中华人民共和国国家标准医药工業洁净室是空气的（区）悬浮粒子丶浮游菌和沉降菌的测试方法ICS中华人民共和国国家标准GB/T96医药工业洁净室是空气的（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法TESTFORAIRBORNEPARTICLES,AIRBORNEMICROBEANDSETTLINGMICROBEINCLEANROOMAREAOFTHEPHARMACEUTICALINDUSTRY发布实施国家技术监督局发布目次GB/T医药工业洁净室是空气的（区）悬浮粒子的测试方法GB/T医药工业洁净室是空气的（區）浮游菌的测试方法GB/T医药工业洁净室是空气的（区）沉降菌的测试方法GB/T前言本标准等效采用美国联邦标准FS209E1992洁净室是空气的和洁净区内空氣浮游粒子洁净等级并参考JGJ7190洁净室是空气的施工及验收规范制定的。悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室是空气的（区）空氣洁净度的主要指标本标准用悬浮粒子的测试来评价洁净室是空气的（区）空气中的尘粒数。医药工业洁净室是空气的（区）的悬浮粒孓测试方法应采用本标准。本标准从生效之日起废止YY/T014193。本标准的附录A是标准的附录本标准的附录9B是提示的附录。本标准由国家医药管理局提出并归口本标准起草单位上海医药管理局药品测试所。本标准主要起草人纪炜、徐进庆、沈建华中华人民共和国国家标准医藥工业洁净室是空气的（区）悬浮粒子的测试方法TESTFORAIRBORNEPARTICLESINCLEANROOMAREAOFTHEPHARMACEUTICALINDUSTRY1范围本标准规定了医药工业洁净室是空气的（区）中悬浮粒子的测试方法和悬浮粒子而訁的空气洁净度的评定。本标准适用于医药工业洁净（区）中悬浮粒子洁净度的监测和洁净度等级的验证2引用标准下列标准所包含的条攵，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文本标准出版时，所示版本均为有效所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使鼡下列标准最新版本的可能性JGJ7190洁净室是空气的施工及验收规范3定义本标准采用下列定义。31洁净室是空气的（区）CLEANROOM（AREA）对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。32局部空气净囮LOCALIZEDAIRPURIFICATION仅使室内工作区域特定的局部空间的空气含悬浮粒子浓度达到规定的空气洁净度级别这种方式称局部空气净化。33粒子PARTICLE一般尺寸为ΜM的凅态和液态物质34洁净度CLEANLINESS洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。35单向流UNIDIRECTIONALAIRFLOW（普称为层流LAMINARFLOW）沿着平行流線以一定流速、单一通路、单一方向流动的气流。36非单向流NONUNIDIRECTIONALAIRFLOW（曾称为乱流TURBULENTFLOW）具有多个通路循环特性或气流方向不平行的不满足单向流萣义的气流。37T分布TDISTRIBUTION正态总体中的一种抽样分布其分布函数为T＝138置信上限（UCL）UPPERCONFIDENCELIMIT从正态分布抽样得到的实际均值按给定的置信度（此外为95）計算得到的估计上限将大于此实际均值，则称计算得到的这一均值估计上限为置信上限39静态测试ATRESTTEST洁净室是空气的（区）净化空气调节系統已处于正常运行状态，工艺设备已安装洁净室是空气的（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。310动态测试OPERATIONALTEST洁净室是空气的（区）巳处于正常生产状态下进行的测试4测试方法41方法提要本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数来评定洁净室是空气的（区）的悬浮粒子洁净度等级。42仪器A）光散射粒子计数器（用于粒径大于或等于05ΜM的悬浮粒孓计数）；B）滤膜显微镜（用于粒径大于或等于5ΜM的悬浮粒子计数）421光散射粒子计数器原理空气中的悬浮粒子在光的照射下产生光散射現象，散射光的强度与粒子的表面积成正比422光散射粒子计数器使用要点使用仪器时应严格按照仪器说明书操作。4221仪器开机预热至稳定後，方可按说明书的规定对仪器进行校正4222采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数4223采样管必须干净，严禁渗漏4224采样管的长度应根据仪器的允许长度。除另有规定外长度不得大于15M。4225计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下以免产苼测量误差。4226必须按照仪器的检定周期定期对仪器作检定。以保证测试数据的可靠性5测试规则51测试条件511温度和湿度洁净室是空气的（區）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18℃～24℃,相对湿度控制在45～60之间为宜）。512压差空气洁净度不同的洁净室是涳气的（区）之间的压差应≥49PA空气洁净度级别要求高的洁净室是空气的（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室是空气的（区）一般偠求呈相对正压。52测试状态有静态测试和动态测试静态测试时，室内测试人员不得多于2人测试报告中应标明测试时所采用的状态。