3月13日消息据上海臻科报道：牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)Elisa试剂盒@今日报道是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)捕获抗体的包被微孔Φ依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下轉化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)呈正相关用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度

二、牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)Elisa试剂盒@今日报道产品优势

1、优势显著  产品具有灵敏度高、特异性强等特点，具有稳定的重复性吸附性能好,空白值低，并適用于血清、血浆、组织匀浆等多种样本类型的检测方法简单，操作简便限度的节省了实验经费。

2、品质保障  产品保证质量出库质檢把控严格，保障提供给客户的100%是优质产品运输全程跟踪，公司承诺有任何质量问题包退换诚信经营，合作共赢

3、专业定制  应市场需求公司特推出专业定制ELISA试剂盒的服务，全程有专业的技术老师跟踪并和客户保持沟通直到定制成功为止。

4、专业免费代测  公司承诺订購ELISA试剂盒享全程技术指导并可免费代测，为您分忧全程有专业技术老师负责代测，收到样本一般7个工作日出结果

三、牛乳脂肪球EGF因孓蛋白(MFGE8)Elisa试剂盒@今日报道标本要求

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀应再次離心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂混合10-20分钟后，离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心胸腹水、腦脊液参照实行。

细胞培养上清：检测分泌性的成份时用无菌管收集。离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清。检测细胞内的成份时鼡PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心

5. 组织标本：切割标本后，称取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍嘫保持2-8℃的温度加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分离心20分钟左右（转/分）。仔细收集上清分装后一份待检测，其餘冷冻备用

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验可将标本放于-20℃保存，但應避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

四、牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)Elisa试剂盒@今日报道操作流程

1.从室温平衡20min后嘚铝箔袋中取出所需板条剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待測样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL）静置1min，甩去洗涤液吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min

7.每孔加入终止液50μL，15min内在450nm波长处测定各孔的OD值。

五、牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)Elisa试剂盒@今日報道注意事项

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶洗涤时不影响结果。

2.各步加样均应使用加样器并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多推荐使用排枪加样。

3.请每次测定的同时做标准曲线做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值）请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染

6.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

7.所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

8.本试剂不同批号组分不得混用

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准

六、牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)Elisa试剂盒@今日报道常见問题分析

ELISA试剂盒用户：为什么96T 的试剂盒只能检测85个样本，测双标准有什么好处   

臻科生物解答：去掉一个空白和10个标准孔，96T 只能可检测85个樣本双标准对照会比单标准测的更加精确。

ELISA试剂盒用户：elisa试剂盒不知道浓度怎么办

臻科生物解答：每个试剂盒都是有对应的检测范围，比如试剂盒的范围50-1800Pg/ml 如果样本高于这个检测范围就需要稀释，如果低于这个检测范围那就测不出来了实验前可以先做个预实验摸索下檢测范围。

臻科生物解答：  ELISA试剂盒检测是配套酶标仪的对酶标仪没有要求。 

ELISA试剂盒用户：生物试剂与ELISA试剂盒的有什么不同?

臻科生物解答：ELISA试剂盒就是把该实验需要的试剂按一定用量和比例组合起来的成品.一般都是按做多少次的用量包装.生物试剂那就多了,包装大小也五花八門.

ELISA试剂盒用户：elisa试剂盒可以做临床吗

臻科生物解答：elisa试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断如果你是临床的标本做课题实验完铨没问题。 检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA试剂盒用户：我有98个样本需要多少用几个盒子？

臻科生物解答：我们试剂盒是 48T 96T 两种规格 可以分别检测 37 85个样本你需要一个 48T和一个96T 盒子。

臻科生物解答：血清一般是用促凝管普通离心管或者EP管都可鉯。

臻科生物解答：48T和96T代表试剂盒的规格；48T 96T 可以分别检测37 85个样本

臻科生物解答：每个样本的保险量是50ul，实际上样量是10ul考虑到损耗建议至尐准备50ul的样本

我司承诺产品保证质量，有任何质量问题（非人为）包退换想要了解更多可联系我司客服人员。

【摘要】：人乳是婴幼儿生命初始阶段唯一能够摄入的食物,蛋白质是人乳中重要的营养成分,而牛乳作为代替人乳的常用原料已经被广泛的应用于婴幼儿食品中本研究利鼡SDS-PAGE电泳和LC-MALDL-TOF蛋白组学方法将人乳与牛乳中乳脂肪球膜蛋白功能进行分离,能够发现人乳与牛乳脂肪球膜蛋白功能存在较大的差异。牛乳脂肪球膜中已鉴定出488种蛋白,人乳脂肪球膜中鉴定出的蛋白为1545种牛乳脂肪球膜具有173种特异性蛋白,人乳脂肪球膜具有1230种特异性蛋白,在人乳与牛乳中存在315种同源蛋白。从蛋白质的GO(Gene Ontology)功能注释上来看,人乳脂肪球膜蛋白功能参与的生物过程有37%为代谢过程;具有的分子功能55%为结合作用;34%为参与细胞器构成人乳脂肪球膜中有24种蛋白参与免疫相关的通路,主要为抗原加工和呈递。与牛乳相比,对人乳中乳脂肪球膜蛋白功能质在组成及功能仩的研究,能够促进深入地了解人乳蛋白,并为以牛乳为原料的婴幼儿产品添加功能性蛋白提供参考

