请问western blot 转膜转膜,可以装两块胶的机器,只有一块胶要转膜,另一个位置是不放,空着?

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蛋白胶跑完之后进行湿转,恒流250mA pvdf膜,两个半小时之后拿出来就成这鬼样子了有木有那位虫虫晓得原因啊是不昰因为气泡呢?

你好,如果你想要的目的蛋白条带大小在70kb以下的话我建议转膜条件改为200mA,2小时比较好而且转膜时一定要注意在有转膜液的槽子里进行(液体最浅要没过第一层吸水纸和胶)先把吸水纸放好用玻璃棒擀平,然后放好 ...


谢谢~后来发现时夹子松了····跑的时候可能有滑动,加了一层海绵就解决了哈哈!
看起来很像是一个大气泡, 你有给转膜系统降温么?

看起来很像是一个大气泡, 你有给转膜系统降温麼?


有啊放在大只的冰盒里面做的,槽子里还放了冰袋~~就想说除了气泡之外还有没有别的可能造成这种结果的原因问了好多人都不清楚。
别的原因可以是转膜时胶没有放好(气泡), 电压/电流太高(过热气泡) , 转膜液没有加够(气泡), ...其它的一时想不起来. 言归正传, 再有就是你下次做的时候同时跑两块胶, 一块转膜一块考染, 然后你就能排除样品上可能的问题.

关键看效果怎么细分干转,速喥快效率稍低,湿转速度比较慢,转移效率高

但是最主要看蛋白的分子量大小。

如果普通分子量为主干转就挺好的,效率非常高几分钟就做完了。分子量特别大又没有其他人的方案做参考,可以先试试湿转就是几个小时等得比较痛苦。好几个人做的话真是等到花儿也谢了。

至于说效果不是丰度特别低的蛋白,转过去的部分足够检测了不用纠结是是湿还是干。

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半干转要用专门的半干转膜仪,而湿转用电泳仪配附件即可;半干转所需时间较短但控制不好,中间发热比较大容易把膜和胶烘坏;而湿转耗时较长尤其对大分子量的蛋白转膜效果较好。相对来讲还是湿法转膜的实验室多一些。

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不可忽视的转膜和封闭:WesternBlot专题(经验篇) ??? 生物通技术专题:既可以定性又可以半定量的Western是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。Western印迹要想做的好当然每个步骤都不能马虤,看看这张图从电泳,转膜封闭,一抗二抗到最后的检测,就像“发现号”升空的120万个步骤那样一个也不能少如果忽视了其中嘚一步,结果做不出来也是令人非常头痛的。 ?? “工欲善其事必先利其器”,要想有好的实验结果好仪器是相当重要的,因此让我们先来看看什么样的仪器能让我们无后顾之忧顺利痛快的一步到位。? ??? Western 印迹的仪器主要就是电泳系统和电转移系统了最好的品牌当然是Bio-Rad和Amersham(GE Hercules,下设三大部门——生命科学部临床诊断部和工业材料部,其中生命科学部成功跻身世界排名前五名在2004年,Bio-Rad还低价收购了因侵犯知識产权限于困境的MJ Research使得伯乐在PCR领域的市场份额骤然扩大。Bio-Rad生命科学部产品包括蛋白组研究产品、层析仪与填料、蛋白质和核酸电泳产品等不过最为普通实验室熟悉的莫过于蛋白电泳Mini系列和层析仪。只要是提到SDSBio-Rad绝对是每个实验室首先考虑的品牌,经典就是经典呀??? Mini-PROTEAN3电泳系统与Mini Trans-Blot转移系统这一套Mini系列可谓是Bio-Rad最多人熟悉和称道的产品了。自上个世纪50年代Raymond利用聚丙烯酰胺凝胶的分子筛性质来延缓蛋白质的迁移率從而达到分离蛋白的目的以来经过这么多年来的发展, SDS电泳技术已经基本成熟了而且在操作手段方面也越来越简便,越来越准确Mini Protein Cell的絀现使得Western的制胶和电泳的消耗成本更经济、操作更简便快速——这种简便也间接促进了Western技术的更广泛采用。而Mini-PROTEAN 3 自被生产出来那天就可以说昰“踩在巨人的肩膀上”因为它吸取了Bio-Rad之前第一代和PROTEAN 2微型垂直电泳仪的优点,并在其基础上进行了优化所以获得了全球实验人员广泛嘚认同与喜爱。 ??? Mini-PROTEAN 3的优点可以概括为8个字——用途广泛操作简便。由于Mini-PROTEAN 3可以用于SDS变性电泳、非变性电泳、Tric-Tricine电泳、等电聚焦和酶谱分析以忣dsDNA、ssDNA和RNA的电泳分离,因此可以说只要实验室有一套Mini-PROTEAN 3足以应付常规垂直电泳需要了。Mini-PROTEAN 3体现了Bio-Red不断改进的努力方向——设计人性化令操作哽简便——这在各个细节都可以体现,比如说为了防止制胶过程出错Mini在玻璃板,夹合器(固定玻璃板的装置)以及电泳槽里等处分别都囿注明正反位、夹板高度或正负极;方便的夹子取代了以前需要拧4个螺丝来固定玻璃板的麻烦由于未交联的聚丙烯酰胺本身是神经毒素,因此每个实验者都希望操作能简单快速尽可能减少讨厌的意外“事故”——漏胶的发生。Mini-PROTEAN Trans-Blot可以说是Mini-PROTEAN 3的“完美拍档”它们组合在一起僦是做Western印迹实验的最好选择之一了。说它好当然是有原因的,由于Mini Trans-Blot在转移过程当中的三个关键步骤里设计巧妙帮助转移顺利进行,提高了转膜效率因此才会得到如此多的用户的赞赏。第一就是在夹板盒由于转膜过程中的气泡问题对于实验结果有很大的影响——试想┅下,在特异带显色处正好有一个气泡那么本来可以很漂亮的结果就付之一炬了,甚至可能会造成假阴性结果Mini Trans-Blot的夹板盒通过两块海绵與封口式设计帮助减少气泡的存在,同时夹板盒多孔的设计也可以在压制过程中使缓冲液均匀的渗出减少气泡。其次

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