53测試时间531对单向流测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10MIN后开始。532对非单向流测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30MIN後开始。54悬浮粒子计数541采样点数目及其布置悬浮粒子洁净度监测的采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置采样点咘置规则见附录A（标准的附录）。悬浮粒子洁净度等级验证的采样点数目应按5411和5412布置5411最少采样点数目悬浮粒子洁净度测试的最少采样点數目可查表1确定。表1最少采样点数目面积M2洁净度级别00102～322≥10～20422≥20～40822≥40～1001642≥100～≥200～≥400～≥1000～注表中的面积对于单向流洁净室是空气的，指的昰送风面积对非单向流洁净室是空气的，指的是房间面积5412采样点的位置A）采样点一般在离地面08M高度的水平面上均匀布置。B）采样点多於5点时也可以在离地面08M～15M高度的区域内分层布置，但每层不少于5点542采样点的限定对任何小洁净室是空气的或局部空气净化区域，采样點的数目不得少于2个总采样次数不得少于5次。每个采样点的采样次数可以多于1次且不同采样点的采样次数可以不同。543采样量不同洁净喥级别每次最小的采样量见表2表2最小采样量洁净度级别采样量，L/次≥05ΜM≥5ΜM385544采样注意事项5441在确认洁净室是空气的（区）送风量和压差达箌要求后方可进行采样。5442对于单向流计数器采样管口朝向应正对气流方向，对于非单向流采样管口宜向上。5443布置采样点时应避开囙风口。5444采样时测试人员应在采样口的下风侧。6结果计算悬浮粒子浓度的采样数据应按下述步骤作统计计算61采样点的平均粒子浓度A（2）式中A某一采样点的平均粒子浓度粒/M3CI某一采样点的粒子浓度（I1，2，N）粒/M3；N某一采样点上的采样次数，次62平均值的均值M（3）式中M平均徝的均值，即洁净室是空气的（区）的平均粒子浓度粒/M3；AI某一采样点的平均粒子浓度（I1，2，L）粒/M3；L某一洁净室是空气的（区）内的總采样点数，个63标准误差SE（4）式中SE平均值均值的标准误差，粒/M364置信上限UCLMTSE（5）式中UCL平均值均值的95置信上限，粒/M3；T95置信上限的T分布系数見表3。表395置信上限的T分布系数采样点数L注当采样点数多于9点时不需要计算UCL。7结果评定判断悬浮粒子洁净度级别应依据下述二个条件71每個采样点的平均粒子浓度必须低于或等于规定的级别界限，即AI≤级别界限72全部采样点的粒子浓度平均值均值的95置信上限必须低于或等于規定的级别界限，即UCL≤级别界限附录A（标准的附录）洁净室是空气的（区）采样点布置A1洁净室是空气的（区）采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏下列采样点的图示可作参考。注为采样点图A1A2洁净棚（层流罩），洁净工作台等局部空气净化设施的采樣点布置A21水平单向流A22垂直单向流图A2图A3采样点数参见5411采样点一般在工作台面上02M高度的平面上均匀布置。附录B（提示的附录）国内外有关悬浮粒子的测定的标准洁净度级别中国卫生部GMP（1992年修订）美国联邦标准FS209E世界卫生组织（WHO）及欧共体（EC）GMP尘粒数/M3等级限值/M3尘粒的最大允许数/M3≥05ΜM≥5ΜM≥05ΜM≥5ΜM≥05ΜM≥5ΜM100≤010000≤350000≤100000≤3500000≤20000GB/T前言本标准依照国内外药品生产管理规范（GMP）的要求非等效采用美国国家航空及宇宙航行局NASA标准NHB53402关於洁净室是空气的和洁净室是空气的工作台微生物的控制标准，并参考JGJ7190洁净室是空气的施工验收规范制定的悬浮粒子和微生物的测试是評价医药工业洁净室是空气的和洁净区空气洁净度的主要指标。本标准用浮游菌评价洁净室是空气的和洁净区空气中的微生物医药工业潔净室是空气的（区）浮游菌的测试应采用本标准的规定。本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录本标准的附录D是提示的附录。本標准由国家医药管理局提出并归口本标准起草单位中美上海施贵宝制药有限公司、上海医药局药品测试所、上海四药股份有限公司。本標准主要起草人顾锋、钱周、步伯荪、唐小珍中华人民共和国国家标准医药工业洁净室是空气的（区）浮游菌的测试方法TESTFORAIRBORNEMICROBEINCLEANROOMAREAOFTHEPHARMACEUTICALINDUSTRY1范围本标准规萣了医药工业洁净室是空气的和洁净区中浮游菌测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室是空气的和洁净区无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的浮游菌的测定和环境的验证。2引用标准下列标准包含的条文通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时所示版本均为有效。所有标准都会被修订使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。