测慢病毒滴度必须用293T的时候用荧光显微镜，怎么用呢

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-08-26 06:03 标签： 慢病毒滴度

【摘要】：目的:探讨mi R-155对人椎间盘退变髓核细胞凋亡的影响及其作用机制方法:首先构建慢病毒表达载体,在293T细胞中获得重组慢病毒,然后感染椎间盘退变髓核细胞得到稳定过表达细胞系,同时设置空载体和空白细胞组对照。用荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,分别提取三组细胞总RNA,采用RT-q R-155的表达;通过流式細胞术检测细胞凋亡,Western-Blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、Caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,JC-1试剂盒检测细胞线粒体膜电位的变化情况结果:在荧光显微镜下,经慢病毒感染嘚过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光;RT-qPCR结果显示构建的稳定过表达细胞系(GV369-miR-155-NP)中mi R-155可能通过靶向结合Caspase-3和FADD阻止FasL-Fas途径或通过线粒体途径抑制人椎间盘退变髓核细胞凋亡。


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