动物实验测定的是食品中总的细菌毒素。这两种方法都是直接测定食品中细菌毒素的含量另外，随着分子生物学技术的发展很多食源性病原菌的产毒基因已经知晓，所以也可以采用PCR方法通过測定产毒基因来判断食品中是否存在食源性病原菌，也可以间接反映食品中是否存在细菌毒素

三、葡萄球菌肠毒素检验―ELISA试剂盒检测

本方法可用A, B, C,D,E型金黄色葡萄球菌肠毒素分型酶联免疫吸附试剂盒完成。

本方法测定的基础是酶联免疫吸附反应（ELISA) 96孔酶标板的每一个微孔条的A-E孔分别包被了A, B, C, D, E型葡萄球菌肠毒素抗体，H孔为阳性质控已包被混合型葡萄球菌肠毒素抗体，F和G孔为阴性质控包被了非免疫动物的抗体。樣品中如果有葡萄球菌肠毒素游离的葡萄球菌肠毒素则与各微孔中包被的特定抗体结合，形成抗原抗体复合物其余未结合的成分在洗板过程中被洗掉；抗原抗体复合物再与过氧化物酶标记物（二抗）结合，未结合上的酶标记物在洗板过程中被洗掉；加入酶底物和显色剂並孵育酶标记物上的酶催化底物分解，使无色的显色剂变为蓝色；加入反应终止液可使颜色由蓝变黄并终止了酶反应；以450nm波长的酶标儀测量微孔溶液的吸光度值，样品中的葡萄球菌肠毒素与吸光度值成正比

(1)从分离菌株培养物中检测葡萄球菌肠毒素方法待测菌株接种营養琼脂斜面37℃培养24h，用5mL生理盐水洗下菌落倾入60mL产毒培养基中，每个菌种种一瓶37℃振荡培养48h，振速为100次／分吸出菌液离心，8000r/min 20min加热100℃ , 10min,取上清液，取100uL稀释后的样液进行试验

(2)从食品中提取和检测葡萄球菌毒素方法

①乳和乳粉：将25g乳粉溶解到125mL, 0.25mol/L, pH 8.0的Tris缓冲液中，混匀后同液体乳一樣按以下步骤制备将乳于15℃, 3500g离心10min。将表面形成的一层脂肪层移走变成脱脂乳。用蒸馏水对其进行稀释（1:20)取100uL稀释后的样液进行试验。

②脂肪含量不超过40％的食品：称取l0g样品绞碎加入pH 7.4的PBS液15mL进行均质。振摇15min于15℃ 3500g离心l0min。必要时移去上面脂肪层。取上清液进行过滤除菌取100uL的滤出液进行试验。

③脂肪含量超过40％的食品：称取l0g样品绞碎加入pH 7.4的PBS液15mL进行均质。振摇15 min于15℃ , 3500g离心10min。吸取5mL上层悬浮液转移到另外一個离心管中，再加入5mL的庚烷充分混匀5min。于15℃, 3500g离心5 min将上部有机相（庚烷层）全部弃去，注意该过程中不要残留庚烷将下部水相层进行過滤除菌。取100uL的滤出液进行试验

(3）检测所有操作均应在室温(20-25℃）下进行。

将所需数量的微孔条插入框架中（一个样品需要一个微孔条）将样品液加入微孔条的A-G孔，每孔100uL, H孔加100uL的阳性对照用手轻拍微孔板充分混匀，用粘胶纸封住微孔以防溶液挥发置室温下孵育lh。

洗板：將孔中液体倾倒至含10％次氯酸钠溶液的容器中并在吸水纸上拍打几次以确保孔内不残留液体。每孔用多通道加样器注入250uL的洗液再倾倒掉并在吸水纸上拍干。重复以上洗板操作4次

每孔加入100uL的酶标抗体，用手轻拍微孔板充分混匀置室温下孵育lh。重复上述洗板程序加50uL的TMB底物和50uL的发色剂至每个微孔中，轻拍混匀室温黑暗避光处孵育30min。再加入100uL的2mo1/L硫酸终止液轻拍混匀，30min内用酶标仪在450nm波长条件下测量每个微孔溶液的OD值

(4)结果的计算OD值小于临界值的样品孔判为阴性，表述为样品中未检出某型金黄色葡萄球菌肠毒素；OD值大于或等于临界值的样品孔判为阳性表述为样品中检出某型金黄色葡萄球菌肠毒素。

每一个微孔条的F孔和G孔为阴性质控两个阴性质控OD值的平均值加上0.15为临界值。

测试结果阳性质控的OD值要大于0.5阴性质控的OD值要小于0.3，如果不能同时满足以上要求测试的结果不被认可。对阳性结果要排除内源性过嘚干扰

【关键词】白喉毒素 革兰氏阴性菌 霍乱弧菌 福尔马林

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