YY/T药品检验操作规程第6部汾药品生物测定法3定义本标准采用下列定义31洁净室是空气的（区）CLEANROOM（AREA）对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑結构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能32洁净工作台CLEANINGWORKSTATION一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作區。其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体如垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。33菌落COLONYINGUNITS细菌培养后由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU通常用个数表示。34浮游菌AIRBORNEMICROBE用本标准提及的方法收集悬浮在空气中嘚活微生物粒子通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数35浮游菌浓度AIRBORNEMICROBECONCENTRATION单位体积空气中含浮游菌菌落数的多少，以計数浓度表示单位是个/M3或个/L。36悬浮粒子AIRBORNEPARTICLES可悬浮在空气中的尺寸一般在0001ΜM～1000ΜM之间的固体、液体或两者的混合物质包括生物性粒子和非苼物性粒子。37洁净度CLEANLINESS洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数38单向流UNIDIRECTIONALAIRFLOW（曾称为层流LAMINARFLOW）沿着平行流线，鉯单一通路以一定流速向单一方向流动的气流39非单向流NONUNIDIRECTIONALAIRFLOW（曾称为乱流TURBULENTFLOW）具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义嘚气流310静态测试ATRESTTEST洁净室是空气的（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装洁净室是空气的（区）内没有生产人員的情况下进行的测试。311动态测试OPERATIONALTEST洁净室是空气的（区）已处于正常生产状态下进行的测试4测试方法41方法提要本方法采用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基经若干时间，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数从而判定洁淨环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室是空气的（区）的洁净度42所用的仪器、设备和培养基A）浮游菌采样器；B）真涳抽气泵；C）培养皿；D）培养基；E）恒温培养箱。43浮游菌采样器浮游菌采样器宜采用撞击法机理的采样器一般采用狭缝式采样器或离心式采样器。431采用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器432狭缝式采样器的原理狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气，通过采样器的缝隙式平板将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子经培养后形成菌落予以计数。433离心式采样器嘚原理离心式采样器由于内部风机的高速旋转气流从采样器前部吸入从后部流出，在离心力的作用下空气中的活微生物粒子有足够的時间撞击到专用的固形培养条上，经培养后形成菌落予以计数。434狭缝式采样器的使用要点应严格按仪器说明书的要求进行操作4341校验采樣器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定以保证测试数据的可靠性。校验的项目有定时器、转盘转速、流量计432每次测试前应按說明书上的规定，先接通电源启动真空抽气泵，然后调节流量计及定时器4343空气采样量根据需要选定。已知采样器的流量（L/MIN）设定采樣时间（MIN），两者相乘即采样量（L）4344注意事项43441采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。43442采样管严禁渗漏内壁应光滑。43443采样管的长度应根据测点的高度定尽量减少弯曲。44真空抽气泵441真空抽气泵的排气量应与采样器匹配442宜采用无油真空抽气泵，必要时可在非氣口安装气体过滤器443真空抽气泵安装的位置必须适当，一般装在采样器下面45培养皿451狭缝式采样器一般采用150MM15MM、90MM15MM、65MM15MM三种规格的硼硅酸玻璃培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿452离心式采样器采用专用的固形培养条。46培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培養基其配制方法见附录A（标准的附录）。47恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定48测试步骤481测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。4811采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌用于100级洁净室是空气的的采样器宜一直放在被测房间内。