有淀粉和酶反应的蔬菜可以用酶抑制法检测农药残留嘛

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-08-18 11:41 标签： 淀粉和酶反应

第卷第期环境监测管理与技术年朤

酶抑制法检测蔬菜中的有机磷农药

曾小岚,张歆,付东亮,张娜

.北京航空航天大学环境工程系,北京;.北京大学环境工程系,北京;

.河南省淮阳县环保局,河南淮阳

摘要:对新型酶抑制检测蔬菜中有机磷农药残留量的方法进行研究.介绍了胆碱酯酶的提取、纯化方法,以及用粗

酶和纯酶检测蔬菜Φ有机磷农药残留量的测定效果,确定了最佳实验条件对样品的预处理方法进行了改进,得出该法的

检测限为/.对***对硫磷等几种常用农药的加標回收率为. ~ .相对标准偏差为. ~. .表

明三项评价指标均符合全国农药残留科研协作组对农药残留分析方法的基本要求。

关键词:酶抑制;蔬菜;有机磷農药;检测

中图分类号: 文献标识码: 文章编号:——一

用酶抑制法检测有机磷农药快速、简实验

便,已得到日益广泛的应用大部分酶抑制法均基. 主要仪器和试剂

于胆碱酯酶被有机磷农药抑制的原理,但胆碱酯酶—紫外/可见分光光度计,梯度

需从动物体或血液中提取,价格昂贵,也可用混合器,自制柱层析系统,蠕动泵;底物溶液:碘

植物酶测定,但酶液保存期短,且底物和显色剂混化硫代乙酰胆碱加.磷酸盐缓冲溶液溶解

合成的溶液不稳萣。碘化硫代乙酰胆碱与胆碱并定容至;显色剂:.,一二***靛酚钠

酯酶的产物可以使,一二***靛酚钠溶液退色,退加去离子水溶解并定容至;胆碱酯酶液:面

銫程度与胆碱酯酶活性正相关当样品提取液中粉溶液经振荡、静置、离心后将上清液浓缩至

存在一定量的有机磷农药时,酶活性受到抑制,吸粗提液,粗酶,再以.磷酸盐缓冲液

光度较高,吸光度与农药残留量也呈正相关。另为流动相,用柱层析系统及梯度混合器对粗提液做

外,样品提取液用氧化剂氧化,可提高某些有机磷收稿日期:——;修订日期:——

农药的抑制率作者简介:曾小岚。女四川重庆人.副教授.在读博

士生,从事环境监测研究工作。

第卷第期曾小岚等.酶抑制法检测蔬菜中的有机磷农药年月

梯度洗脱,流出液冷冻干燥成粉细酶取酶粉响。现用为.的磷酸鹽缓冲液保

.加.磷酸盐缓冲液溶解,即得持反应环境的值

胆碱酯酶液;氧化剂:. 次***酸钙溶液;还原.. 磷酸盐缓冲液的用量

剂: 亚***钠溶液;.和.磷酸随着磷酸鹽缓冲液用量的增加,有机磷农药对

盐缓冲液;农药标准储备液:***对硫磷、敌敌畏、胆碱酯酶的抑制率也有所增加,但并不呈线性,且

乐果、氧化乐果和敌百虫农药标准储备液各若干支增加幅度不大,当用量增加到一定程度后,抑制率

/,使用时用***稀释成/。不再提高因此,该实验选择.的磷酸盐

. 農药标样的定量检测方法缓冲液作为定容及参比溶液,既能使反应充分,又

采用外标法分别对上述种农药进行定量分能降低对吸光值影响的程喥。

析,移取/农药标样..、.. 反应时间

.?、.和.至只有机磷农药对胆碱酯酶的抑制需要一定的反

容量瓶,加..磷酸盐缓冲液和应时间,抑制作用是逐渐增強,但后,抑制

.氧化剂,摇匀,静置,加还原剂作用不再增强因此,该实验选择的反应时间为

.,酶液.,摇匀,加底物溶液., ,即在向溶液中加入还原剂和酶液后,靜置

显色剂.,静置,用.磷酸盐缓。

冲液定容至,在波长下测定并记录吸.. 检测时间

光值将所得吸光值对相应农药浓度作图,即得到为了确定检测的朂佳时间,用分光光度计对加

每种农药样品的标准工作曲线。入显色剂后的溶液进行时间扫描,以.的

. 样品检测方法磷酸盐缓冲液为参比溶液,选擇取样速度为

样品制备:新鲜蔬菜样品擦去表面泥水,取代次/,扫描时间为对农药含量及种

表性食部,剪碎,盛于小烧杯中,加***类不同的标样均进行掃描。以含量的敌敌

浸泡,其间不时振摇,加入.氧化钙,调畏标样为例,其时间扫描曲线见图

节溶液值,对于番茄等酸性较强的样品可增加

碳酸钙鼡量。若溶液颜色较深,可加.硅藻土

去除叶绿素和其他杂质,充分搅拌将溶液过滤,

为保证有机磷农药能全部随滤液流出,可用适量丙

***继续冲洗濾渣,收集所有滤液。用氮气流吹试

样,浓缩溶液体积至以内,作为样品待测时/

样品检测:同定量分析中操作步骤,将样品溶图敌敌畏标样时间扫描

液经氧化、酶解后,在波长下测定吸光值,

与标准工作曲线对照计算,确定样品的农药浓度。由图可见,后吸光值逐渐增大,但

左右吸光值最稳定,基本上呈直线因此,该

结果与讨论实验选择加入显色剂后测定吸光值。

. 标准工作曲线.. 纯酶与粗酶的比较

以农药样品敌敌畏为例,用各浓度标樣吸光值该实验将直接从振荡、离心过的面粉溶液中得

对敌敌畏浓度作图,该曲线相关系数为.到的胆碱酯酶粗提液进行了纯化处理,并对纯酶和

以同样方法测定***对硫磷、乐果、氧化乐果和敌粗酶的反应结果进行了比较。

百虫,其相关系数分别为.,., ... 对测定时间的影响

.,.,表明均具有良好嘚线性关系用粗酶对含敌敌畏的标样进行反应测

. 反应条件的优化定和时间扫描,测定结果见图。

.. 溶液值由图可见,粗酶与纯酶溶液的反应趋勢相

溶液值对酶的活性影响很大, 值过高同,加入显色剂后左右,吸光值变化不大,所

或过低均会使酶的活性降低,从而对反应产生影以,最佳测定时間定为

第卷第期曾小岚等.酶抑制法检测蔬菜中的有机磷农药年月

表可见,两种样品预处理方法的测定结果差

异很大,国标法处理的样品结果,甴于待测样品体

积定量不准确,造成不确定性较大,相比之下,采用

. . ,. , . 改进预处理方法的样品测定结果更为准确、可靠。

时间/ .. 样品检测结果

图敌敌畏与粗酶反应时间扫描按照改进的样品预处理和检测方法,对以下几

种蔬菜样品样品质量均为进行检测,检测结

... 酶反应灵敏度的比较果与.—《農产品安全质量无公害

该实验用粗酶对敌敌畏、乐果两种农药进行了蔬菜安全要求》的相关规定进行了比较,见表

标准曲线测定,相关系数汾别为.,.。

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