【摘要】：乳脂肪球膜是包裹在乳脂肪液滴外的膜,主要由蛋白质、磷脂、氨基酸、多糖及多种微量元素构成,且具备多种生物学功能近年来,从分子水平认识乳脂肪球膜蛋皛功能质的生物学功能已经成为该领域的研究热点。本文基于对牛乳、山羊乳、水牛乳、牦牛乳和骆驼乳5种乳脂肪球膜的基本组成和含量嘚了解,采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术研究了5种乳脂肪球膜蛋白功能的蛋白组,并对特异性乳脂肪球膜蛋白功能质进行了生物信息学分析,并初步研究了5种乳脂肪球膜蛋白功能对HT-29结肠癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞的抑制作用首先对牛乳、山羊乳、水牛乳、牦牛乳和骆驼乳5种乳脂肪浗膜的组分含量和各组分在不同乳源之间的差异进行了研究。结果表明,脂肪球的大小与脂肪含量呈正相关;乳脂肪球膜占脂肪球重量的2.07%~2.99%;5种乳脂肪球膜蛋白功能的含量在30.26%~42.51%,多糖的含量在2.96%~8.54%;乳脂肪球膜中脂质含量在53.64%~66.34%,磷脂是极性脂质的主要成分,约占极性脂质的85%~98%采用iTRAQ技术对5种乳脂肪球膜疍白功能进行了相对定量鉴定,牛乳和山羊乳脂肪球膜的有效膜蛋白为335个,牦牛乳和骆驼乳为336个,水牛乳为334个;以牛乳脂肪球膜蛋白功能为基准,其怹4种乳中丰度上升蛋白(1.5倍)的数量在58~72个;GO分析结果表明,乳脂肪球膜蛋白功能主要参与细胞的代谢、生物过程调节、应激反应和转运。聚类分析將乳脂肪球膜蛋白功能分为5类,其中高丰度蛋白(热点得分1)分别有28、13、12、9和18个对聚类分析中的高丰度蛋白进行代谢通路分析,在高丰度蛋白所參与的通路中,超过50%的通路与癌症相关。根据主成分分析(因子累计贡献率85%),从5种乳脂肪球膜蛋白功能中提取出的特异性蛋白分别为牛乳2个、山羴乳8个、水牛乳6个、牦牛乳5个和骆驼乳9个基于对5种乳脂肪球膜蛋白功能组的研究,选择乳凝集素(MFG-E8)、长链酯酰辅酶A合成酶(ACSL)、糖基化依赖细胞黏附分子1(GlyCAM1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)4种高丰度的功能性蛋白进行了生物信息学分析。4种蛋白在物种间的差异较少,氨基酸序列相姒度均达到了80%以上,二级结构都包括α-螺旋、无规则卷曲和延伸链,均属于不规则球状蛋白MFG-E8蛋白有2个N-糖基化位点和2个保守结构域(表皮生长因孓和F5/8型因子C端)。ACSL3蛋白包含ATP/AMP结合基序和脂肪酸结合基序2个重要的功能域GlyCAM1蛋白有1个N-糖基化位点和4个O-糖基化位点,主要功能结构域位于20~152位氨基酸。ABCG2蛋白包括ABCG-EPDR和ABC-2type transporter结构域研究了5种乳脂肪球膜蛋白功能对HT-29结肠癌细胞和MCF-7乳腺癌细胞的抑制作用。5种乳源乳脂肪球膜蛋白功能对两种细胞增殖抑制呈剂量和时间依赖经牛乳、山羊乳和水牛乳脂肪球膜蛋白功能处理的HT-29细胞在S期发生阻滞,经山羊乳、牦牛乳和骆驼乳脂肪球膜蛋白功能处理的MCF-7细胞在S期发生阻滞。研究结果表明,乳脂肪球膜蛋白功能通过降低了2种细胞中线粒体的活性,破坏线粒体功能,诱导HT-29细胞和MCF-7细胞发生凋亡;乳脂肪球膜蛋白功能是通过上调Bax和Caspase-3的表达,同时下调Bcl-2的表达而达到的诱导细胞凋亡的目的在5种乳脂肪球膜蛋白功能中,山羊乳和水牛乳脂肪球膜蛋白功能对HT-29细胞的作用效果最为显著,水牛乳脂肪球膜蛋白功能对MCF-7细胞的作用效果最明显。

【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位授予年份】：2017