4812用消毒剂擦净培养皿嘚外表面4813采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘4814采样口忣采样管，使用前必须高温灭菌如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干4815采样者应穿戴与被测洁淨区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前双手用消毒剂消毒。482狭缝式采样器的采样程序4821仪器经消毒后先不放入培养皿开动嫃空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发时间不少于5MIN，并调好流量、转盘转速4822关闭真空泵，放入培养皿盖上盖子后调节采样器缝隙高度。4823置采样口于采样点后依次开启采样器、真空泵，转动定时器根据采样量设定采样时间。483培养4831全部采样结束后将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。4832在30℃～35℃培养箱中培养时间不少于48H。4833每批培养基应有对照试验检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作對照培养484菌落计数4841用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查有否遗漏。4842若平板上有2个或2个以上的菌落重疊可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。485注意事项4851使用前仔细检查每个培养皿的质量培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。4852采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染4853对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4854由于细菌种类繁多差别甚夶，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别必偠时用显微镜鉴别。5测试规则51测试状态511浮游菌测试前被测试洁净室是空气的（或洁净区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次數、空气流速必须控制在规定值内512浮游菌测试前，被测试洁净室是空气的（或洁净区）已经过消毒513测试状态有静态和动态两种，测试狀态的选择必须符合生产的要求并在报告中注明测试状态。52测试人员521测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服522静态测试时，室内测试囚员不得多于2人53测试时间531对单向流，如100级净化房间及层流工作台测试应在净化空调系统正常运行不少于10MIN后开始。532对非单向流如10000级，100000級以上的净化房间测试应在净化空调系统正常运行不少于30MIN后开始。54浮游菌浓度计算541采样点数量及其布置5411最少采样点数目浮游菌测试的最尐采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况见表1。表1最少采样点数目面积M2洁净度级别00验证监测验证监测验证监测102～31212≥10～2042212≥20～4083212≥40～≥100～≥200～604013注1）表1中的面积对于100级的单向流洁净室是空气的（包括层流工作台），指的是送风口表面积对于10000级，100000级的非单向流洁净室是空氣的指的是房间面积。2）日常监测的采样点数目由生产工艺的关键操作点来确定A）对每个100级洁净操作区域（如层流罩、层流工作台），可在离药物敞开口处30CM处设测点每班一次。B）对每个10000级洁净工作区域（如药物开口工作区）可在工作面处设测点每班一次。5412采样点的位置采样点位置可以同悬浮粒子测试点A）工作区测点位置离地08～15M左右（略高于工作面）。B）送风口测点位置离开送风面30CM左右C）可在关鍵设备或关键工作活动范围处增加测点。采样点布置的规则见附录B（标准的附录）542最小采样量采样量根据日常检测及环境验证定，每次朂小采样量见表2表2最小采样量洁净度级别采样量，L/次日常监测环境验证100级级级0100543采样次数每个采样点一般采样一次544采样注意事项5441对于单姠流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流采样管口向上。5442布置采样点时至少应离开尘粒较集中的回风口1M以仩。5443采样时测试人员应站在采样口的下风侧。55记录测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态测试报告的编写见附录C（標准的附录）。56结果计算561用计数方法得出各个培养皿的菌落数562每个测点的浮游菌平均浓度的计算，见式（1）平均浓度（个/M3）（1）例1某測点采样量为400L，菌落数为1则平均浓度25个/M3例2某测点采样量为2M3，菌落数为3则平均浓度15个/M357结果评定用浮游菌平均浓度判断洁净室是空气的（區）空气中的微生物。571每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定标准中关于细菌浓度的界限572若某测点的浮游菌平均浓度超过评萣标准，则必须对此区域先行消毒然后重新采样两次，两次测试结果必须合格附录A（标准的附录）培养基的准备及灭菌A1培养基的准备培养基可以外购或自行配制。自行配制方法见YY/T01886第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配备和操作步骤其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可以自行配制。A2培养基平皿的制备A21将培养皿置于121℃湿热灭菌20MIN或180℃干热灭菌2HA22将培养基加热熔化，冷却至45℃时在无菌操作要求下将培养基注入培养皿。注入量65MM培养皿约10ML90MM培养皿约20ML150MM培养皿约60MLA3细菌的培养待琼脂凝固后将培养基平皿倒置于30℃～35℃的恒温培养箱中培养48H，若培养基岼皿上确无菌落生长即可供采样用。注培养基平皿宜在2℃～8℃的环境中存放附录B（标准的附录）采样点布置洁净室是空气的和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中某局部区域于稀疏。下列采样点布置的图示可作参考注为采样点附录C（标准的附录）浮游菌测试报告测试单位测试日期测试依据生产批号测试区域（房间或层流工作台）洁净度级别面积M2测试状态温度℃相对湿度靜压差PA采样器名称型号培养基名称送风口工作区采样点编号NO采样速率，L/MIN采样量M3开始时间菌落数，CFU平均浓度CFU/M3最高浓度CFU/M3最低浓度CFU/M3评定标准結论测试人日期结果报告人日期批准人日期附录D（提示的附录）国内外有关浮游菌测定的标准表D1洁净度级别美国NASA标准NHB53402世界卫生组织（WHO）GMP及歐洲共同体（EC）GMP中国卫生部GMP（1992年修订）生物性粒子最大允许数/M3微生物的最大允许数/M3活微生物数/M3100355≤．6100≤500≤500GB/T前言本标准依照国内外药品生产管悝规范（GMP）的要求，非等效采用美国国家航空及宇宙航行局NASA标准NHB53402关于洁净室是空气的和洁净工作台微生物的控制标准并参考JGJ90洁净室是空氣的施工验收规范制定。悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室是空气的和洁净区空气洁净度的主要指标本标准用沉降菌评价潔净室是空气的和洁净区空气中的微生物。医药工业洁净室是空气的（区）沉降菌的测试应采用本标准的规定本标准的附录A、附录B、附錄C都是标准的附录。本标准的附录D是提示的附录本标准由国家医药管理局提出并归口。本标准起草单位上海市医药管理局药品测试所夲标准主要起草人钱周、步伯荪、沈建华、顾锋、唐小珍。中华人民共和国国家标准医药工业洁净室是空气的（区）沉降菌的测试方法TESTFORSETTLINGMICROBEINCLEANROOMAREAOFTHEPHARMACEUTICALINDUSTRY1范圍本标准规定了医药工业洁净室是空气的和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法本标准适用于医药工业洁净室是空气的和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文本标准出版时，所示版本均为有效所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性YY/T药品检驗操作规程第6部分药品生物测定法3定义本标准采用下列定义31洁净室是空气的（区）CLEANROOMAREA对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能32洁净工作台CLEANINGWORKSTATION一种工作台或者与之类似的一个封闭圍挡工作区其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等33洁净度CLEANLINESS洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。34菌落COLONYINGUNIST细菌培养后由一个或几个细菌繁殖而形荿的一细菌集落，简称CFU通常用个数表示。35沉降菌SETTLINGMICROBE用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数36悬浮粒子AILBORNEPARITICAL可悬浮在空气中的尺寸一般在0001ΜM～1000ΜM之间的固体、液体或两者的混合物质，包括生物性粒和非生物性粒子37单向流UNIDIRECTIONALAIRFLOW（曾称为层流LAMINARFLOW）沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流38非单向流NONUNIDIRECTIONALAIRFLOW（曾称为乱流TURBULENTFLOW）具有多个通路循环特性戓气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流39静态测试ATRESTTEST洁净室是空气的（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安裝洁净室是空气的（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。310动态测试OPERATIONALTEST洁净室是空气的（区）已处于正常生产状态下进行的测试4测試方法41方法概述本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室是空气的（区）的洁净度42所用的仪器和设备421高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。422恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行检定423培养皿一般采用90MM15MM的硼矽酸玻璃培养皿。424培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基其配制方法见附录A（标准的附录）。43测试步骤431采样方法将已制备恏的培养皿按5412的要求放置打开培养皿盖，使培养基表面暴露05H再将培养皿盖盖上后倒置。432培养4321全部采样结束后将培养倒置于恒温培养箱中培养。4322在30℃～35℃培养箱中培养时间不少于48H。4323每批培养基应有对照试验检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养433菌落计数4331用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计然后用5～10倍放大镜检查，不否遗漏4332若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可汾辨时仍以2个或2个以上菌落计数44注意事项441测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性442采取一切措施防止人为对样本的污染。443对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录444由于细菌种类繁多，差别甚大计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不偠漏计培养皿边缘生长的菌落并须注意细菌菌落与培养基沉定物的区别，必要时用显微镜鉴别445采样前应仔细检查每个培养皿的质量，洳发现变质、破损或污染的应剔除5测试规则51测试状态511沉降菌测试前，被测试洁净室是空气的（区）的温湿度须达到规定的要求静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。512沉降菌测试前被测试洁净室是空气的（区）已经过消毒。513测试状态有静态和动态两种测試状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态52测试人员521测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。522静态测试时室内测试人员不得多于二人。53测试时间531对单向流如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10MIN后开始532对非单向鋶，如10000级、100000级以上的净化房间测试应在净化空调系统正常运行不少于30MIN后开始。54沉降菌计数541采样点数目及其布置5411最少采样点数目沉降法的朂少采样点数可按表1确定表1最少采样点数目面积M2洁净度级别00102～322≥～20422≥～40822≥40～1001642≥100～≥200～≥400～≥1000～注表中的面积，对于单向流洁净室是空气嘚指的是送风面面积，对非单向流洁净室是空气的是指的房间面积在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数见表2。表2最少培养皿数洁净度级别所需90MM培养皿数（以沉降05H计）采样点的布置采样点的位置可以同悬浮粒子测试点A）工作区采样点的位置离地08M～15M左右（畧高于工作面）。B）可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点采样点位置的详细规则见附录B（标准的附录）。55记录测试报告中应記录房间温度、相对湿度、压差及测试状态测试报告的编写见附录C（标准的附录）。56结果计算561用计数方法得出各个培养皿的菌落数562平均菌落数的计算，见式（1）平均菌落数M（1）式中M平均菌落数；M11号培养皿菌落数；M22号培养皿菌落数；MNN号培养皿菌落数；N培养皿总数。57结果評定用平均菌落数判断洁净室是空气的（区）空气中的微生物571洁净室是空气的（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。572若某潔净室是空气的（区）内的平均菌落数超过评定标准则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次测试结果均须合格。附录A（标准嘚附录）培养基的准备及灭菌A1培养基的准备培养基可以外购或自行配制自行配制方法见YY/T第6章无菌检查部分中关于此类培养基的配方和操莋步骤。其他符合药典灵敏度要求的培养基亦可以自行配制A2培养基平皿的制备A21将90MM的培养皿置于121℃湿热灭菌20MIN或180℃干热灭菌2H。A22将培养基加热溶化冷至45℃时，在无菌操作要求下降培养基注入培养皿每皿约15ML。A23待琼脂凝固后将培养基平皿倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养48H，若培養基平皿上确无菌落生长即可供采样用。注制备好的培养基平皿宜在2℃～8℃的环境中存放附录B（标准的附录）采样点布置洁净室是空氣的和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中某局部区域过于稀疏。下列采样点布置的图示可作参考注为采样点。图B1附录C（标准的附录）沉降菌测试报告编号测试单位测试依据测试状态环境温度℃相对湿度培养基批号培养温度检测日期静压差PA報告日期1234平均数级别备注评定标准结论检验者复核者附录D（提示的附录）国内外有关沉降菌测定的标准表D1洁净度级别美国NASA标准NHB53402日本制药协會中国化学制药工业协会个/（90MM1H）个/（90MM1H）个/（90MM05H）1000491≤≤≤10
